Методические указания к постановке исследований для обоснования санитарных стандартов вредных веществ в воздухе рабочей зоны (утв. Главным государственным санитарным врачом СССР 4 апреля 1980 г. N 2163-80)

Общие положения

В соответствии с ГОСТ 12.1.007-76 "ССБТ. Вредные вещества. Классификации и общие требования безопасности" предусмотрено три вида санитарного ограничения содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны:

1. Ориентировочные безопасные уровни воздействия (ОБУВ).

2. Предельно-допустимые концентрации (ПДК).

3. Тесты экспозиции.

Цель настоящих методических указаний - способствовать получению однородных материалов, а также выбору оптимального объема исследований, необходимых для обоснования ПДК веществ в воздухе рабочей зоны.

Предельно-допустимые концентрации вредных веществ в воздухе рабочей зоны - такие концентрации, которые при ежедневной (кроме выходных дней) работе в течение 8 часов или при другой продолжительности, но не более 41 раза в неделю, в течение всего рабочего стажа не могут вызвать заболеваний или отклонений в состоянии здоровья, обнаруживаемых современными методами исследований в процессе работы или в отдаленные сроки жизни настоящего и последующих поколений.

ПДК в воздухе рабочей зоны должны быть установлены для химических соединений, обладающих вредным действием, которые могут находиться в воздухе рабочей зоны в виде газов, паров, аэрозолей, а также смеси паров и аэрозоля.

Определяется максимально разовая и для высококумулятивных веществ - среднесменная концентрация. Степень кумулятивности определяется для каждого вещества путем определения коэффициента кумуляции, зоны биологического и хронического действия, а при корректировке ПДК - по результатам повторных клинико-гигиенических наблюдений.

Материалы по обоснованию ПДК вредных веществ апробируются секцией по установлению санитарных стандартов содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны Проблемной комиссии "Научные основы гигиены труда и профпатологии".

Величина норматива с указанием класса опасности по ГОСТ 12.1.007-76 "ССБТ. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности" от имени Проблемной комиссии представляется на утверждение в Министерство здравоохранения СССР.

В работе по санитарной стандартизации следует руководствоваться следующими принципами:

1) исходить из приоритета медицинских показаний перед технической достижимостью сегодняшнего дня и другими технико-экономическими критериями;

2) обеспечить опережение разработки нормативов внедрению в народное хозяйство новых химических соединений.

Гигиеническое нормирование основывается на признании принципа пороговости всех типов действия химических соединений (в том числе мутагенного и канцерогенного) на целостный организм и должно учитывать необходимость комплексного подхода к установлению порогов вредного действия.

Гигиеническое нормирование новых химических веществ проводится в три этапа:

1. Обоснование ориентировочных безопасных уровней воздействия (ОБУВ), которое проводится в соответствии с "Методическими указаниями по применению расчетного метода обоснования ОБУВ вредных веществ в воздухе рабочей зоны", утвержденными Главным государственным санитарным врачом СССР, N 1599-77 от 02.02.77;

2) обоснование ПДК, которое выполняется в соответствии с настоящими методическими указаниями;

3) корректирование ПДК путем сравнения условий труда работающих и состояния их здоровья.

Первый этап приурочивается к периоду лабораторной разработки новых соединений.

Второй этап - к периоду полузаводских испытаний и проектированию производств.

Третий этап выполняется после внедрения веществ в производство в сроки, устанавливаемые в зависимости от токсикологической характеристики веществ и гигиенической характеристики производства, но не позднее 3 - 5 лет с момента внедрения.

Предлагаемая программа исследований (последовательность, объем, методы и т.д.) не должна связывать творческой инициативы научных коллективов и отдельных научных сотрудников в смысле привлечения и использования дополнительных и особенно новых адекватных методов.

Исследования в каждом конкретном случае следует проводить в соответствии с характером действия веществ*(1), степенью изученности других веществ, близких к нему по химическому строению и физико-химическим свойствам, и рядом других факторов.

Целесообразно сокращение объема исследований по обоснованию ПДК веществ в следующих случаях:

1) при принадлежности вещества к гомологическому ряду, представители которого имеют утвержденную величину ПДК для воздуха рабочей зоны;

2) при принадлежности веществ к изученному классу соединений с известным механизмом действия;

3) для веществ с установленными в законодательном порядке санитарными нормативами в атмосфере населенных мест, в воде и других средах по показателям общей токсичности;

4) при наличии соответствующего метода ускоренного обоснования ПДК.

