Приложение N 5. Методика реакции коагглютинации (РКА)

Приложение N 5

Методика реакции коагглютинации (РКА)

Принцип реакции коагглютинации состоит в том, что иммуноглобулины G (lg G) сальмонеллезной диагностической сыворотки адсорбируется# на золотистом стафилококке, содержащем на клеточной стенке белок А.

lg G соединяется с белком Fc-фрагментом. В результате Fав-фрагмент молекулы lg G ориентируется наружу от бактериальной клетки, чем обеспечивает оптимальное соединение активного центра антител с испытуемым антигеном.

Для постановки РКА необходимы следующие ингредиенты: стафилококковый реагент, содержащий белок А (выпускается предприятием Ленинградского НИИЭМ им. Пастера); неразведенные диагностические агглютинирующие сальмонеллезные сыворотки к сальмонеллам разных серогрупп (производятся Днепропетровским заводом диагностических препаратов); физиологический раствор, дистилированная вода и исследуемый материал (посевы фекалий или смывов в среду обогащения Мюллера или Магниевую - 24 или 48 ч.).

Приготовление специфического препарата для РКА. К содержимому флакона со стафилоккоковым реагентом добавляют 0,2 мл неразведенной агглютинирующей сыворотки к сальмонеллам той или иной группы. Смесь инкубируют в течение 1 часа при комнатной температуре, периодически помешивая. По окончании процесса во флакон добавляют 5 мл 0,9% раствора физиологического раствора, переносят содержимое в центрифужный стакан и центрифугируют при 3000 об/мин. 20 минут, после этого надосадок сливают, а к осадку добавляют 5 мл физиологического раствора и тщательно его ресуспензируют. Полученная суспензия сохраняет свои свойства в течение 4 месяцев при условии хранения при 4°С.

При постановке РКА 1 каплю специфического препарата смешивают с 1 каплей исследуемого материала на предметном стекле, при положительной реакции наблюдают наступающую в течение 30 сек. - 2 мин. коагглютинацию. В контроле (1 капля препарата и 1 капля физ. р-ра) - агглютинация должна отсутствовать.