Методические указания МУК 4.1.1235-03 "Измерение концентраций фенамидона в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 16 марта 2003 г.)

Методические указания
МУК 4.1.1235-03
"Измерение концентраций фенамидона в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 16 марта 2003 г.)

Дата введения - 1 июля 2003 г.
Введены впервые

2. Методика измерения концентраций фенамидона в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип методики

Методика основана на определении вещества с помощью обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором.

Отбор проб воздуха осуществляется концентрированием аэрозоля на бумажные фильтры "синяя лента". Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии компонентов препаративной формы, в т.ч. манкоцеба.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода (Р = 0,95)

Число параллельных определений - 6.

Предел обнаружения в хроматографируемом объеме - 2 нг.

Предел обнаружения в воздухе при отборе 20 дм3 воздуха - 0,01 мг/м3.

Диапазон определяемых концентраций - 0,01-0,1 мг/м3.

Среднее значение определения - 93,08%.

Стандартное отклонение (S) - 2,57%.

Относительное стандартное отклонение (DS) - 1,13%.

Доверительный интервал среднего - 2,90%.

Суммарная погрешность измерения не превышает 20%.

2.2. Реактивы, растворы и материалы

Фенамидон с содержанием д.в. 95,7% (Авентис КропСайенс, Германия)
Ацетонитрил для жидкостной хроматографии	ТУ 6-09-4326-76
Вода дистиллированная, деионизованная или перегнанная над КМО4
Бумажные фильтры "синяя лента", обеззоленные, предварительно промытые ацетоном	ТУ 6-09-1678-77
Калия перманганат	ГОСТ 20490-75
Метилен хлористый	ГОСТ 12794-80
Натрия сульфат безводный, хч	ГОСТ 4166-76
Натрия гидроксид, хч	ГОСТ 4328-77
Фосфора пентоксид, ч	МРТУ 6-09-5759-69
Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрил-вода (63:37, по объему)

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором фирмы Altex (США) или аналогичный
Самописец регистрирующий фирмы Kipp a Zonen BD 41 или аналогичный
Хроматографическая колонка стальная, длиной 20 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Lichrosorb RP-18, зернением 5 мкм
Хроматографическая колонка стальная, длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Kromasil 100A-C18, зернением 7 мкм
Микрошприц для жидкостного хроматографа, вместимостью 100 мкл
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или аналогичный	ТУ 25-11-917-76
Весы аналитические типа ВЛА-200	ГОСТ 34104-80Е
Насос водоструйный	ГОСТ 10696-75
Аспирационное устройство типа ЭА-1 или аналогичное	ТУ 25-11-1414-78
Барометр	ТУ 2504-1797-75
Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2, цена деления 1°С, пределы измерения 0-55°С	ГОСТ 215-73Е
Колбы мерные, вместимостью 100 и 1 000 мл	ГОСТ 1770-74
Цилиндры мерные, вместимостью 500 и 1 000 мл	ГОСТ 1770-74Е
Колбы грушевидные со шлифом, вместимостью 100 мл	ГОСТ 10394-72
Пробирки центрифужные	ГОСТ 25336-82Е
Стаканы химические, вместимостью 100 мл	ГОСТ 25336-82Е
Пипетки, вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл	ГОСТ 20292-74
Воронки химические, конусные, диаметром 34-40 мм	ГОСТ 25336-82Е
Груша резиновая
Фильтродержатели
Стеклянные палочки

ГАРАНТ:

Взамен ГОСТ 10696-75 и ГОСТ 10394-72 постановлением Госстандарта СССР от 15 июля 1982 г. N 2670 с 1 января 1984 г. введен в действие ГОСТ 25336-82

2.4. Отбор проб

Отбор проб воздуха рабочей зоны следует осуществлять в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны".

Воздух со скоростью 4 л/мин пропускают через фильтр "синяя лента", помещенный в фильтродержатель.

Для измерения концентрации вещества на уровне 0,01 мг/м3 следует отобрать 20 л воздуха.

