Приложение 3. Приготовление сред и растворов

Приложение 3

Приготовление сред и растворов

1. Фосфатно-солевой буферный раствор, рН 7,2-7,4 (ФСБ)

Неполный раствор ФСБ, несодержащий ионы кальция или магния, может использоваться для отмывания клеток. Полный раствор ФСБ используется для приготовления экстрактов проб и для разведения вирусов, присутствие ионов кальция и магния стабилизирует вирусы, особенно полиовирус и другие энтеровирусы.

Раствор А (неполный раствор ФСБ):

NaCl	8,0 г
KCl	0,2 г
	1,15 г
	0,2 г

Растворяют в дистиллированной воде, добавляют 2,0 мл 0,4% фенолового красного - индикатора рН, доводят до 800 мл и автоклавируют при 0,7 атм в течение 15 мин.

Раствор В:

0,10 г

Растворяют в 100 мл дистиллированной воды, автоклавируют при 0,7 атм в течение 15 мин.

Раствор С:

0,10 г

Растворяют в 100 мл дистиллированной воды, автоклавируют при 0,7 атм в течение 15 мин.

Рабочий раствор полного ФСБ:

К 8 частям раствора А добавляют 1 часть раствора В и 1 часть раствора С.

2. Среда для транспортирования вирусов

Состоит из основного солевого раствора Хэнкса, доведённого до рН 7,4 буфером HEPES с 0,2% бычьего альбумина. В среду добавляют антибиотики - пенициллин и стрептомицин (или гентамицин) и феноловый красный в качестве индикатора. Среду разливают по 2,5 мл в надёжно закрытые флаконы, хранят при температуре от 0 до 8°С.