К ускоренным методам обоснования ПДК вредных веществ в воздухе рабочей зоны относятся методы, позволяющие на современном уровне знаний сократить полную программу по обоснованию ПДК вредных веществ без ущерба для токсичности определения величины ПДК.

Установленная с их помощью ПДК вредного вещества в воздухе рабочей зоны отвечает всем требованиям, предъявляемым к ПДК согласно ГОСТ 12.1.005-76 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования".

ГАРАНТ:

См. ГОСТ 12.1.005-88 "Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны", утвержденный постановлением Госстандарта СССР от 29 сентября 1988 г. N 3388

Ускоренный метод обоснования ПДК вредных веществ в воздухе рабочей зоны включает определение необходимых и достаточных в каждом конкретном случае параметров таксикометрии веществ, устанавливаемых в соответствии с настоящими методическими указаниями, регистрацию патогенетически значимых реакций организма в ранние сроки интоксикации и расчет величины ПДК с помощью интерполяции и экстраполяции в рядах соединений, близких по химической структуре, физико-химическим свойствам и биологическому действию.

Конкретные методы ускоренного гигиенического нормирования вредных веществ в воздухе рабочей зоны утверждаются МЗ СССР на основании представления секции по установлению санитарных стандартов вредных веществ в воздухе рабочей зоны Проблемной комиссии "Научные основы, гигиены труда и профессиональной патологии".

Во всех случаях важно иметь данные о сравнительной токсичности изучаемого вещества с близкими по химическому строению и физико-химическим свойствам веществами, для которых в законодательном порядке утверждены ПДК.

Токсикологическому исследованию в полном объеме подвергаются:

- вещества, подлежащие широкому внедрению*(2) в практику;

- вещества, относящиеся к неизученным или мало изученным классам соединений;

- вещества, опасные в плане развития отдаленных и необратимых эффектов.

Для обоснования ПДК и других профилактических мероприятий в эксперименте на животных необходимы следующие сведения:

1. Условия производства и применения вещества;

2. Данные о химическом строении и физико-химических свойствах;

3. Токсичность и характер действия вещества при однократном воздействии на организм;

4. Порог вредного действия при однократном поступлении вещества в организм;

5. Кумулятивная способность вещества при повторном воздействии на организм;

6. Порог вредного действия при хроническом поступлении вещества на организм;

7. Обоснование коэффициента запаса;

8. Исследование местного раздражающего и кожнорезорбтивного действия вещества.

1. Условия производства и применения вещества

Представляются сведения о способе производства и областях применения; дается характеристика производственной среды (в том числе концентрации вещества в воздухе на опытных и полузаводских установках). Описываются условия поступления вещества в воздух и его агрегатное состояние в воздухе.

2. Данные о химическом строении и физико-химических свойствах вещества

Необходимо иметь структурную формулу вещества, данные о молекулярной массе, плотности, точке кипения (плавления), упругости паров при 20°С, стойкости (гидролиз, окисление и т.д.) и возможных продуктах превращения в воздухе. Следует указать растворимость в воде, жирах и других средах. Желательно привести коэффициент растворимости паров в воде, показатель преломления, поверхностное натяжение, энергию разрыва связи и др.

Обязательно наличие метода количественного определения вещества в воздухе, отвечающего требованиям ГОСТ 12.1.005-76 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования".

ГАРАНТ:

См. ГОСТ 12.1.005-88 "Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны", утвержденный постановлением Госстандарта СССР от 29 сентября 1988 г. N 3388

3. Токсичность и характер действия веществ при однократном воздействии на организм

Вещество изучается при следующих путях поступления в организм: при вдыхании, введении в желудок, нанесении на кожу. При изучении сравнительной токсичности возможно введение веществ в брюшную полость.

В опытах на животных (белых мышах массой 18 - 24 г) определяется концентрация (доза), вызывающая гибель 50% подопытных животных (CL_50 при экспозиции 2 часа, ДL_50), с доверительными границами. В случае использования белых крыс (масса 180 - 240 г) и др. видов животных - экспозиция 4 часа. Максимально вводимая доза в желудок - 10 г/кг.

