Приложение 1. Оценка вирусной контаминации

Приложение 1

Оценка вирусной контаминации

Тестирование на вирусы необходимо выполнять в лабораториях, где имеется опыт рутинного тестирования вирусов, и его необходимо проводить в соответствии с требованиями надлежащей лабораторной практики (GLP).

В табл. 1 перечислены тесты на вирусы, которые необходимо выполнять на различных стадиях производства.

В табл. 2 перечислены вирусы, которые необходимо рассматривать как потенциальные контаминанты в производстве моноклональных антител, полученных при использовании линий клеток мышиного происхождения.

В табл. 3 перечислены вирусы, которые необходимо рассматривать как потенциальные контаминанты в производстве моноклональных антител, полученных при использовании линий клеток человеческого происхождения.

Тестирование на вирусную контаминацию

а) Тесты для определения специфических вирусов.

- Моноклональные антитела, полученные на линиях клеток мышиного происхождения. Тесты для определения специфических вирусов перечислены в табл. 2, например, тесты антителообразования у мышей (MAP) и антителообразования у крыс (RAP) или другие тесты, по меньшей мере, с эквивалентной чувствительностью и надежностью. Может потребоваться проведение специфических тестов на вирус лимфоцитарного хориоменингита (LCMV), цитомегаловирус мышей, ротавирус мышей (EDIM), тимический вирус и вирус лактат дегидрогеназы. Необходимо включить тесты, способные определить ретровирус мышей, например, пробы на ХС тромбоциты или пробы на S+L-фокус для определения экотропных или ксенотропных ретровирусов, соответственно.

- Моноклональные антитела, полученные на линиях клеток человеческого происхождения. Для моноклональных антител человека наличие вирусов, которые могут быть обнаружены в линии клеток, в некоторой степени зависит от происхождения, а также от здоровья донора. Они могут иметь специфическую способность инфицировать В-лимфоциты. Как минимум, необходимо провести тесты на вирусы, о которых известно, что они сохраняются в лимфоцитах. Эти вирусы перечислены в табл. 3. Вирусы следует выявлять при помощи культуральных методов, используя линии клеток, включающие свободные от вирусов лимфобластоидные клетки, также как и исследования самой линии лимфоцитов с использованием иммунохимических процедур, электронной микроскопии, "саузерн блот", полимеразной цепной реакции или других чувствительных методик.

- Генно-инженерные моноклональные антитела, продуцируемые линиями клеток млекопитающих. Для генно-инженерных моноклональных антител наличие вирусов, которые могут быть выявлены в линии клеток, зависит от происхождения линии клеток. Необходимо провести тесты на соответствующие вирусы.

б) Методы инокуляции культур клеток.

Данные методы способны выявить широкий спектр вирусов мышей, человека и, если необходимо, крупного рогатого скота.

Примеры используемых типов клеток (субстраты):

- культура фибробластов мышей, например, культура мышиных эмбрионов;

- культура фибробластов человека, например, диплоидные клетки человека, такие как MRC5;

- перевиваемые линии клеток человеческого, мышиного или бычьего происхождения.

Индикаторные клеточные линии в конце периода наблюдения должны быть дополнительно протестированы на гемадсорбирующие вирусы (с эритроцитами крови человека группы 0, морской свинки, цыплят). В исследования должны быть включены тесты на ретровирусы.

ГАРАНТ:

Нумерация приводится в соответствии с источником

с) Тесты на контаминирующие агенты, выполняемые на животных.

Указанные тесты должны проводиться путем внутримышечных инъекций исследуемого материала или разрушенных посевных клеток, выращенных на максимальном уровне (или удвоения популяции (пассажей), если это уместно), используемом при производстве каждой из указанных ниже групп животных:

- не менее 10 новорожденных мышей от 2 пометов в возрасте до 24 ч;

- 10 взрослых мышей;

- 5 морских свинок.

Исследуемый материал 10 взрослым мышам вводится интрацеребрально.

За животными необходимо наблюдать в течение, по меньшей мере, 4-х недель. Животное, которое заболевает или у которого появляются какие-либо отклонения, исследуется для установления причины болезни. Исследуемый материал считается приемлемым для производства, если, по меньшей мере, 80% испытуемых животных остаются здоровыми и живыми в течение периода наблюдения, и ни одно из животных не проявляет признаков присутствия в исследуемом материале каких бы то ни было контаминирующих агентов.

Субстратом для исследования могут служить и оплодотворенные яйца. Исследуемый материал вводится на хориоаллантоисную оболочку, в амниотическую полость или желточный мешок каждого из 10 куриных эмбрионов в возрасте 9 - 11 дней. Эти яйца необходимо исследовать не менее чем через 5 дней инкубации. Аллантоисная жидкость тестируется на наличие гемагглютининов на эритроцитах морской свинки, эритроцитах кур или других видов птиц.

Таблица 1

Схема тестирования на вирусную контаминацию

Стадия производства	Применяемые тесты (в соответствии с разделами прилож. 1)
Основной банк клеток хозяина (ОБК) или Рабочий банк клеток (РБК) производителя	(а)	(б)	(с)
Колония мышей	(а)
Сборы асцитной жидкости	(а)*	(б)
Объединенные сборы продукта, полученного in vitro		(б)
Конечный полуфабрикат продукта	Выполнение тестов из группы (б) осуществляется в случае, если вирусная контаминация была определена в объединенном сборе продукта
Примечание: знаком "*" помечены тесты, выполнение которых предлагается, по крайней мере, на первых пяти производственных сериях продукта.

Таблица 2

Вирусы мышей

Группа	Вирус	Поражаемые виды животных
1	2	3
I	Хантавирус (Геморрагическая лихорадка с почечным сидромом)*	М, К
	Вирус лимфоцитарного хориоменингита (LCMV)	М
	Ротавирус крыс*	К
	Реовирус типа 3 (reo 3)*	М, К
	Вирус Сендай *	М, К
II	Вирус эктромелии (оспы белых мышей)*	М
	К вирус	М
	Вирус крыс Килхема (KRV)	К
	Вирус лактат дегидрогеназы (LDH)	М
	Мельчайший вирус мышей (MVM)	М, К
	Аденовирус мышей (MAV)	М
	Цитомегаловирус мышей (MCMV)	М
	Вирус энцефаломиелита мышей (MEV, Тейлора или GDVU)	М
	Вирус гепатита мышей (mhv)	М
	Ротавирус мышей (EDIM)	М
	Вирус пневмонии мышей (PVM)	М, К
	Вирус полиомы	М
	Коронавирус крыс (RCV)	К
	Ретровирус*	М, К
	Вирус сиалодакриоаденита (SDA)	К
	Тимический вирус	М
	Вирус Тулана (НI)К	К
Примечание:
- М - мыши;
- К - крысы;
- в группу I включены вирусы, которые, согласно имеющимся фактам, способны инфицировать человека или приматов;
- в группу II включены вирусы, для которых не существует доказательств относительно их способности инфицировать человека, но которые, тем не менее, могут представлять потенциальную опасность, например, для лиц с иммунодефицитными состояниями;
- звездочкой (*) помечены вирусы, о которых известно, что они способны к репликации в клетках человеческого или обезьяньего происхождения в условиях in vitro

Таблица 3

Вирусы человека

Перечень вирусов

Вирус иммунодефицита человека (Типов 1 и 2)

Вирус Т-клеточной лейкемии человека (Типов I и II)

Цитомегаловирус

HHV6

Вирус Эпштейна-Барр

Вирус гепатита В

Вирус гепатита С