Приложение 9. Инструкция по применению Цоликлона анти-В диагностического жидкого для определения D антигена системы резус (Антитела моноклональные анти-D) ТУ 9398-215-27575295-95

Приложение 9

Инструкция *(9)
по применению Цоликлона анти-В диагностического жидкого
для определения D антигена системы резус
(Антитела моноклональные анти-D) ТУ 9398-215-27575295-95
(утв. приказом Минздрава РФ от 9 января 1998 г. N 2)

1. Назначение

Цоликлона анти-D предназначен для выявления D антигена системы резус в эритроцитах человека и применяется в серологических тестах взамен или параллельно с изоиммунной анти-D сывороткой.

Порядок установления резус-принадлежности крови определен "Инструкцией по определению резус-принадлежности крови", утвержденной Министерством здравоохранения Российской Федерации в 1997 году и Методическими рекомендациями по определению резус-принадлежности крови, утвержденными ГНЦ РАМН 27 апреля 1994 года.

2. Характеристика и основные свойства Цоликлона Анти-D

Действующим началом Цоликлона Анти-D являются моноклональные анти-D антитела, продуцируемые лимфобластонаной линией клеток человека, полученной из лимфоцитов донора, гипериммунного против D антигена. Антитела, продуцируемые клетками одного клона, являются моноклональными, принадлежат к одному классу иммуноглобулинов, полностью идентичны по структуре и биологической активности.

Поскольку линия клеток, секретирующих моноклональные анти-D антитела, получена из лимфоцитов здорового донора, исключена контаминация реагента патогенными вирусами (гепатит, СПИД и др.). Однако с исследуемыми образцами крови следует работать в перчатках во избежание заражения патогенными вирусами, передающимися через кровь.

Цоликлон анти-D представляет собой неразбавленную или разведенную солевым раствором культуральную жидкость, кондиционированную клетками - продуцентами антител. Анти-D моноклональные антитела принадлежат к иммуноглобулинам класса G (IgGl). Цоликлон Анти-D не содержит антител иной специфичности и поэтому может быть использован для выявления D антигена в эритроцитах любой группы крови.

Анти-D антитела, принадлежащие к иммуноглобулинам класса G (неполные антитела), не вызывают прямой агглютинации эритроцитов, содержащих D антиген, и могут быть использованы в реакции конглютинации с желатином, непрямом антиглобулиновом тесте (пробе Кумбса), в реакции агглютинации эритроцитов, обработанных протеолитическими ферментами, в том числе в автоматизированных системах типа "Группоматик".

3. Техника определения D-антигена системы резус

Определение D-антигена производится в нативной крови, стабилизированной с помощью применяемых консервантов, в крови, взятой без консерванта; в крови, взятой из пальца. Наиболее четкая реакция агглютинации наблюдается при использовании высокой концентрации эритроцитов. Заключение о присутствии D-антигена в исследуемых эритроцитах делают по наличию положительной реакции агглютинации.

3.1. Непрямой антиглобулиновый тест (непрямая проба Кумбса)

Является наиболее чувствительным методом выявления D антигена. Взвесь (2-3%) в физиологическом растворе трижды отмытых исследуемых эритроцитов помещают в круглодонную пробирку (0,1 мл взвеси эритроцитов) или 96-ячеечную круглодонную плату (0,05 мл/ячейку), добавляют равный объем Цоликлона и инкубируют в течение 45-60 минут при 37°С. Затем после однократного отмывания физиологическим раствором к осадку эритроцитов добавляют 0,05-0,1 мл антиглобулиновой сыворотки, тщательно перемешивают и немедленно или через 15-30 минут инкубации при комнатной температуре центрифугируют при 200 g в течение 35-20 секунд. Осадок мягко взвешивают и по наличию агглютинатов, выявляемых макро- или микроскопически, делают заключение о присутствии D антигена в исследуемых эритроцитах.

3.2. Реакция конглютинации с желатином

В агглютинационную пробирку вносят одну каплю (0,05-0,1 мл) свободных эритроцитов из сгустка свернувшейся крови или эритроцитов, отмытых от консерванта. Затем добавляют две капли (0,3-0,2 мл) 10% раствора желатина, предварительно прогретого при 45-50°С до разжижения, и одну каплю Цоликлона Анти-D. Суспензию тщательно перемешивают, инкубируют 10-15 минут в водяной бане или 30 минут в термостате при 48°С, прибавляют 5-6 мл физиологического раствора и после осторожного переворачивания пробирки визуально определяют наличие агглютинатов. Агглютинация эритроцитов свидетельствует о присутствии в них D антигена.

3.3 Реакция с препаратом на основе полиглюкина

Полиглюкин практически всегда вызывает неспецифическую агглютинацию D-отрицательных эритроцитов, поэтому невозможно объективное заключение об отсутствии D антигена или о наличии его слабого варианта в исследуемых эритроцитах. В связи с этим использование полиглюкина для моноклональных антител не рекомендуется.

3.4. Реакция агглютинации с эритроцитами, обработанными
протеолитическими ферментами

Цоликлон Анти-D, содержащий моноклональные антитела класса lgG, способен вызывать прямую агглютинацию D-положительных эритроцитов, обработанных такими протеолитическими ферментами как бромелин, папаин и др., и поэтому может применяться в автоматических системах типирования крови.

3.5. Контроль специфичности реакции агглютинации

Для контроля специфичности при каждом исследовании (независимо от применяемой методики исследования) необходимо использовать стандартные D-положительные и D-отрицательные эритроциты. Желательно также включение образцов со слабовыраженным D антигеном.

4. Форма выпуска

Цоликлон Анти-D выпускается в жидкой форме во флаконах объемом 5 или 10 мл (1 мл содержит 10 доз). В качестве консерванта применяется азид натрия в конечной концентрации 0,1%.

Срок хранения - два года в холодильнике при 2-8°С. Вскрытый флакон можно хранить в холодильнике в течение одного месяца в закрытом виде.

5. Рекламация

Основаниями для рекламации являются: отсутствие активности, неспецифичность, нарушение целостности флаконов, получение реагента с истекшим сроком годности или недостаточными сведениями.

При составлении рекламации необходимо указать дату получения, номер серии, причины, по которым реагент признан негодным, протокол с результатами проверки реагента. Вместе с рекламацией направляют 2-3 невскрытых флакона данной серии.

Рекламацию следует направить на предприятие-изготовитель.

"Инструкцию по применению Цоликлона анти-D диагностического жидкого для определения D антигена системы резус (Антитела моноклональные анти-D)", утвержденную Главным техническим Управлением Минздрава СССР 21 августа 1990 года, считать утратившей силу с момента утверждения данной инструкции.

Начальник Управления организации медицинской помощи населению

А.И.Вялков