Приложение 1. Приготовление питательных сред

Приложение 1

Приготовление питательных сред

1. Пшеничный агар

К 1 кг дробленного пшеничного зерна или пшеничной крупы (Артек, Полтавская) добавить 2 л дистиллированной воды. Через 18 - 24 ч настой осторожно слить (не отжимая зерна) и долить дистиллированной водой до 2-х л. Затем добавить 50 г агар-агара, нагреть до полного растворения и завернуть в толстый слой ваты для медленного охлаждения и лучшего выпадения осадка. На следующий день срезать осадок, растопить среду и установить рН=7,4. После этого среду разливают по пробиркам и стерилизуют текучим паром три дня подряд по 40 - 60 мин. После стерилизации скашивают.

2. Мясопептонный бульон с индикатором бромтимоловым синим

К 1000 мл мясопептонного бульона добавить 5 г глюкозы до полного растворения последней, профильтровать раствор через ватно-марлевый фильтр и добавить 2,5 мл 1%-ного спиртового раствора бромтимолового синего. Установить рН = 7,3+-0,1; разлить во флаконы и стерилизовать при 110 °С в течение 30 мин.

Цвет среды из сине-зеленого при проращивании спор меняется на желтый.

3. Глицериновый бульон (2%)

К 1000 мл мясопептонного бульона рН = 7,2+-0,1 добавить 20 мл глицерина, стерилизовать в течение 3 мин при температуре 120°С.

4. Глицериновый агар (2%)

К 1000 мл мясопептонного бульона рН = 7,2+-0,1 добавить 20 г агар-агара и 20 мл глицерина. Стерилизовать 30 мин при температуре 120 °С.

5. Картофельно-глицериновая среда

Сырой картофель (из расчета 200 г очищенного картофеля на 1000 мл водопроводной воды) тщательно вымыть, очистить от кожуры и глазков, нарезать мелкими ломтиками, залить водопроводной водой и кипятить 30 мин после закипания (молодой картофель употреблять нельзя!). Отвар отстоять и профильтровать в холодном состоянии через ватно-марлевый фильтр. Довести объем фильтрата до 1000 мл и установить рН=7,2+-0,1. Добавить 5 г пептона и 25 г агара. Нагреть, помешивая, до полного расплавления агара, профильтровать через ватно-марлевый фильтр, после чего добавить 1 г меда и 20 мл глицерина, разлить по флаконам и стерилизовать при 120°С в течение 30 мин. После стерилизации среду во флаконах скашивают.

6. Сахарозо-желатиновая среда

К 100 мл дистиллированной воды добавить 1 г желатина и 5 г сахарозы. Дать постоять среде 2 ч при комнатной температуре. Затем стерилизуют в автоклаве при 120 °С в течение 30 мин.