Методические указания МУК 4.1.1214-03 "Измерение остаточных количеств Азоксистробина (ICIA 5504) и его геометрического изомера (R-230310) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 16 марта 2003 г.)

Методические указания МУК 4.1.1214-03
"Измерение остаточных количеств Азоксистробина (ICIA 5504) и его геометрического изомера (R-230310) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 16 марта 2003 г.)

Дата введения 1 июля 2003 г.

Введены впервые

2. Методика определения Азоксистробина (ICIA 5504) и его геометрического изомера (R-230310) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Методика основана на определении веществ методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового детектора.

Отбор проб воздуха осуществляется концентрированием аэрозоля на бумажные фильтры "синяя лента". Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии компонентов препаративной формы, а также пестицидов, применяемых при возделывании овощных культур и винограда.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода (Р = 0,95)

Число параллельных определений - 6.

Предел обнаружения в хроматографируемом объеме - 0,2 нг (измерение по п. 2.7.1); 5 нг (измерение по п. 2.7.2).

Предел обнаружения в воздухе - 0,002 мг/м3 (при отборе 10 л воздуха, измерение по п. 2.7.1) и 0,013 мг/м3 (при отборе 75 л воздуха, измерение по п. 2.7.2).

Диапазон определяемых концентраций - 0,002 - 0,02 мг/м3 (измерение по п. 2.7.1); 0,013 - 0,39 мг/м3 (измерение по п. 2.7.2).

Среднее значение определения - 93,6% (для азоксистробина), 92,6% (для К-230310).

Стандартное отклонение (S) - 6,00% (для азоксистробина), 5,64% (для К-230310).

Относительное стандартное отклонение (DS) - 2,45% (для азоксистробина), 2,30% (для R-230310).

Доверительный интервал среднего - 6,30% (для азоксистробина), 5,91% (для R-230310).

Суммарная погрешность измерения не превышает 23%.

2.2. Реактивы, растворы, материалы

Азоксистробин ICIA 5504, аналитический стандарт с содержанием д.в. 99,7%, (Зенека, Великобритания)
R-230310, аналитический стандарт с содержанием д.в. 96,0%, (Зенека, Великобритания)
Ацетонитрил для жидкостной хроматографии (УФ 210 нм)	ТУ 6-09-4326-76
Бумага индикаторная, универсальная
Вода дистиллированная, деионизованная или перегнанная над КМnO4
Бумажные фильтры "синяя лента", обеззоленные, предварительно промытые ацетонитрилом	ТУ 6-09-2678-77

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

Жидкостный хроматограф Waters (США) с ультрафиолетовым детектором
Жидкостный хроматограф Милихром (Россия) с ультрафиолетовым детектором
Хроматографическая колонка стальная, длиной 64 мм, внутренним диаметром 2 мм, содержащая Separon С18, зернением 5 мкм
Хроматографическая колонка стальная, длиной 25 см, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Lichrosorb RP-18, зернением 5 мкм
Хроматографическая колонка стальная, длиной 25 см, внутренним диаметром 2,1 мм, содержащая Kromasil 100-5C8, зернением 5 мкм
Микрошприц для жидкостного хроматографа на 50 - 100 мкл
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или аналогичный	ТУ 25-11-917-76
Весы аналитические ВЛА-200	ГОСТ 34104-80Е
Насос водоструйный	ГОСТ 10696-75
Аспирационное устройство типа ЭА-1 или аналогичное	ТУ 25-11-1414-78
Барометр	ТУ 2504-1797-75
Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2, цена деления 1°С, пределы измерения 0 - 55°С	ГОСТ 215-73Е
Колбы мерные, вместимостью 100 и 1 000 мл Цилиндры мерные, вместимостью 10, 100, 250 и 500 мл	ГОСТ 1770-74 ГОСТ 1770-74Е
Колбы грушевидные со шлифом, вместимостью 100 мл	ГОСТ 10394-72
Пробирки центрифужные,	ГОСТ 25336-82Е
Стаканы химические, вместимостью 100 мл	ГОСТ 25366-80Е
Пипетки мерные, вместимостью 1, 2, 5, 10 мл	ГОСТ 20292-74
Воронки химические, конусные, диаметром 34 - 40 мм	ГОСТ 25336-82Е
Груша резиновая
Фильтродержатели
Стеклянные палочки

ГАРАНТ:

Взамен ГОСТ 10696-75 и ГОСТ 10394-72 постановлением Госстандарта СССР от 15 июля 1982 г. N 2670 с 1 января 1984 г. введен в действие ГОСТ 25336-82

2.4. Отбор проб

Отбор проб воздуха рабочей зоны следует осуществлять в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны".

