Приложение В (обязательное). Метод кривой выживания

Приложение В
(обязательное)

Метод кривой выживания

Примечание - Идеальная кривая выживания является линейной во всем диапазоне инактивации. На практике имеют место отклонения от этого идеала, однако линейность должна сохраняться в приемлемых пределах. Построение кривой выживания методом прямого подсчета позволяет представить резистентность популяции численностью более , в то время как метод MPN (приложение С) позволяет представить резистентность популяции численностью менее . Хорошая корреляция между величинами D, полученными этими двумя методами, позволяет утверждать, что серьезных отклонений от линейности кривой выживания не наблюдается.

В.1 Исследуемые пробы подлежат обработке при ступенчатом возрастании экспозиции (выдержки) в определенных условиях. Должен быть установлен диапазон изменения экспозиции. Каждая экспозиция или доза должны отличаться от предыдущей на постоянную величину.

Примечание - Требования к характеристикам аппаратуры приведены в ГОСТ Р ИСО 11138-2 и ГОСТ Р ИСО 11138-3.

В.2 Должны быть использованы не менее пяти экспозиций, которые должны включать:

a) одну экспозицию, в которой проба не подвергается воздействию стерилизующего агента (стерилизующий агент может отсутствовать или может быть заменен на газ, не вызывающий летального действия);

b) снижение популяции до 0,01% исходного инокулята, по крайней мере, при одной экспозиции.

В.3 В каждой экспозиции должно быть использовано не менее четырех инокулированных носителей в каждом определении. При каждой экспозиции должно быть то же самое количество повторностей.

В.4 Отобранные пробы должны быть обработаны в течение 2 ч после завершения каждой экспозиции, чтобы удалить тест-микроорганизмы из носителя. Определение числа выживших тест-микроорганизмов должно быть проведено в специальных условиях культивирования по методам, установленным изготовителем.

B.5 Пользуясь полученными данными, строится кривая зависимости логарифма выжившей популяции от времени в минутах или уровня дозы в линейном виде кривая регрессии, пользуясь методом наименьших квадратов. Точки с данными выживаемости менее 0,5 логарифма начальной популяции не должны включаться в регрессионный анализ. По отрицательному наклону линии регрессии рассчитывается величина D в минутах или в единицах поглощенной дозы.

В.6 Коэффициент регрессии линейности кривой выживания должен быть не менее 0,8.