Приложение N 3. Инструкция по бактериологическому обследованию на выявление носителей патогенного стафилококка и проведению санации

Приложение N 3
к приказу Минздрава СССР
от 2 августа 1978 г. N 720

Инструкция
по бактериологическому обследованию на выявление носителей
патогенного стафилококка и проведению санации *

1. Общие положения

1.1. Инструкция предназначена:

Для руководителей:

- лечебно-профилактических учреждений, в составе которых имеются отделения хирургического профиля, палаты или отделения реанимации и интенсивной терапии;

- для работников санитарно-эпидемиологических станций;

- для работников бактериологических лабораторий.

1.2. В последние два десятилетия наблюдается рост внутрибольничных инфекций, одним из возбудителей которых является патогенный стафилококк.

1.3. По принятой классификации семейством Micrococaccas включает 3 рода: Micrococaccas, Staphylococcus, Planococcus

1.4. Для медицинской практики наиболее важно дифференцировать стафилококки от микрококков, которые имеют сходную со стафилококком морфологию клеток и нередко выделяются из одних и тех же объектов.

1.5. Род Syaphylococcus состоит из трех видов: St.aureus, St.epidermidis, St.saprophyticus.

1.6. В настоящее время четко показано этиологическое значение при гнойно-септических заболеваниях вида St.aureus.

Роль вида St.epidermidis значительно меньше и возможна у ослабленных больных, лиц, страдающих диабетом, получающих большие дозы рентгено - и радиотерапии, а также при заболеваниях мочевыводящих путей.

1.7. Распространение стафилококковой инфекции происходит воздушно-капельным и контактными путями.

1.8. Основным источником стафилококковой инфекции в лечебно-профилактических учреждениях является человек/больной или здоровый бактерионоситель) из числа:

- больных гнойно-септическими острыми и хроническими процессами,

- медицинского и обслуживающего персонала (с локализацией возбудителя на слизистых оболочках носа, зева, на коже и в раневой поверхности).

1.9. Одной из мер профилактики внутрибольничных осложнений является своевременная изоляция больных и выявление носителей патогенного стафилококка с последующей санацией.

2. Организационные мероприятия по выявлению бактерионосителей

2.1. Каждый сотрудник, поступающий на работу в лечебно-профилактическое учреждение, проходит полный медицинский осмотр и включающий обследование отоларингологом и стоматологом.

2.2. Работающий персонал должен быть взят под диспансерное наблюдение для своевременного выявления и излечения кариозных зубов, хронических воспалительных очагов в верхних дыхательных путях и ротовой полости, субтрофических состояний слизистых носа и зева, а также своевременного выявления носительства персоналом St.aureus (1 раз в 6 месяцев - плановое обследование).

2.3. При проведении плановых бактериологических обследований обязательным является исследование слизи из передних отделов носа. Исследование слизи зева может проводиться выборочно.Забор материала проводит старшая сестра лечебно-профилактического учреждения. Результаты плановых бактериологических исследований и обследований ЛОРспециалистом и стоматологом должны четко фиксироваться в индивидуальной карте сотрудника лечебно-профилактического учреждения.

2.4. Приготовление санирующих средств осуществляют аптеки лечебно-профилактических учреждений.

2.5. Перед проведением санации носители проходят обязательную консультацию у специалистов отоларингологов, т.н. в определенной проценте они страдают аллергическими или хроническими заболеваниями верхних дыхательных путей, тонзиллитами и т.д., требующими обязательного специального лечения.

3. Исследование отделяемого верхних дыхательных путей

3.1. Обязательному бактериологическому исследованию подвергают слизь из передних отделов носа; исследование слизи из зева проводят по показаниям, прежде всего при наличии воспалительных процессов в зеве.

3.2. Забор материала из передних отделов носа осуществля.т одним стерильным ватным тампоном из обеих половин носа. Сбор материала из зева проводят с поверхности миндалин стерильным ватным тампоном, либо путем смыва. В последнем случае обследуемый полощет горло 5,0 мл стерильного физиологического раствора. Смыв собирают в стерильную колбу (желательно с бусами), закрывают пробкой и встряхивают в течение 10-15 минут до получения однородной суспензии. При этом обязательным условием является взятие материала натощак (не ранее, чем через 2-3 часа после приема пищи).

3.3. Посев исследуемого материала на питательные среды должен проводиться не позже, чем через 2 часа после его забора.

