Приложение 7. Фиксация, обработка и окраска материала при диагностике бешенства

Приложение 7

Фиксация, обработка и окраска материала при диагностике бешенства

Весь материал, взятый из ЦНС, а также подчелюстную слюнную железу фиксируют не менее 3-5 суток в смеси Дюбоск-Бразиль-Буэн следующего состава:

 40%-ный формальдегид                  - 125 мл

 96%-ный этиловый спирт                - 275 мл

 Дистиллированная вода                 - 25 мл

 Ледяная уксусная кислота              - 30 мл

 Пикриновая кислота                    - 2 мл

После фиксации материал без промывки в воде перекладывают в 96%-ный этиловый спирт на сутки, далее обезвоживают по обычной схеме. Используется заливка только в парафин. Для сохранения архива оставшийся материал переносят в 70%-ный спирт. Указанные фиксация и проводка необходимы для выявления телец Бабеша-Негри.

Окраска на тельца Бабеша-Негри

Наиболее простой и доступный метод - применение краски Романовского-Гимза (4 мл неразведенного красителя на 70 мл дистиллированной воды).

Депарафинированные гистологические срезы окрашиваются 2-3 суток при комнатной температуре.

После быстрой промывки в воде дифференцируются в подкисленном спирте (на 50 мл 96%-ного спирта 1-2 капли уксусной кислоты).

Спирты, ксилол, бальзам.

Возможно приготовление основного раствора красителя по прописи: Азур II - 1 г на 1 л дистиллированной воды.

Эозин натрия - 0,5 г и эозин калия - 0,5 г на 1 л дистиллированной воды.

Для приготовления рабочего раствора прилить к 100 мл натрий-фосфатного буфера с РН - 7,2-7,6 50 мл раствора Азур II, затем добавить небольшими порциями 45 мл раствора эозина. Рабочий раствор красителя готовят перед употреблением. Окрашивать от 2 часов до 2 суток. Порядок дифференцировки и заключения тот же.

Результаты: фон бледно-розовый, нейроны голубые, тельца Негри от розового до красного цвета с базофильными включениями.