Для неизвестных и мало изученных классов веществ необходимо определение сравнительной видовой чувствительности на 4 видах лабораторных грызунов (возможно применение метода "одной точки"), для остальных веществ - на 2 видах.

Представляются подробные сведения о количестве животных в каждой группе (на каждую концентрацию, дозу - не менее 6), величинах испытанных концентраций (доз), сроках гибели животных в течение 2 недель. Желательно использование животных обоего пола.

При определении CL_50 и ДL_50 регистрируют характер токсического действия вещества, подробно описывают картину отравления и морфологических изменений в органах и тканях.

При определении токсичности веществ при ингаляционном отравлении рекомендуются следующие условия: а) предпочтителен динамический способ затравок; б) в эксперименте должно исследоваться влияние вещества в том же агрегатном состоянии, которое имеет место в воздухе рабочей зоны.

При малой стабильности химического соединения в воздухе и образовании при этом вторичных вредных продуктов следует ориентироваться на ингредиент, являющийся характерным для данной смеси или ведущим в клинической картине отравления.

Должен производиться регулярный контроль реальных концентраций в зоне дыхания животных химическими или физическими методами, а также температуры и влажности воздуха.

Введение вещества в желудок производится через 3 часа после кормления в чистом виде или в водном растворе, в растительном масле, индифферентном растворителе (полиэтиленгликоле и т.п.), в виде эмульсий или суспензий в крахмале, полиэтиленгликоле и т.п. Вводимый объем для белых мышей не должен превышать 1 мл и для крыс - 5 мл. Кормление животных производится через 3 часа после введения вещества.

4. Порог вредного действия (Lim_ac) при однократном поступлении вещества в организм

При однократном воздействии устанавливаются пороги вредного действия по интегральным (неспецифическим) показателям (Lim_ac) и специфическим показателям, характеризующим состояние отдельных органов и систем организма (Lim_acsp).

Соотношение между порогом вредного действия, установленным по интегральным показателям, и минимальной концентрацией, вызывающей избирательный эффект, служит мерой избирательности действия вещества.

     Z   = Lim   / Lim  sp

      sp      ac      ac

Для определения Lim_ac, а также Lim_acsp используется не менее двух показателей. Оценка действия веществ на генеративную функцию (гонадотропное, эмбриотропное, генетическое действие) проводится в соответствии с методическими рекомендациями "Методы экспериментального исследования по установлению порогов действия промышленных ядов на генеративную функцию с целью гигиенического нормирования", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР N 1741-77 от 10.07.77.

Изучение влияния веществ на сердечно-сосудистую систему выполняется согласно "Методическим указаниям по проведению исследований по экспериментальной оценке действия вредных веществ на сердечно-сосудистую систему с целью гигиенического нормирования", утвержденным заместителем Главного государственного санитарного врача СССР N 1969-79 от 19.03.79.

Исследования проводятся не менее чем на двух видах животных. Желательно применение не только грызунов, но также лабораторных видов плотоядных и всеядных животных. Экспозиция - 2 часа для мышей, 4 часа - для других видов животных.

Должно быть применено не менее трех концентраций. Разрыв между концентрациями определяет степень токсичности вещества и его кумулятивные свойства (обычно разрыв составляет от 5 до 10 раз).

Статистическая группа для мелких животных должна быть не менее 12 особей. В зависимости от вариабельности показателя и степени точности исследования необходимое количество животных следует вычислять по формуле (см. "Рекомендации по статистической обработке результатов экспериментально-токсикологических исследований". М., 1965; А.М.Мерков, Л.Е.Поляков. "Санитарная статистика". Л., 1974).

В отдельных случаях при проведении опытов на крупных лабораторных животных при сравнении с фоном допускается использование группы из шести животных.

Целесообразно оценивать состояние организма с учетом скорости развития реакции на протяжении восьми дней, выполняя обследования животных в день затравки, а также на 2, 4 и 8-й день после нее. При этом следует учитывать максимальное отклонение величины исследуемого показателя.

Желательно при гарантии полной безопасности проведение исследований на людях-добровольцах (Приложение 2).

