Приложение 4. Методики испытания аллергенов и бакпрепаратов

1.1. Методики изучения сенсибилизирующих свойств

Определение немедленной аллергии связано с использованием методов, выявляющих реагиноподобные антитела. Информация может быть получена путем воспроизведения одной из общепринятых схем анафилаксии у морских свинок. Для сенсибилизации используют модели с учетом путей и схем введения аллергенов в организм больного. Поскольку аллергены, предназначенные для специфической иммунотерапии, вводят многократно, для сенсибилизации можно рекомендовать следующую схему: препарат вводят трехкратно с интервалом в 1 сут. подкожно. Разрешающую инъекцию проводят внутривенно или внутрисердечно спустя 2-3 нед. после последней инъекции.

Для регистрации гиперчувствительности замедленного типа используют феномен изменения массы конечностей белых мышей. Животных сенсибилизируют путем трехкратного с интервалом в 3 сут. внутрибрюшинного введения аллергена в дозах, рекомендуемых для применения в практике (но не более 0,5 мл) или путем однократного введения в подушечки лап концентрированной формы аллергена. Спустя 7 сут. после заключительной инъекции делают разрешающее введение аллергена в объеме 0,05 мл в подушечку одной из задних лап, а во вторую - 0,05 мл разводящей жидкости для аллергенов. Уровень специфической воспалительной реакции оценивают по разнице в массе конечностей.

1.2. Оценка специфической активности

Для сенсибилизации морских свинок можно использовать одну из общепринятых схем: однократное введение в подушечки лап концентрированной формы аллергена, содержание белка в которой многократно превышает таковое в препаратах, рекомендуемых для практического применения, в смеси с равным объемом полного адъюванта Фрейнда. Постановку кожных проб осуществляют спустя 14-21 сут. после сенсибилизирующей инъекции.

Метод активной анафилаксии с последующей десенсибилизацией: морских свинок сенсибилизируют по описанной выше схеме для диагностических аллергенов. Спустя 14-21 сут. проводят десенсибилизацию путем повторных подкожных введений возрастающих доз одноименного аллергена (25-100 % к сенсибилизирующей дозе). Кратность и интервалы введения определяют экспериментальным путем. Для разрешающей инъекции используют внутривенное введение аллергена в дозе, равной последней десенсибилизирующей дозе. Десенсибилизированные животные слабо реагируют на разрешающее введение аллергена. Сенсибилизированные морские свинки, не подвергшиеся десенсибилизации (контроль), реагируют на разрешающее введение аллергена развитием анафилактического шока.

2.1. Определение терапевтической эффективности бактериофага при лечении экспериментальной бактериальной инфекции

Группу животных (мышей массой 18-20 г) заражают внутрибрюшинно соответствующими бактериями от 3-100 ЛД50. Фаготерапию проводят ежедневно внутрибрюшинно с указанием содержания фаговых частиц в вводимой дозе. В качестве препарата сравнения следует использовать питательную среду, на которой готовился изучаемый препарат бактериофага. Наблюдение в течение 30 дней с регистрацией живых и павших животных в опыте и контроле. Критериями оценки эффективности фаготерапии экспериментальной бактериальной инфекции является:

- выживаемость зараженных животных;

- обсемененность внутренних органов зараженных животных, определяемых методом отпечатков.