Приложение 4. Инструкция (7) по применению Цоликлонов анти-А, анти-В и анти-АВ диагностических жидких для определения групп крови человека системы АВО (антитела моноклональные анти-А, анти-В, анти-АВ) ТУ 9398-205-27575295-94

Приложение 4

Инструкция *(7)
по применению Цоликлонов анти-А, анти-В и анти-АВ диагностических
жидких для определения групп крови человека системы АВО (антитела
моноклональные анти-А, анти-В, анти-АВ) ТУ 9398-205-27575295-94
(утв. приказом Минздрава РФ от 9 января 1998 г. N 2)

1. Назначение

Цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ предназначены для определения групп крови человека системы АВО в прямых реакциях гемагглютинации и применяются взамен или параллельно с поликлональными иммунными сыворотками.

2. Характеристика и основные свойства цоликлонов
анти-А, анти-В и анти-АВ

Моноклональные анти-А и анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М. Цоликлоны изготавливаются из асцитной жидкости мышей-носителей анти-А и анти-В гибридом. Цоликлон анти-АВ представляет собой смесь моноклональных анти-А и анти-В антител. Технология изготовления реагента исключает возможность его контаминации патогенными для человека вирусами.

3. Техника определения групп крови человека
системы АВО с помощью цоликлонов

Определение производится в нативной крови, взятой в консервант; в крови, взятой без консерванта, в том числе взятой из пальца. Используется метод прямой гемагглютинации на плоскости: и на пластине или планшете. Определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15 - 25°С.

3.1. Нанесите на планшет или пластину индивидуальными пипетками Цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями.

3.2. Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01 - 0,03 мл).

3.3. Смешайте кровь с реагентом.

3.4. Наблюдайте за ходом реакции с Цоликлонами визуально при легком покачивании пластины или планшета в течение трех минут. Агглютинация эритроцитов с Цоликлонами обычно наступает в первые 3-6 секунд, но наблюдение следует вести три минуты ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.

3.5. Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.

3.6. Интерпретация результатов реакции агглютинации исследуемой крови с Цоликлонами представлена в таблице.

Результат реакции* с Цоликлоном:			Исследуемая кровь принадлежит к группе**
анти-А	анти-В	анти-АВ
-	-	-	О(I)
+	-	+	A(II)
-	+	+	B(III)
+	+	+	AB(IV)

* Знаком плюс (+) обозначено наличие агглютинации, знаком минус (-) - отсутствие агглютинации.

** Окончательно АВО принадлежность устанавливается только по результатам перекрестного определения: антигенов А и В на эритроцитах и изогемагглютининов в сыворотке.

4. Контроль специфичности реакции агглютинации

В составе Цоликлонов нет высокомолекулярных добавок, способных вызвать неспецифическую полиагглютинацию эритроцитов, поэтому не требуется проведение контроля с растворителем. При положительном результате реакции агглютинации со всеми тремя Цоликлонами необходимо исключить спонтанную неспецифическую агглютинацию исследуемых эритроцитов. Для этого смешайте на плоскости одну каплю исследуемой крови (эритроцитов) с каплей физиологического раствора. Кровь можно отнести к группе АВ(IV) только при отсутствии агглютинации эритроцитов в физиологическом растворе.

5. Форма выпуска

Цоликлоны выпускаются в жидкой форме во флаконах объемом 5 - 10 мл. Цоликлон анти-А - красного цвета, анти-В - синего и анти-АВ - бесцветный. В качестве консерванта применяется азид натрия в конечной концентрации 0,1%.

6. Хранение

Срок хранения - два года при температуре 2 - 8°С. Вскрытый флакон можно хранить при температуре 2 - 8°С в закрытом виде в течение одного месяца.

7. Рекламация

Основаниями для рекламации являются: отсутствие активности, неспецифичность, нарушение целостности флакона, наличие хлопьев, получение реагента с истекшим сроком годности или недостаточными сведениями.

При составлении рекламации необходимо указать дату получения, номер серии, причины, по которым реагент признан негодным. Необходимо также приложить протокол с результатами проверки реагента. Вместе с рекламацией направляют 2 - 3 невскрытых флакона с Цоликлоном данной серии.

Рекламацию следует направить на предприятие-изготовитель.

"Инструкцию по применению Цолициклонов анти-А, анти-В и анти-АВ диагностических жидких для определения групп крови человека системы АВО (антитела моноклональные анти-А, анти-В, анти-АВ)", утвержденную Управлением научных исследований Минздравмедпрома России 17 марта 1995 года, считать утратившей силу с момента утверждения данной инструкции.

Начальник Управления

организации медицинской

помощи населению

А.И.Вялков

---------Составители инструкции: профессор И.Л.Чертков, директор ТОО "Гематолог" Г.Ю.Митерев, научные сотрудники Л.Н.Леменева, Н.И.Оловникова, Е.В.Белкина.