Должны быть представлены первичные данные опытов в виде таблиц и результаты статистической обработки. Целесообразно вычисление Lim_ac как вероятностной величины.

Исследование раздражающего действия веществ проводится по специальной программе, включающей определение порога раздражающего действия вещества по комплексу показателей (см. "Методические подходы к определению порога раздражающего действия промышленных ядов", Н.Г.Иванов "Гигиена труда и профзаболевания", 1978, N 2, с. 26 - 30).

5. Кумулятивная способность вещества при повторном воздействии на организм

Наиболее простыми методами выявления кумулятивных свойств веществ являются методы Лима и соавт. (Lim at аl., 1969) и Ю.С.Кагана и В.В.Станкевича (1964) - ежедневное воздействие, начиная с 1/10 ДL_50.

Целесообразно определение кумулятивных свойств на уровне порога острого действия (ежедневное воздействие в долях Lim_ac).

В случае, если ДL_50 более 10 г/кг, коэффициент определяется на уровне эффективной дозы.

На основании полученных данных вычисляют коэффициент кумуляции. При оценке способности вещества к кумуляции следует также учитывать величину зоны хронического и биологического действия.

6. Порог вредного действия при хроническом поступлении веществ в организм

Задачей исследований является изучение хронической интоксикации и выявление минимальной (пороговой) концентрации, вызывающей гигиенически значимые изменения интегральных или специфических показателей при хроническом отравлении.

Опыты проводятся на белых крысах, а при выраженных различиях видовой чувствительности и на более чувствительном виде животных; экспозиция по 4 часа в день, 5 раз в неделю на протяжении 4 месяцев.

Выбор концентраций в хроническом эксперименте должен основываться на знании свойств веществ (быстрое обезвреживание или способность к кумуляции и др.), а также на данных о сравнительной токсичности близких по строению и характеру действия соединений.

Исследуются вещества в 2 - 3 концентрациях с установлением пороговой и недействующей.

В том случае, если в течение первых месяцев развиваются патологические изменения, затравка может быть прекращена. Должны быть указаны средняя взвешенная концентрация в каждой камере, ее стандартное отклонение, ошибка, коэффициент вариабельности и т.д.

Исследование хронического действия проводится на одинаковых по количеству подопытных группах с соответствующим контролем. Группы должны быть равноценны по основным показателям. Подопытные и контрольные грунты определяются методом случайной выборки (жеребьевкой).

Должен быть применен комплекс функциональных, биохимических, морфологических (желательно морфометрических) и гистологических, а также токсикокинетических и др. показателей, связанных с типом действия яда.

Каждый тест испытывается не менее чем на 12 мелких и шести крупных животных.

Возможно исследование нескольких показателей на одной и той же группе в том случае, если снятие одного показателя не влияет на результаты другого. После применения экстремальных нагрузок животные из эксперимента выводятся.

Общее минимальное количество животных, используемых на каждую концентрацию, должно быть не менее 36 - 48.

В течение хронического опыта исследования состояния животных проводятся в динамике. Первое обследование должно проводиться через 1 - 2 недели (но не после выходного дня). Дальнейшие обследования проводятся ежемесячно.

По окончании хронического эксперимента часть подопытных и контрольных животных забивается для гистологического исследования. На оставшихся в живых - прослеживается восстановительный период (не менее 1 месяца). Критерии вредности при установлении порога хронического действия рассмотрены и приложении 1. Целесообразно вычисление Lim_ch как вероятностной величины.

7. Обоснование коэффициента запаса

При переходе от пороговой концентрации в хроническом опыте к ПДК необходимо правильно выбрать коэффициент запаса. При определении коэффициента запаса (отношение минимально действующей концентрации в хроническом опыте к ПДК) надлежит исходить из следующих положений. Коэффициент запаса должен увеличиваться:

1) с увеличением абсолютной токсичности;

2) с увеличением КВИО;

3) с уменьшением зоны острого действия;

4) с увеличением кумулятивных свойств (коэффициента кумуляции, зоны хронического действия, зоны биологического действия);

5) при значительных различиях в видовой чувствительности подопытных животных;

6) при выраженном кожно-резорбтивном действии (для веществ, находящихся в газовой фазе).

