Методические указания МУК 4.1.634-96 "Методические указания по определению ремантадина в атмосферном воздухе методом тонкослойной хроматографии" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 31 октября 1996 г.)

Методические указания МУК 4.1.634-96
"Методические указания по определению ремантадина в атмосферном воздухе методом тонкослойной хроматографии"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 31 октября 1996 г.)

Дата введения: с момента утверждения

Введены впервые

Настоящие методические указания устанавливают хроматографический (ТСХ) количественный химический анализ атмосферного воздуха для определения в нем содержания ремантадина в диапазоне концентраций 0,004-0,083 мг/м3.

C12H21NHCl             Мол. масса 215,77

Ремантадин (альфа-метил-1-адамантил-метиламина гидрохлорид) - белый кристаллический порошок с температурой плавления 365-367°С. Растворяется в этаноле, хлороформе. В воде трудно растворим. В воздухе находится в виде аэрозоля.

Ремантадин обладает раздражающим действием. Ориентировочный безопасный уровень воздействия - 0,005 мг/м3.

1. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью, не превышающей +-17%, при доверительной вероятности 0,95.

2. Метод измерений

Измерение концентрации ремантадина выполняют методом тонкослойной хроматографии. Концентрирование его из воздуха осуществляют на фильтр. Десорбцию проводят экстрагированием смесью растворителей.

Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 0,5 мкг.

Определению не мешают: адамантан, бромадамантан, мидантан.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы.

3.1. Средства измерений

Спекорд М-40 с приставкой для измерения отражения с фотометрическим шаром
Барометр-анероид М-67	ТУ 2504-1797-75
Весы аналитические лабораторные ВЛА-200	ГОСТ 24104-80Е

ГАРАНТ:

См. ГОСТ Р 53228-2008 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания", утвержденный приказом Ростехрегулирования от 25 декабря 2008 г. N 739-ст

Меры массы

ГОСТ 7328-82Е

См. ГОСТ OIML R 111-1-2009 "Государственная система обеспечения единства измерений. Гири классов , , , , , , , и . Часть 1. Метрологические и технические требования", введеный в действие приказом Росстандарта от 22 августа 2011 г. N 233-ст

Посуда стеклянная лабораторная	ГОСТ 1770-74Е и 20292-74Е
Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2	ГОСТ 215-73Е
Хроматографическая камера	ГОСТ 10565-75
Электроаспиратор, модель 822	ТУ 64-1-862-77

ГАРАНТ:

Взамен ГОСТ 10565-75 постановлением Госстандарта СССР от 15 июля 1982 г. N 2670 с 1 января 1984 г. введен в действие ГОСТ 25336-82

3.2. Вспомогательные устройства

Баня водяная	ТУ 64-1-2850-76
Вакуумный компрессор марки ВН-461М
Дистиллятор	ТУ-61-1-721-79
Кристаллизатор с притертой крышкой	ГОСТ 6371-73
Пластины "СИЛУФОЛ" УФ-254 (производство Чехия)
Пульверизатор стеклянный	ГОСТ 10391-74
Сушильный шкаф с терморегулятором с точностью +-1°С, модель 213-151
Фильтродержатели для фильтров АФА-ХА-10

ГАРАНТ:

Взамен ГОСТ 6371-73 постановлением Госстандарта СССР от 15 июля 1982 г. N 2670 с 1 января 1984 г. введен в действие ГОСТ 25336-82

3.3. Материалы

Фильтр АФА-ХА-10, изготовитель ВО "Изотоп"

3.4. Реактивы

Аммиак водный, 25%, х. ч.	ГОСТ 3760-79
Бензол, ч. д. а.	ГОСТ 5955-75
Вода дистиллированная	ГОСТ 6709-77
Калий марганцовокислый, х. ч.	ГОСТ 20490-75
Калий йодистый, ч. д. а.	ГОСТ 4232-74
Кислота уксусная ледяная, х. ч.	ГОСТ 61-75
Кислота соляная, х. ч.	ГОСТ 3118-77
Метанол, х. ч.	ГОСТ 6995-77
Ремантадин, фармакопейный
о-Толидин, ч.	ТУ 6-09-11-788-76
Хлороформ, х. ч.	ГОСТ 20015-74
Этанол	ГОСТ 5962-67

4. Требования безопасности

4.1. При работе с реактивами следует соблюдать требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТу 12.1.005-88.

4.2. При выполнении измерений с использованием электроаспиратора соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают лиц, имеющих квалификацию не ниже старшего лаборанта.

6. Условия измерений

При выполнении измерений следует соблюдать следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях согласно ГОСТу 15150-69 при температуре воздуха (20 +-10)°С, атмосферном давлении 630-800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80%.

7. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовка хроматографической камеры, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

7.1. Приготовление растворов

Калий марганцовокислый, 1,5% раствор. 1,5 г калия марганцовокислого растворяют в 100 см3 дистиллированной воды.

Кислота соляная 10% раствор. В цилиндр вместимостью 1000 см3 к 200 см3 дистиллированной воды осторожно приливают 241 см3 концентрированной соляной кислоты (уд. вес 1,19) и доводят объем водой до метки.

Исходный раствор ремантадина для градуировки (с = 500 мкг/см3). 0,05 г ремантадина растворяют в мерной колбе вместимостью 100 см3 хлороформом. Срок хранения - 3 дня в холодильнике.

Подвижная фаза. Хлороформ : бензол : метанол: 25% раствор аммиака в соотношении 50 : 40 : 20 : 2 соответственно.

