Приложение N 2. Определение физиологического возраста и зараженности самок малярийных комаров

Приложение N 2

Определение физиологического возраста и зараженности самок малярийных комаров

Под физиологическим возрастом понимают число гонотрофических циклов проделанных самкой. Определение физиологического возраста проводят путем вскрытия самок и исследования яичников под микроскопом. Определение физиологического возраста можно провести 2 способами:

- Самок, отложивших яйца отличают по состоянию трахейной системы яичников и желудка (вскрытие и выделение яичников и желудка проводят в воде). У неклавших самок и еще не пивших крови трахеолы яичников и желудка свернуты в клубочки. После принятия крови и по мере роста фолликулов клубочки трахеи распрямляются.

- Число проделанных самкой гонотрофических циклов определяют по числу расширений на яйцеводах (вскрытие проводят в физиологическом растворе). Расширения образуются за счет редуцирующихся фолликулов. С каждым циклом плодовитость самок падает и число "считающих" яйцеводов увеличивается. Для точного определения необходимо просмотреть почти все яйцеводы яичника и найти среди них трубочки с наибольшим числом расширений. Например, если у самки найдены яйцеводы с 4 расширениями, это значит, что она проделала не менее 4 циклов. Не исключено, что эти самки старше (если при первой откладке яиц работали все яйцеводы).

Сборы комаров для определения физиологического возраста следует проводить весь сезон их активности, а окончательные данные целесообразно представить графически в виде среднедекадных показателей. В течение декады необходимо вскрыть не менее 100 самок. Полученные материалы позволяют определить наиболее опасные периоды сезона, оценить влияние климатических факторов и эффективность проводимых мероприятий.

Определение доли самок, зараженных малярийным паразитом проводят путем вскрытия самок (можно использовать тех же особей, которых вскрывали для определения физиологического возраста) и выделения желудка. Желудок помещают в каплю 0,5%-ного раствора NaCl, накрывают покровным стеклом и просматривают под микроскопом его заднюю часть. У зараженных самок на поверхности желудка образуются ооцисты. Образование ооцист происходит при температуре 25°С - в течение 2 суток. Количество ооцист зависит от количества гаметоцитов в крови людей, у которых самка пила кровь. После разрыва ооцисты спорозоиты проникают в слюнные железы комара. Обнаружить их можно вычленив на препарате голову самки со слюнными железами, которые помещают в 0,65%-ный раствор NaCl под покровное стекло. Спорозоиты видны на препарате.

Спорозоитный и ооцистный индекс (% комаров со спорозоитами и ооцистами от количества исследованных самок) являются показателями интенсивности передачи малярии. Даже при высокой заболеваемости людей находки зараженных комаров крайне редки (1 на десятки тысяч вскрытых), поэтому проведение таких исследований в России нецелесообразно.