3.4. Для первичного посева предпочтение должно быть отдано желточно-солевому агару (ЖСА) или желточно-молочно-солевой среде. Одновременно параллельный посев на молочно-солевой агар проводить не целесообразно. При целенаправленных исследованиях на стафилококк применение кровяных сред не обязательно.

3.5. Посев проводят тампоном, которым забирали материал. Тампон следует многократно поворачивать, чтобы перенести на питательную среду максимальное количество взятого материала. При посеве смыва из зева на питательную среду наносят 0,1 мл жидкости и растирают по поверхности среды шпателем.

3.6. При исследовании слизи из верхних дыхательных путей предварительное подращивание смывов в солевом или сахарном бульоне проводить не следует. Такое подращивание не позволит иметь истинного представления о массивности обсеменения верхних дыхательных путей, что имеет значение при характеристике источников стафилококковой инфекции.

4. Определение массивности обсеменения верхних дыхательных путей

4.1. Взятый тампоном материал помещают в пробирку с 0,5 мл стерильного физиологического раствора. Тампон ополаскивают в жидкости встряхиванием пробирки в течение 10 минут, затем отжимают о внутренние стенки пробирки и удаляют. Жидкость многократно перемешивают пипеткой. Отдельной пипеткой на чашку с БСА наносят 0,1 мл исследуемого смыва и тщательно растирают шпателем.Чашки оставляют в термостате на 2 суток после чего подсчитывают общее число выросших колоний и отдельно колоний различной морфологии. Особое внимание обращают на колонии, обладающие лецитовителлазной активностью.

4.2. Определение числа снятых на тампон колоний проводится следующим образом: если на чашке с ЖСА после посева 0,1 мл смывной жидкости выросло 15 однородных колоний, а идентификация двух колоний позволила отнести их к St.aureus одного и того же фаготипа, то это дает основание считать все выросшие на чашке колонии, идентичные по морфологии и пигменту, принадлежащими к St.aureus одного фаготипа.

Пример расчета: в 0,1 мл содержалось 15 колоний следовательно во всем объеме смыва будет 15х10х5=750 колоний или 7,5х10(2).

                                                                       2

     4.3.  Массивность   применения,   выражающаяся   показателем   10

микробных клеток, снимаемых на  тампон,  является  показателем  умеренной

обсемененности  верхних  дыхательных   путей.   При   таком   обсеменении

выделение возбудителя во внешнюю среду, как правило, не имеет места.

                                                           3

     4.4.  Обсемененность,  выражающаяся  показателем   10      и   более

микробных клеток,  снимаемых  на  тампон,  является  показателем  высокой

обсемененности, при которой происходит выделение возбудителя  во  внешнюю

среду, как  при  различных  экспираторных  актах,  так  и  при  спокойном

дыхании.

4.5. В качестве ориентировочного определения массивности обсеменения верхних дыхательных путей можно пользоваться оценкой роста колоний на чашках при прямом посеве в крестах, обозначая:

++++ сливной рост(*)

+++ сплошной рост изолированных колоний(*)

++ значительный рост (до 100 колоний)

+ единичные колонии (10-25)

5. Схема бактериологического исследования на стафилококк

5.1. Первый день. Посев на элективные среды (желточно-солевой, молочно-солевой или молочно-желточно-солевой агар). Засеянные среды выдерживают в термостате при 37 град.С в течение 2 суток, либо одни сутки в термостате и дополнительно 24 часа на свету при комнатной температуре.

5.2. Второй - третий день. Просмотр чашек, фиксация в журнале характера и массивности роста. На вышеуказанных средах стафилококк растет в виде круглых, блестящих, маслянистых, выпуклых, пигментированных колоний. На средах, содержащих желток, St.aureus выделений от человека, в 60-70% случаев образует радужный венчик вокруг колонии (положительная лецитовителлазная реакция). Стафилококки животного происхождения дают положительную лецитовителлазную реакцию в 5-10% случаев.

5.3. Отвивка на скошенный агар для дальнейшего исследован не менее 2-х колоний, подозрительных на стафилококк. Для исследования отвиваются прежде всего колонии, дающие положительную лецитовителлазную реакцию. При отсутствии на чашках таких колоний дальнейшем исследованию подвергают пигментированные колонии, схожие по морфологии со стафилококком. При одновременном наличии на чашках колоний стафилококка, отличающихся по пигменту, следует отвивать не менее двух колоний различного вида; пробирки с посевом помещают в термостат при 37 град.С 18-20 часов.

     Примечание: * - сливной и сплошной рост соответствует, как  правило,

                           3

массивности обсеменения 10     и  выше  микробных  клеток,  снимаемых  на

тампон.