Фильтры с отобранными пробами, помещенные в герметически закрываемые склянки, можно хранить в холодильнике при 4-6°С в течение 7 дней.

2.5. Подготовка к определению

2.5.1. Очистка растворителей

Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем растворитель последовательно промывают водой, 2%-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.

Ацетонитрил сушат над пентоксидом фосфора и перегоняют; отогнанный растворитель повторно перегоняют над углекислым калием.

2.5.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

Отмеряют 630 мл ацетонитрила, переносят в мерную колбу вместимостью 1 000 мл, добавляют 370 мл бидистиллированной воды, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

2.5.3. Кондиционирование колонки

Промыть колонку для ВЭЖХ смесью ацетонитрил-вода (63:37, по объему) при скорости подачи растворителя 1 мл/мин в течение 30- 45 мин до получения стабильной базовой линии.

2.5.4. Приготовление стандартных растворов

Основной стандартный раствор фенамидона с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г вещества, содержащего 99,5% д.в., в ацетонитриле в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранится в холодильнике не более месяца.

Рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,04; 0,08; 0,2 и 0,4 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора фенамидона соответствующим последовательным разбавлением подвижной фазой для ВЭЖХ (п. 2.5.2). Рабочие растворы хранят при температуре не выше 4°С не более 7 дней.

2.5.5. Построение калибровочного графика

Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 50 мкл рабочего стандартного фенамидона с концентрацией 0,04; 0,08; 0,2 и 0,4 мкг/мл.

Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты хроматографического пика в мм от концентрации фенамидона в растворе в мкг/мл.

2.6. Описание определения

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический стакан вместимостью 100 мл, заливают 10 мл хлористого метилена, помещают на встряхиватель на 4-5 мин. Растворитель сливают, отжимая фильтр стеклянной палочкой. Фильтр еще дважды обрабатывают новыми порциями хлористого метилена объемом 7-8 мл.

Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 С, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха, остаток растворяют в 5 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 2.5.2), фильтруют или центрифугируют для удаления взвеси и хроматографируют.

2.7. Условия хроматографирования

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Altex (США).

Колонка стальная, длиной 20 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Lichrosorb RP-18, зернением 5 мкм.

Температура колонки: комнатная.

Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (63:37, по объему).

Скорость потока элюента: 0,7 мл/мин.

Рабочая длина волны: 240 нм.

Чувствительность: 0,02 ед. абсорбции на шкалу.

Объем вводимой пробы: 50 мкл.

Время удерживания фенамидона: около 6 мин.

Линейный диапазон детектирования: 2-20 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,4 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ (п. 2.5.2).

Альтернативная неподвижная фаза:

Хроматографическая колонка стальная (15x4 мм), заполненная Kromasil 100A-C18 (5 мкм).

Скорость потока элюента: 0,6 мл/мин.

Условия хроматографирования: те же.

Время удерживания фенамидона: около 6 мин.

2.8. Обработка результатов анализа

Содержание фенамидока рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

                                 C x W

                             X = ------ , где

                                   V

 Х      -    содержание фенамидона в пробе воздуха, мг/м3;

 С      -    концентрация  фенамидона  в  хроматографируемом   растворе,

             найденная по калибровочному графику, мкг/мл;

 W      -    объем экстракта, подготовленного  для  хроматографирования,

             мл;

 V      -    объем пробы воздуха, отобранного для анализа, приведенный к

             стандартным условиям (давление 760 мм рт. ст.,  температура

             20°С), дм3.

3. Требования техники безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами.

4. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.

ГАРАНТ:

Взамен МИ 2335-95 Госстандартом России введена в действие с 1 октября 2003 г. рекомендация МИ 2335-2003

5. Разработчики

Дубовая Л.В., Макеев А.М., к. биол. н.

ВНИИ фитопатологии, 143050, Московская обл., п/о Большие Вяземы, тел. 592-92-20.

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации, Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации

Г.Г. Онищенко