Приложение N 1. Оценка эффективности биологически активных добавок к пище, применяемых в качестве ингибиторов образования N-нитрозаминов

Приложение N 1
к разделу "Парафармацевтики"

Оценка эффективности биологически активных добавок к пище, применяемых в качестве ингибиторов образования N-нитрозаминов

Известно, что наличие в пищевых продуктах азотсодержащих соединений (аминов, амидов, алкилмочевин и др.), а также нитратов и нитритов может приводить к образованию канцерогенных N-нитрозаминов как в пищевом продукте, так и в организме, причем компоненты, входящие в состав пищевого продукта, могут усиливать, замедлять или полностью ингибировать этот процесс. БАД к пище, являющиеся в основном высокоактивными соединениями, могут играть важную роль как в экзогенном, так и в эндогенном образовании канцерогенных N-нитрозаминов. В связи с этим оценка эффективности применяемых БАД к пище как ингибиторов образования канцерогенных N-нитрозаминов имеет важное значение.

Оценка эффективности ингибирования нитрозирования
в условиях IN VITRO

В среду, состоящую из 5 мл натурального желудочного сока рН 0,8 - 1,0, 0,5 мл водного раствора нитрита натрия (концентрация 30 мг/мл) и 0,5 мл диэтиламина (концентрация 46,7 мг/мл), вносят 1 мл раствора БАД к пище (БАД к пище растворяется в соответствующем растворителе, концентрация БАД выбирается в зависимости от рекомендуемой дозировки), энергично перемешивают до полного растворения, доводят рН раствора до 4,5 добавлением 0,1 н раствора соляной кислоты или 0,1 н раствора гидроокиси натрия. Контрольный опыт проводят аналогично, но вместо раствора БАД к смеси желудочного сока и предшественников нитрозаминов добавляется 1 мл соответствующего растворителя. Смеси (опыт и контроль) термостатируются при 37° С в течение 30 мин. Реакцию останавливают добавлением 0,1 н раствора гидроокиси натрия (рН 8-9). Образовавшиеся нитрозамины извлекают из смеси экстракцией свежеперегнанным метиленхлоридом.

Объединенные экстракты высушивают прокаленным сульфатом магния, концентрируют и проводят идентификацию и количественное определение нитрозаминов хемилюминисцентным методом (80) и (41).

Оценка эффективности ингибирования нитрозирования
в условиях IN VIVO

Вид животных	Количество групп животных	Исходная масса живот- ных, г	Количество живот- ных в группе	Название групп животных
крысы, самцы	2	100 - 150	10	контроль опыт

Крысы обеих групп (контроль и опыт) находятся на полусинтетическом рационе. Каждому животному контрольной и опытной группы натощак вводят желудочным зондом последовательно по 1 мл водных растворов нитрита натрия (в пересчете на нитрит ион) и диэтиламина в дозах соответственно 15 и 24 мг/кг массы крысы. Животным опытной группы помимо предшественников вводят 1 мл БАД к пище. Животным контрольной группы 1 мл соответствующего растворителя, используемого для растворения БАД к пище. Ровно через 30 мин после введения растворов всех животных забивают, отделяют желудок вместе с содержимым, помещают в жидкий азот. Анализ N-нитрозаминов осуществляют хемилюминисцентным методом (81) и (41).

Нитрозопролиновый тест

Вид животных	Количество групп животных	Исходная масса живот- ных, г	Количество живот- ных в группе	Название групп животных
крысы, самцы	2	100-150	10	контроль опыт

Крысы обеих групп находятся на полусинтетическом рационе.

Контроль - крысам натощак вводят 1 мл водных растворов нитрита натрия и пролина в дозах соответственно 15 и 50 мг/кг массы тела животного. Опыт - крысам помимо нитрита натрия и пролина вводят натощак 1 мл раствора БАД к пище. Крыс обеих групп помещают в обменные клетки на сутки для сбора мочи, предварительно в сосуды для сбора мочи вносят 1 мл 30%-ного раствора гидроксида натрия. Собранную мочу замораживают до минус 18° С и хранят до проведения анализа на содержание нитрозопролина (не более 10 дней). Содержание нитрозопролина определяют по (79).