Приложение. Инструкция по получению изоиммунных сывороток антирезус от доноров

Приложение

к приказу по Минздраву СССР

от 2 сентября 1970 г. N 590

Инструкция
по получению изоиммунных сывороток антирезус от доноров

Отбор доноров для иммунизации

При иммунизации доноров резус-антигеном следует помнить о возможных нежелательных последствиях для лиц обоего пола, и особенно, для женщин. У иммунизированных женщин, при последующих беременностях, могут быть выкидыши и другие патологические беременности; для женщин и мужчин после иммунизации возникает опасность развития посттрансфузионного осложнения в случае переливания им резус-положительной крови. Поэтому доноры, подлежащие иммунизации, должны быть отобраны по следующим признакам: из женщин-доноров можно иммунизировать только тех, у которых не должно быть беременностей (пожилой возраст, бесплодие и др.). Мужчины-доноры могут быть любого возраста. Доноры, поставленные в известность о сущности иммунизации, должны дать свое согласие на иммунизацию в письменной форме.

При произведенной иммунизации донору должна быть выдана справка о том, что при необходимости переливания крови ему следует делать подбор крови по реакции Кумбса.

Перед иммунизацией доноры должны пройти врачебное обследование согласно инструкции по донорству и в последующем находиться под систематическим наблюдением врача.

Для получения антирезусных сывороток к отдельным антигенам системы резус следует отбирать преимущественно резус-отрицательных доноров или лиц, в эритроцитах которых отсутствует тот тип антигена, которым проводится иммунизация.

Группа крови иммунизированного донора может быть любой, но желательно, группы АВ (IV), что позволит получить универсальную антирезусную сыворотку необходимую для определения резус-принадлежности экспресс-методом.

Перед иммунизацией кровь иммунизированных доноров должна быть исследована на наличие или отсутствие различных форм резус-антител.

Для получения антирезусных сывороток можно также иммунизировать лиц, сенсибилизированных к резус-антигену.

Выбор антигена для иммунизации

Антигеном должны служить эритроциты группы 0/1/ или одноименной с группой крови реципиента (будущего донора иммунной сыворотки), имеющие наиболее высокий титр резус фактора.

Наибольшей иммуногенностью среди антигенов системы "Резус" обладают факторы Д/Rho/ и С /rh'/, поэтому для практической работы, в первую очередь, необходимо иметь антирезусные сыворотки анти-Д /Rho / и анти-ДС /Rh /. Необходимо также получение и монотиповых антирезусных сывороток: анти-С /rh'/, анти-Е /rh"/, анти-Hr (анти-с, анти-е).

В таблице N 1 приводятся возможные соотношения между антигенами крови иммунизируемого донора и антигенами крови, используемой для иммунизации, а также ожидаемые типы антител в сыворотке, которая будет получена.

Антиген всегда готовится накануне иммунизации. Кровь консервируется на любом из общепринятых консервирующих растворов.

Методика иммнузиации и реиммунизации

Инъекции антигена производятся в условиях строгого соблюдения асептики. Для лиц, не сенсибилизированных к резус-фактору, рекомендуется следующая методика иммунизации для получения сыворотки анти-Д и анти-ДС.

Процесс иммунизации состоит из 2-х циклов продолжительностью около 5 месяцев.

1 цикл: 6 внутривенных инъекций антигена в количестве - 1-ая - 10 мл крови, последующие 5 инъекций - по 5 мл с интервалами между ними 3-4 дня. В конце первого цикла иммунизации у всех доноров берется по 5 мл крови из вены для проверки на наличие в сыворотке антител к антигенам системы Rh - Hr.

После 6 инъекций дается перерыв в 4 месяца и начинается 2 цикл иммунизации, состоящий из 3 внутривенных инъекций крови по 5 мл на каждую, с интервалами в 3-4 дня. Перед началом 2-го цикла у всех доноров снова берется по 5 мл крови для проверки сыворотки на наличие резус-антител.

Таблица

Антигенный состав крови иммунизируемого донора и эритроцитов, используемых для иммунизации