5.4. Четвертый день. После суточной инкубации у выделенных штаммов проверяют морфологию, тинкториальные свойства (окраска по Граму) и наличие плазмокоагулирующей активности. Следует отметить, что характер роста культуры на скошенном агаре в ряде случаев дает возможность "предвидеть" принадлежность ее к виду St.aureus или St.epidermidis. Первые, как правило, дают обильный равномерный, сочный рост, вторые - очень скудный и неравномерный рост по ходу посева. Окраска по Граму проводится общепринятым методом. Под микроскопом окрашенные по Граму стафилококки имеют вид фиолетово-синих кокков, располагающихся гроздьями или небольшими кучками ("кружево"). Плазмокоагулирующая активность проверяются в реакции коагуляции плазмы (РКП).

5.5. С учетом результатов РКП и лецитовителлазной активности в 70-75% случаев, на четвертый день исследования может быть подтверждена принадлежность выделенного штамма к виду St.aureus и выдан соответствующий ответ. Возможные варианты сочетаний результатов отделения плазмокоагулирущей и лецитовителлазной активности представлены на схеме 1.

5.6. Если культура обладает плазмокоагулирующей и лецитовителлазной активностью, выдается ответ о выделении St.aureus без проведения дополнительных исследований. Если культура обладает только плазмокоагулирующей или только лецитовителлазной активностью, то для окончательного ответа требуется определение других признаков патогенности (ферментация маннита в анаэробных условиях - АФМ или ДНКазной активности). В этих случаях ответ выдается в зависимости от результатов, полученных при определении названных признаков.

5.7. Если культура не обладает ни плазмокоагулирующей, ни лецитовителлазной активностью и выделяется из слизи верхних дыхательных путей практически здоровых лиц, то может быть выдан ответ о выделении St.epidermidis без проведения дополнительных исследований. Однако, следует помнить, что в 1-2% случаев речь может идти о выделении культуры St.aureus, лишенной основного видового признака - способности коагулировать плазму.

5.8. Определение антибиограммы проводится только после выделения чистой культуры по показаниям (выбор способа лечения и т.д.). Выделение культуры St.aureus подлежат фаготипированию.

В случае необходимости на 4-й день исследования может быть поставлена реакция определения ДНКазной активности или анаэробной ферментации маннита.

5.9. Пятый день. Учет результатов фаготипирования, определения чувствительности к антибиотикам, ДНКазной активности. Окончательная выдача ответа.

6
. Санация бактерионосителей

6.1. Для санации персонала (ежедневной) необходимо использовать следующие санирующие средства (фурациллин 1:5000, риванол 1:5000, 1% борная кислота, марганцевокислый калий (розовокрасный раствор), Люголя (водный или на глицерине), настои листьев эвкалипта, лизоцим, стафиллококковый бактериофаг. (Приложение 1) .

6.2. Для санации персонала в период эпидемиологического благополучия необходимо использовать гексахлорофен (1%), трибаск(3%), хлорофиллипт. (Приложение 1).

6.3. Для получения наиболее эффективных результатов санации бактерионосителей следует проводить смену санирующих средств через каждые 7 дней.

6.4. В период эпидемиологического неблагополучия (вспышка ОРЗ, подъем заболеваемости внутрибольничными инфекциями, значительная обсемененность стафилококками предметов окружающей среды и т.п.) в лечебно-профилактических учреждениях следует санировать весь персонал учреждения одномоментно.

6.5. В тех случаях, когда невозможно добиться санацией снижения или полного избавления от носительства стафилококка, необходимо настаивать на правильном ношении маски, закрывающей рот, нос и волосы. При этом необходимо иметь график ношения масок и проводить смену масок каждые три часа.

6.6. При отсутствии положительных результатов при лечении хронических воспалительных заболеваний верхних дыхательных путей и полости рта медицинских работников переводят на другую работу.

Схема видовой идентификации стафилококков

Признаки патогенности	РКП	ЛВА	определение других признаков патоген- ности	Выдается ответ: выделен
	-	-	не обязательно	S.epidermides
	+	+	не обязательно	S.aureus
	-	+	АСН или ДНК если + если -	S.aureus S.epidermides
	+	-	АСН или ДНК если + если АСМ или ДНК-	S.aureus S.epidermides

Условные обозначения:

РКП - реакция плазмы; ЛВА - лецитовителлазная активность;

АСМ - анаэробное сбраживание маннита; ДНК - дезоксирибонуклеазная активность;

++ положительный результат; - отрицательный результат.