Решение в каждом конкретном случае зависит от особенностей действия яда, от адекватности и чувствительности показателей, избранных для определения минимально действующей концентрации. В обычных случаях коэффициент запаса не должен быть менее 3 и не должен превышать 20.

8. Исследование местного раздражающего и кожно-резорбтивного действия веществ

Изучение местного раздражающего действия и резорбции веществ через неповрежденную кожу проводится в соответствии с методическими указаниями "Оценка воздействия вредных химических соединений на кожные покровы и обоснование предельно-допустимых уровней загрязнения кожи", утвержденными зам. Главного государственного санитарного врача СССР N 2102-74 от 01.12.79 г.

При исследовании местного действия веществ на слизистые оболочки глаза изучаемый продукт закапывают в конъюнктивальный мешок глаза кролика в количестве 1 - 2 капель. Твердые вещества вносят в количестве 50 мг (дисперсность частиц до 10 мк). После внесения на 1 мин прижимают слезноносовой канал у внутреннего глаза. Внесение вещества проводят однократно.

Регистрируют появление и выраженность гиперемии, отечность и инъекцию сосудов склеры и роговицы. Ежедневно проводят наблюдения за прозрачностью роговицы визуально либо при помощи офтальмоскопа с боковым освещением или щелевой лампы и др. Обращают внимание на состояние век. Оценку местного действия производят по характеру конъюнктивита (поверхностный, глубокий), кератита и т.п.

9. Качество лабораторных животных

Во всех работах по исследованию токсичности химических соединений должны указываться вид, линия (популяция) лабораторных животных, из какого питомника получены (или собственной разводки), пол, исходная масса тела, пищевой рацион, сезон, в который проводилась каждая серия эксперимента, условия размещения животных.

Основные токсикологические исследования проводятся на животных разных видов (обязательно один из видов - крысы). Предпочтение отдается гибридным линиям, относительно стабильным популяциям (например, для крыс - Wistar и др.). Линейные животные обязательны для отдельных видов экспериментов (бластомогенез и др.).

При приеме животных из питомников должны запрашиваться следующие сведения:

- какой линии принадлежит партия животных;

- соответствие массы тела и возраста животных в зависимости от пола;

- общая характеристика принятой системы разведения, происхождения колоний (популяции);

- сведения о выявлении латентных инфекций, скрытой патологии;

- сведения об использовании в кормах питомника биологически активных добавок (антибиотиков, стимуляторов роста и т. д.);

- использование дезинфекционных и инсектицидных препаратов;

- по возможности необходимо избегать длительной транспортировки животных;

- при отсутствии близко расположенного питомника обеспечивать соответствующие условия транспортировки животных и соблюдение карантинных правил;

- до начала эксперимента животные должны выдержать карантин в течение двух недель и быть освидетельствованы ветврачом на предмет пригодности их использования в опыте, что следует оформить соответствующим актом;

- все животные должны быть тщательно осмотрены (шерсть, слизистые, общее поведение животных и т. д.);

- более подробно должны быть исследованы 5 - 10% животных из поступившей партии;

- минимальный набор показателей должен включать: тщательный досмотр, регистрацию общего поведения животных (ориентировочные поведенческие реакции), морфологический состав периферической крови (содержание гемоглобина, количество лейкоцитов), простейшие иммунологические реакции (число колоний при отпечатках с кожи)*(3), патоморфологию внутренних органов (макроскопия)*(4). Оценка полученных результатов проводится в соответствии с современными представлениями о "норме".

Ветеринарный надзор должен осуществляться ежемесячно применительно к животным, находящимся в хроническом опыте, и регистрироваться в специально заведенном для этой цели журнале. Павшие (не по условиям эксперимента) животные должны быть тщательно проанализированы. В случае подозрения должны быть отправлены на бактериологический анализ в целях своевременного выявления инфекций в виварии.

10. Требования к содержанию животных

За основу таких требований к вивариям следует принять "Санитарные правила по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев)", изданных Минздравом СССР, М., 1973 (утверждены Главным государственным санитарным врачом СССР 6 апреля 1973 г., N 1045-73). Важнейшим требованием является то, чтобы виварии не находились в промышленной санитарно-защитной зоне химических предприятий.