 /---------------------------------------------------------------------\

 |     Иммунизируемый донор        |    Эритроциты     |     Ожидаемая |

 |                                 |    (антиген)      |     сыворотка |

 |---------------------------------+-------------------+---------------|

 |Д /Rho/ - отрицательные          |                   |               |

 |                                 |                   |               |

 |cde /rh/                         |                   |               |

 |Cde /rh'/                        |    cDe /Rho/      |     анти-Д    |

 |cdE /rh"/                        |                   |               |

 |---------------------------------+-------------------+---------------|

 |C /rh'/ - отрицательные          |                   |               |

 |cde /rh/, cdE /rh"/              |    Cde /rh'/      |               |

 |---------------------------------+-------------------|               |

 |                                 |    CDe /Rh'o/     |               |

 |cDe /Rho/                        |    CDE /Rh'o, rh"/|     анти-С    |

 |cDE /Rh"o/                       |    Cde /rh'/      |               |

 |---------------------------------+-------------------+---------------|

 |E /rh"/ - отрицательные          |                   |               |

 |cde /rh/ Cde /rh'/               |    cdE /rh"/      |               |

 |---------------------------------+-------------------|               |

 |cDe /Rho/                        |    cDE /Rh"o/     |     анти-Е    |

 |                                 |    cdE /rh"/      |               |

 |CDe /Rh'o/                       |    CDE /Rh'o rh"/ |               |

 |---------------------------------+-------------------+---------------|

 |c /hr'/ - отрицательные          |                   |               |

 |CDe /Rh'o/                       |     cde /rh/      |     анти-с    |

 |CDe /rh'/                        |                   |               |

 |---------------------------------+-------------------+---------------|

 |e/hr"/ - отрицательные           |                   |               |

 |cdE /rh"/                        |     cde /rh/      |     анти-е    |

 |cDE /Rh"о/                       |                   |               |

 \---------------------------------------------------------------------/

Момент выявления резус-антител в сыворотке иммунизированных доноров колеблется от 4-х месяцев до 1 года и более от начала иммунизации. Титр антител может быть в пределах от 1 : 16 до 1 : 32 000.

Донорам, у которых за оба цикла иммунизации антитела не вырабатывались, через 6 месяцев следует провести повторный курс иммунизации. Если и после 2-го курса иммунизации резус-антитела не будут выявлены, донор от иммунизации отстраняется.

Для сохранения резус-антител в крови иммунных доноров и дальнейшего повышения их титра, донорам необходимо постоянно проводить дополнительные инъекции антигена (реиммунизацию). Такие дополнительные инъекции следует делать трехкратно, по 2-3 мл крови на каждую, с интервалом в 2-3 дня, внутривенно, каждые 3 месяца.

Если к иммунизации резус-антигеном привлекаются лица, ранее сенсибилизированные к нему (предыдущими беременностями или гемотрансфузиями), но с низким титром резус-антител, то их иммунизацию следует проводить по типу реиммунизации, т.е. начинать с трехкратных внутривенных введений антигена по 2-3 мл на каждую инъекцию, с интервалами в 2-3 дня, один раз в 3 месяца.

Иммунизация доноров является процессом длительным, систематическим, требующим проведения многократных циклов реиммунизации в течение нескольких лет.

Описанная методика вполне гарантирует получение сыворотки антирезус с неполными антителами типа анти-Д и анти-ДС высокого титра примерно у 70% иммунизированных доноров.

Вредного влияния иммунизации на здоровье донора не отмечалось.

Получение и испытание сывороток

При испытании сывороток на наличие резус-антител из пробных порций крови применяются различные иммуногематологические методы исследования: пробирочный - для обнаружения полных (солевых) антител, на чашках Петри или с применением желатины для обнаружения неполных (белковых) агглютинирующих антител, непрямой текст Кумбса - для выявления неполных блокирующих антител, а также используются методы с применением ферментативных веществ для выявления малоактивных антител.

Определение полных и неполных антител проводится согласно инструкции (см. "Сборник инструкций по изосерологии", 1965, стр.54-65).

При выявлении антител в пробных порциях крови в титре не ниже 1 : 32, от донора берется полная доза крови на сыворотку (без стабилизатора). Взятая кровь сохраняется в течение суток до полного отстаивания сыворотки, после чего сыворотка сливается и сгусток сохраняется при +4 - +10°С до полной ретракции. Дополнительное скопление сыворотки сливается повторно в следующие два дня. Сыворотку консервируют борной кислотой до 3% насыщения, а затем испытывают на специфичность и активность.

Для испытания сывороток следует располагать стандартными эритроцитами группы 0/1/ всех разновидностей: Д/Rho/, C/rh'/, E/rh"/, Hr по нескольку образцов.

После установления специфичности сывороток определяется титр антител по эритроцитам стандартного донора. Активными сыворотками можно считать такие, которые в разведении сывороткой-разводителем имеют титр не ниже, чем 1 : 32 и четкую агглютинацию. Титр антирезус-агглютининов в сыворотке иммунизированных доноров чаще значительно выше. Необходимо учитывать возможность наличия у доноров так называемых "скрытых" или гипериммунных антител, которые выявляются лишь при разведении сывороток антирезус в 30-50 и более раз.

Хранение иммунных донорских сывороток

Законсервированные сыворотки разливаются в ампулы по 1-2 мл. и хранятся в запаянном виде в рефрижераторе.

На этикетках ампул обозначается группа крови данного донора, серия, титр, количество и срок годности сыворотки.

Проверка сывороток, имеющих титр выше 1 : 64 показала, что они сохраняют свою активность более одного года.

Оплата донорам при иммунизации их производится согласно приказу по Министерству здравоохранения СССР N 590 от 2 сентября 1970 г.

-------------------------------------------------------------------------

* Инструкция разработана Ленинградским научно-исследовательским институтом гематологии и переливания крови Министерства здравоохранения РСФСР.