Приложение N 3. Методические указания по лабораторной диагностике полиомиелита

Приложение N 3

к приказу Минздрава СССР

от 21 июля 1989 г. N 430

Методические указания
по лабораторной диагностике полиомиелита

Лабораторное подтверждение диагноза полиомиелит осуществляется вирусологическими и серологическими методами исследования материалов, взятых от обследуемых лиц.

Правильное и своевременное взятие, хранение и доставка материалов в вирусологические лаборатории на исследования имеют первостепенное значение для получения достоверных результатов.

В летальных случаях вирусологическому исследованию подвергают помимо фекальных проб, материал, взятый из спинного и продолговатого мозга.

Наиболее часто удается выделение вируса полиомиелита из проб фекалий и носоглоточных смывов, особенно, взятых в первые дни болезни.

Методы, используемые для диагностики полиомиелита, разработаны и применяются длительное время, они достаточно стандартны, при правильном применении надежны и могут быть выполнены в вирусологических лабораториях среднего уровня. Обязательным условием для сотрудников диагностических лабораторий является владение техникой и наличие возможностей работы с клеточными культурами. Вирусологически лабораторный диагноз полиомиелита основывается на выделении вируса и его идентификации, проводимых в чувствительных клеточных культурах, обезьяньего или человеческого происхождения: первичная культура клеток почек обезьян, перевиваемые клеточные линии Vero, RD, Hela, Hep-2, Fl и др. Для идентификации выделенного из обследуемых материалов вирусного агента, что определяется появлением в культуре ткани специфического цитопатогенного эффекта, необходимо наличие типоспецифических антиполиомиелитных сывороток, с помощью которых в реакции нейтрализации в чувствительной культуре определяется принадлежность обнаруженного агента к вирусу полиомиелита, а также иммунотип вируса.

Диагностические антиполиомиелитные типоспецифические сыворотки выпускаются Институтом полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН СССР.

Серологическое подтверждение диагноза "полиомиелит" основывается на обнаружение не менее, чем 4-х кратного нарастания титра антител в пробах парных сывороток крови обследуемых. Первая кровь берется как можно раньше от начала заболевания, вторая 3-4 недели спустя после первой. Антитела определяются по реакции нейтрализации в чувствительной культуре клеток. Для постановки этой реакции также необходимы типоспецифические антиполиомиелитные сыворотки и, кроме того, прототипные штаммы вируса полиомиелита I, II и III типов, которые можно получить в Институте полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН СССР. Методы, используемые для серологического подтверждения диагноза "Полиомиелит" применяются и для изучения состояния коллективного иммунитета.

Помимо вышеуказанных достаточно простых и доступных методов лабораторной диагностики полиомиелита существуют и разрабатываются более тонкие методы, дающие информацию об антигенных особенностях и природе выделяемых штаммов с использованием моноклональных антител, олигонуклеотидное картирование, определение нуклеотидных последовательностей.