Воздух вивария должен контролироваться на содержание аммиака. В качестве предельно-допустимого содержания аммиака в воздухе вивария можно рекомендовать величину ПДК на аммиак для воздуха атмосферы населенных мест (максимально разовую и среднесуточную) 0,2 мг/м3. Для систематического контроля за состоянием атмосферы вивария следует иметь журнал, в котором ежедневно должны регистрироваться температура и влажность и не реже 1 раза в неделю данные о содержании аммиака и бактериальной обсемененности воздуха. Во всех помещениях вивария должны быть бактерицидные лампы, должен строго соблюдаться график их работы. Животные должны содержаться в условиях оптимального температурно-влажностного режима.

При необходимости должны быть оборудованы кондиционеры. Рационы кормления животных следует установить согласно приказу министра здравоохранения СССР от 10 марта 1966 года N 163 и приложению к данному приказу. Следить за витаминной обеспеченностью животных в течение всего года.

Дезинфекция и дезинсекция клеток и помещений должна осуществляться с учетом предотвращения влияния на животных токсических химических веществ.

Категорически запрещается проводить затравку животных в помещениях, где они содержатся.

11. Затравочная техника

Затравка животных должна осуществляться в отдельном помещении, находящемся при виварии.

Затравка животных должна быть физиологической и адекватной поступлению исследуемых веществ в организм:

1. При пероральном поступлении химических веществ затравка животных должна производиться путем спаивания яда с водой или скармливания с пищей. Для этого должны быть обеспечены: специальный корм, пища в гранулах.

В острых экспериментах возможно введение яда через зонд в желудочно-кишечный тракт.

2. Для изучения кожно-резорбтивного действия химических веществ должны быть оборудованы специальные клетки с ячейками для одного животного. В каждой ячейке должно содержаться одно животное, на спине которого место аппликации закрыто колпачком. Затравку проводить в затравочной комнате под вытяжкой.

3. При исследовании токсичности веществ при ингаляции должны быть оборудованы камеры из материала, стойкого к воздействию агрессивных веществ (нержавеющая сталь, металлизированная сталь, сталь с покрытием из фторопласта, стекло).

Затравка животных при всех видах ингаляционного воздействия должна осуществляться при динамической подаче испытываемого соединения в затравочные камеры. Тип используемых камер зависит от агрегатного состояния вещества, видов животных в опыте.

Лимитирующими показателями при размещении животных в камерах являются:

1) объем камеры на 1 кг живой массы тела животных должен быть не меньше 15 дм3;

2) объем подаваемого в камеру воздуха на 1 кг живой массы тела животных должен быть не менее 5 л/мин;

3) микроклимат: Т 25°С; влажность 75 - 70%.

Для создания необходимого воздухообмена в камерах должна быть обеспечена централизованная вытяжка и подача воздуха с учетом предотвращения повышенных уровней шума и вибрации в камерах. Желательно, чтобы камеры были снабжены индивидуальными или общими кондиционерами для подачи воздуха с заданными параметрами (температурой, влажностью) и оснащены устройствами для автоматического отбора проб воздуха.

Затравочная техника должна в первую очередь обеспечивать стабильность концентрации нормируемых веществ в зоне дыхания животных. Конструкция затравочных камер, предназначенных для ингалирования аэрозолей, должна исключить попадание последних на шерстный покров животных и слизывание с него.

Главный государственный санитарный врач СССР

П.Н.Бургасов

______________________________

*(1) Нормирование микробных препаратов проводится в соответствии с "Методическими указаниями к постановке исследований по гигиеническому нормированию микробных препаратов", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР, N 1743-77 от 20.07.77.

*(2) Под "широким внедрением" понимается наличие контакта с контингентами работающих, количество которых составляет не менее 30 человек. Возможность использования ускоренных методов обоснования ПДК для веществ, имеющих широкое внедрение в практику, решается индивидуально в каждом конкретном случае.

*(3) Метод Н.П.Клемпарской с соавт. (1959) в модификации Т.И.Гришиной с соавт. (1976) (Т.И.Гришина, О.Г.Алексеева, А.П.Волкова "К методике определения бактерицидных свойств кожи", "Лаб. дело", 1976, N 9, с. 548 - 550).

*(4) Микроскопия в случаях, подозрительных на патологию.