Воздух со скоростью 5 л/мин пропускают через фильтр "синяя лента", помещенный в фильтродержатель.

Для измерения концентрации вещества по п. 2.7.1 на уровне 0,002 мг/м3 следует отобрать 10 л воздуха, по п. 2.7.2 на уровне 0,013 мг/м3 - 75 л воздуха.

Отобранные пробы можно хранить при комнатной температуре в течение 10 дней, в холодильнике - в течение месяца.

2.5. Подготовка к определению

2.5.1. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ (измерение по п.п. 2.7.1.1 и 2.7.2)

В мерную колбу вместимостью 1 000 мл помещают 500 мл ацетонитрила и доливают до метки бидистиллированной водой, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

2.5.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ (измерение по п. 2.7.1.2)

В мерную колбу вместимостью 1 000 мл помещают 400 мл ацетонитрила и доливают до метки бидистиллированной водой, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

2.5.3. Подготовка подвижной фазы для растворения образцов и приготовления стандартных растворов

В мерную колбу вместимостью 1 000 мл помещают 250 мл ацетонитрила и доливают до метки бидистиллированной водой, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

2.5.4. Кондиционирование колонки

Промыть колонку для ВЭЖХ соответствующей подвижной фазой в течение 30 мин при скорости подачи растворителя 1 мл/мин (измерение по п. 2.7.1) или 100 мкл/мин (измерение по п. 2.7.2).

2.5.5. Приготовление стандартных растворов

Стандартные растворы азоксистробина (ICIA 5504) и его метаболита (R-230310) с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г вещества в ацетонитриле в мерной колбе на 100 мл. Растворы хранятся в холодильнике в течение 6 месяцев.

Для приготовления основных стандартных растворов N 1 и 2, содержащих по 10 и 50 мкг/мл азоксистробина (ICIA 5504) и его метаболита (R-230310), соответственно, в мерную колбу вместимостью 100 мл помещают по 10 (N 1) или по 50 мл (N 2) стандартных растворов веществ с концентрацией 100 мкг/мл и в первом случае доводят смесью ацетонитрил-вода (25:75) до метки. Растворы хранятся в холодильнике в течение 6 месяцев.

Рабочие стандартные растворы с концентрацией 0,01; 0,025; 0,05; 0,1 мкг/мл (измерение по п. 2.7.1) готовят из основного стандартного раствора N 1 соответствующим последовательным разбавлением подвижной фазой для растворения образцов (п. 2.5.3).

Рабочие стандартные растворы с концентрацией 1,0; 4,0; 20,0 и 30,0 мкг/мл (измерение по п. 2.7.2) готовят из основных стандартных растворов N 1 и 2 соответствующим последовательным разбавлением подвижной фазой для растворения образцов (п. 2.5.3).

Рабочие растворы хранят в холодильнике не более месяца.

2.5.6. Построение градуировочного графика

2.5.6.1. Градуировочные графики А1 и В1 (измерение по п. 2.7.1).

Для построения градуировочных графиков в инжектор хроматографа вводят по 20 мкл рабочего стандартного раствора смеси Азоксистробина и его метаболита с концентрацией по 0,1; 0,025; 0,05; 0,1 мкг/мл.

2.5.6.2. Градуировочные графики А2 и В2 (измерение по п. 2.7.2).

Для построения градуировочных графиков в инжектор хроматографа вводят по 5 мкл рабочего стандартного раствора смеси Азоксистробина и его метаболита с концентрацией по 1,0; 4,0; 10,0; 20,0 и 30,0 мкг/мл.

Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации. Строят градуировочные графики (А1 и В1 или А2 и В2) зависимости высоты хроматографического пика в мм от концентрации азоксистробина (ICIA 5504) и его метаболита (R-230310) в растворе в мкг/мл.

2.6. Описание определения

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический стакан вместимостью 100 мл, заливают 10 мл ацетонитрила, оставляют на 5 - 7 мин, периодически перемешивая. Растворитель сливают, отжимая фильтр стеклянной палочкой. Фильтр еще дважды обрабатывают новыми порциями ацетонитрила объемом 10 мл.

Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха, остаток растворяют в 2 мл (измерение по п. 2.7.1) или 1 мл (измерение по п. 2.7.2) подвижной фазы для растворения образцов (п. 2.5.3), фильтруют или центрифугируют для удаления взвеси и хроматографируют.

2.7. Условия хроматографирования

2.7.1. Жидкостный хроматограф Waters (США) с ультрафиолетовым детектором

2.7.1.1. Хроматографическая колонка стальная, длиной 25 см, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Lichrosorb RP-18, зернением 5 мкм.

Температура колонки: комнатная.

Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (50:50, по объему).

Скорость потока элюента: 1 мл/мин.

Рабочая длина волны 255 нм.

Чувствительность 0,0025 ед. абсорбции на шкалу.

Объем вводимой пробы 20 мкл.

Время удерживания Азоксистробина (ICIA 5504) - 6,7 - 6,9 мин; геометрического изомера R-230310 - 8,7 - 8,9 мин.

2.7.1.2. Хроматографическая колонка стальная, длиной 25 см, внутренним диаметром 2,1 мм, содержащая Kromasil 100-5C8, зернением 5 мкм.

Температура колонки: 35°С.

Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (40:60, по объему).

Скорость потока элюента: 1 мл/мин.

Рабочая длина волны 255 нм.

Чувствительность 0,0025 ед. абсорбции на шкалу.

Объем вводимой пробы 20 мкл.

Время удерживания Азоксистробина (ICIA 5504) - 6,25 - 6,53 мин; геометрического изомера R-230310 - 8,65 - 9,17 мин.

Линейный диапазон детектирования: 0,2 - 2,0 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,1 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой для растворения образцов (п. 2.5.3).

2.7.2. Жидкостный хроматограф Милихром (Россия) с ультрафиолетовым детектором

Хроматографическая колонка стальная, длиной 64 мм, внутренним диаметром 2 мм, содержащая Сепарон С 18, зернением 5 мкм.

Температура колонки: комнатная.

Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (50:50, по объему).

Скорость потока элюента: 100 мкл/мин.

Рабочая длина волны 254 нм.

Чувствительность 0,2 ед. абсорбции на шкалу.

Объем вводимой пробы 5 мкл.

Время удерживания Азоксистробина (ICIA 5504) - 5,2 - 5,4 мин; геометрического изомера R-230310 - 6,4 - 6,7 мин.

Линейный диапазон детектирования: 5 - 150 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 30 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой для растворения образцов (п. 2.5.3).

2.8. Обработка результатов анализа

Содержание Азоксистробина IC1A 5504 или R-230310 рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

                                     W

                             Х = С х -, где

                                     V

    X - содержание Азоксистробина или R-230310 в пробе воздуха, мг/м3;

    С - концентрация  Азоксистробина  или R-230310 в  хроматографируемом

        растворе, найденная по калибровочному графику, мкг/мл;

    W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;

    V - объем пробы воздуха, отобранного  для  анализа,  приведенного  к

        стандартным условиям (давление 760 мм рт.ст., температура 20°С),

        дм3.

3. Требования техники безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами.

4. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ2335-95 ГСИ "Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".

5. Разработчики

Калинин В.А., профессор, к. с-х. н., Калинина Т.С, к. с-х. н., Довгилевич Е.В., к. биол. н., Устименко Н.В., к. биол. н., Довгилевич А.В., к. х. н.

Московская сельскохозяйственная академия им. К.А. Тимирязева. 127550, Москва, Тимирязевская ул., д. 53/1, УНКЦ "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов". Телефон/факс: 976-43-26.

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации, Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации

Г.Г. Онищенко