Приложение 10. Метод выделения ДНК с применением технологии Wizard, Promega с применением набора реактивов Promega (необязательное)

Приложение 10
(необязательное)

Метод выделения ДНК с применением технологии Wizard, Promega с применением набора реактивов Promega

Подготовка пробы (раствора ДНК).

- Навеску исследуемого продукта массой 150-200 мг поместить в микроцентрифужную пробирку типа Эппендорф вместимостью 1,5 мл.

- Добавить 300 мкл буфера I, тщательно растереть пробу в пробирке пестиком до гомогенного состояния.

- Добавить 500 мкл буфера II, перемешать на аппарате для встряхивания типа "Вортекс".

- Инкубировать при 65°С 40-60 мин, перемешать на аппарате для встряхивания, охладить до комнатной температуры.

- Добавить 500 мкл буфера III, перемешать на аппарате для встряхивания типа "Вортекс" в течение 2 мин.

- Центрифугировать 7 мин на настольной микроцентрифуге типа Эппендорф при частоте вращения 13 000 об./мин.

- Перенести 1 000 мкл супернатанта в чистую пробирку типа Эппендорф вместимостью 1,5 мл.

- Добавить 500 мкл смолы Wizard MaxiPreps.

- Перемешать на аппарате для встряхивания типа "Вортекс".

- При помощи стерильного шприца емкостью 2 мл прокачать смесь через микроцентрифужную колонку.

- Новым стерильным шприцем емкостью 2 мл прокачать через микроцентрифужную колонку 2 мл промывочного буфера.

- Поместить микроколонку в микроцентрифужную пробирку типа Эппендорф вместимостью 1,5 мл.

- Центрифугировать 1 мин при частоте вращения 12 000 об./мин.

- Поместить микроколонку в чистую микроцентрифужную пробирку типа Эппендорф вместимостью 1,5 мл.

- Добавить в колонку 100 мкл деионизованной воды.

- Центрифугировать 1 мин при частоте вращения 12 000 об./мин.

- Полученный раствор ДНК готов для проведения ПЦР, хранить при минус 20°С.