Приложение 10. Инструкция по применению анти-D IgM моноклонального реагента для определения резус-принадлежности крови человека (Цоликлона анти-D Супер) ТУ 9398-206-27575295-94

Приложение 10

Инструкция *(10)
по применению анти-D IgM моноклонального реагента
для определения резус-принадлежности крови человека
(Цоликлона анти-D Супер) ТУ 9398-206-27575295-94
(утв. приказом Минздрава РФ от 9 января 1998 г. N 2)

1. Назначение

Цоликлон анти-D Супер предназначен для выявления антигена D системы резус в эритроцитах человека.

Порядок установления резус-принадлежности крови определен "Инструкцией по определению резус-принадлежности крови", утвержденной Министерством здравоохранения Российской Федерации в 1997 году и Методическими рекомендациями по определению резус-принадлежности крови, утвержденными ГНЦ РАМН 27 апреля 1994 года.

     В связи с тем, что IgM антитела не вызывают  агглютинации  некоторых

                                                            u

образцов  эритроцитов  со  слабовыраженным  D  антигеном  (D ),   образцы

донорской крови, которые при исследовании Цоликлоном  анти-D  Супер  были

определены как D-отрицательные, необходимо  дополнительно  тестировать  с

помощью  анти-D  реагентов,   содержащих   lgG-антитела   (поликлональной

сывороткой или моноклональным анти-D lgG реагентом).

2. Характеристика и основные свойства Цоликлона Анти-D Супер

Действующим началом Цоликлон Анти-D Супер являются моноклональные анти-D антитела, которые продуцируются гетерогибридомой, полученной в результате слияния человеческой лимфобластоидной линии с миеломной клеточной линией мыши.

Цоликлон Анти-D Супер изготовлен на основе культуральной жидкости, кондиционированной клетками-продуцентами антител Анти-D. Реагент не содержит антител иной специфичности и поэтому может быть использован для выявления D антигена в эритроцитах любой группы крови.

Моноклональные антитела принадлежат к одному классу иммуноглобулинов - IgM, полностью идентичны по структуре и биологической активности. Анти-D антитела класса М являются полными антителами, т.е. вызывают прямую агглютинацию эритроцитов, содержащих D антиген. Цоликлон Анти-D Супер может быть использован для выявления D антигена в любых вариантах прямой реакции агглютинации: на плоскости, в пробирках, в микроплате.

3. Определение D-антигена системы резус

Определение D-антигена производится в нативной крови, стабилизированной консервантом; в крови, взятой без консерванта; в крови, взятой из пальца.

3.1. Реакция агглютинации на плоскости

На пластину со смачиваемой поверхностью нанесите большую каплю (около 0,1 мл) реагента. Рядом поместите маленькую каплю (0,01-0,05 мл) исследуемой крови и смешайте кровь с реагентом. Наиболее крупная агглютиниция наблюдается при использовании эритроцитов в высокой концентрации. Реакция агглютинации начинает развиваться через 10-15 секунд, четко выраженная агглютинация наступает через 30-60 секунд. Использование подогретой до 37-40°С пластинки сокращает время наступления агглютинации. Результаты реакции учитывайте через три минуты. Пластинку после смешивания реагента с кровью рекомендуется покачивать не сразу, а через 20-30 секунд, что позволяет за это время развиться более полной крупнолепестковой агглютинации.

3.2. Реакция агглютинации в пробирках

В круглодонную пробирку внесите одну каплю (около 0,1 мл) реагента и добавьте одну каплю 5% суспензии исследуемых эритроцитов в физиологическом растворе. Содержимое пробирки тщательно перемешайте встряхиванием и инкубируйте 30 минут при комнатной температуре. После инкубации пробирку центрифугируйте при 1500-2000 оборотах в минуту в течение одной минуты. Мягко покачивая пробирку, отслоите осадок ото дна. При отрицательном результате осадок эритроцитов разбивается, образуя непрозрачную гомогенную суспензию. При положительном результате в пробирке видны агглютинаты на фоне прозрачной жидкости.

3.3 Реакции агглютинации в микроплате

В лунку 96-ячеечной круглодонной микроплаты внесите 0,05 мл реагента и 0,05 мл 2% суспензии исследуемых эритроцитов в физиологическом растворе (эритроциты предварительно дважды отмойте). Через 45-60 минут инкубации при комнатной температуре визуально оцените результат реакции по рисунку осадка эритроцитов на дне лунки: при отрицательном результате осадок эритроцитов собирается в точку, при положительном - имеет больший диаметр, располагается неравномерным слоем, имеет неровные или завернутые края.

4. Контроль специфичности

Для контроля специфичности при каждом исследовании (независимо от применяемой методики) необходимо использовать стандартные D-положительные и D-отрицательные эритроциты.

4. Форма выпуска

Цоликлон Анти-D Супер выпускается в жидкой форме во флаконах объемом 2,5 или 10 мл (1 мл содержит 10 доз). В качестве консерванта применяется азид натрия в конечной концентрации 0,1%

Срок хранения - один год в холодильнике при 2-8°С. Вскрытый флакон можно хранить в холодильнике в течение одного месяца в закрытом виде.

ГАРАНТ:

Нумерация пунктов сохранена в соответствии с источником документа

5. Рекламация

Основаниями для рекламации являются: отсутствие активности, неспецифичность, нарушение целостности флаконов, получение реагента с истекшим сроком годности или недостаточными сведениями.

При составлении рекламации необходимо указать дату получения, номер серии, причины, по которым реагент признан негодным, протокол с результатами проверки реагента. Вместе с рекламацией направляют 2-3 невскрытых флакона данной серии.

Рекламацию следует направить на предприятие-изготовитель.

"Инструкцию по применению анти-Rho(D) IgМ моноклонального реагента для определения резус-принадлежности крови человека (Цоликлона анти-D Супер)", утвержденную Управлением научных исследований МЗ и МП РФ 14 июля 1994 года, считать утратившей силу с момента утверждения данной инструкции.

Начальник Управления организации медицинской помощи населению

А.И.Вялков