Проявляющий реактив. 50 см3 1,5% раствора калия марганцовокислого и 50 см3 10% раствора соляной кислоты помещают на дно эксикатора вместимостью 1,5 дм3, осторожно перемешивают. Внутрь эксикатора помещают фарфоровую вкладку и закрывают пришлифованной крышкой. Реактив готовят перед определением за 60 мин в вытяжном шкафу.

о-Толидин. 160 мг о-толидина растворяют в 30 см3 ледяной уксусной кислоты, доводят объем до 500 см3 дистиллированной водой и добавляют 1 мг йодистого калия. Хранят в посуде из темного стекла не более 2-х недель.

7.2. Подготовка хроматографической камеры

На дно хроматографической камеры наливают подвижную фазу таким образом, чтобы уровень жидкости не доходил до линии "старта" на пластине. Камеру плотно закрывают крышкой и насыщают в течении# 30 мин.

7.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику устанавливают по 5-ти сериям растворов для градуировки. Каждую серию, состоящую из 7-ми растворов, готовят в мерных колбах вместимостью 100 см3. Для этого в каждую колбу вносят исходный раствор ремантадина для градуировки в соответствии с табл. 1, доводят объем хлороформом до метки и перемешивают. Растворы устойчивы в течении# 3-х дней при хранении в холодильнике.

Таблица 1

Растворы для установления градуировочной характеристики при определении концентрации ремантадина

Номер раствора для градуировки	1	2	3	4	5	6	7
Объем исходного раствора (с = 500 мкг/см3), см3	0	1,0	2,0	4,0	8,0	16,0	20,0
Масса ремантадина в 0,1 см3, мкг	0	0,5	1,0	2,0	4,0	8,0	10,0

На пластине "Силуфол", на расстоянии 1 см3 от края, простым карандашом проводят линию "старта", на которой намечают (не повреждая поверхности силикагеля) точки на расстоянии 2,5 см друг от друга. В каждую точку с помощью пипетки, легко касаясь пластины, наносят 0,1 см3 градуировочного раствора в несколько приемов. Каждую следующую часть раствора наносят в ту же точку после полного испарения хлороформа от предыдущей части. Диаметр пятна градуировочого раствора на линии старта не должен превышать 5 мм.

Пластину с нанесенными растворами помещают под углом 30° в хроматографическую камеру так, чтобы линия "старта" располагалась внизу. После того, как подвижная фаза продвинется по пластине вверх на 10-15 см от линии "старта", пластину вынимают, сушат в вытяжном шкафу до полного удаления подвижной фазы. Затем пластину помещают в сушильный шкаф при температуре 100°С на 10 мин для освобождения от паров аммиака. Далее пластину обрабатывают парами воды, для чего ее держат 20 сек над кипящей водяной баней и переносят в эксикатор с парами хлора (кладут на фарфоровую вкладку силикагелем вверх) на 15 мин. Для удаления паров хлора пластинку помещают в сушильный шкаф при температуре 50°С на 2 мин и после этого орошают раствором о-толидина для проявления ремантадина в виде темно-синего пятна с величиной Rf 0,49+-0,02. Количественное определение ремантадина проводят через 60 мин при длине волны 550 нм по отношению к поверхности фона (участок пластины без градуировочных растворов) на "Спекорд М-40". Для каждого пятна градуировочного раствора измеряют интенсивность отражения (Т) и вычисляют оптическую плотность по формуле:

                 Д =-Lg T,

                              1

где Т - выражен в % и Д = Lg --- x 100

                              T

                 Д = 2 - Lg T

Градуировочная характеристика выражает зависимость оптической плотности (Д) от массы ремантадина (мкг) и строится по средним результатам из 5-ти серий. Градуировку проверяют 1 раз в месяц и при смене партии реактивов.

7.4. Отбор проб

Отбор проб воздуха проводят согласно ГОСТу 17.2.3.01-86. Воздух со скоростью 20 дм3/мин аспирируют через фильтр АФА-ХА-10, закрепленный в фильтродержателе, в течение 30 мин. После отбора пробы фильтр осторожно складывают загрязненной стороной внутрь и помещают в пакет. Срок хранения - 1 месяц.

8. Выполнение измерений

Фильтр с отобранной пробой извлекают из пакета, помещают в химический стакан и заливают 10 см3 смеси этанола с хлороформом в соотношении 3 : 1. Десорбцию ремантадина с фильтра проводят в течение 15 мин при периодическом помешивании стеклянной палочкой. Степень десорбции составляет 98%. Полученный раствор переносят в грушевидную колбу, упаривают под вакуумом при температуре 60-70°С досуха. Сухой остаток пробы растворяют 0,5 см3 хлороформа. На пластину "Силуфол" наносят 0,1 см3 раствора. Одновременно наносят "свидетель", содержащий 4,0 мкг ремантадина. Пластину с пробой обрабатывают согласно п. 7.3, измеряют интенсивность отражения пятна и вычисляют оптическую плотность.

Массу ремантадина в пробе определяют по градуировочной характеристике.

9. Вычисление результатов измерений

Концентрацию ремантадина в атмосферном воздухе (мг/м3) вычисляют по формуле:

                     m х V

                          1

                С = --------, где

                     V x V

                      2   0

     m - масса    ремантадина   в   пробе,  найденная  по  градуировочной

характеристике, мкг;

     V  - объем раствора пробы, см3;

      1

     V  - объем раствора пробы, взятый на анализ, см3;

      2

     V  - объем пробы воздуха, приведенный к нормальным условиям, дм3;

      0

                    V x 273 x P

                      t

              V = ----------------, где

               0  (273 + t) x 760

     Р - атмосферное давление при отборе пробы воздуха, мм рт. ст.;

     t - температура воздуха в местах отбора проб, °С;

     V  - объем пробы воздуха, дм3.

      t