Приложение 3. Серологический метод диагностики

Приложение 3

Серологический метод диагностики

Серологический метод диагностики является дополнительным подтверждением заболевания генерализованными, локализованными формами менингококковой инфекции, а также проводится при иммунологических исследованиях.

Методика
постановки реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с эритроцитарными менингококковыми диагностикумами

Реакцию непрямой гемагглютинации можно ставить как макрометодом, так и микрометодом, причем в последнем случае используют только микротитраторы системы "Такачи"*.

Различия между этими методами заключаются лишь в объемах используемых ингредиентов и сроках учета результатов реакции. При макрометоде реагирующая смесь в каждой лунке состоит из 0,5 мл соответствующего разведения сыворотки крови и 0,25 мл диагностикума. В микрометоде объемы соответственно уменьшаются: 0,05 мл сыворотки и 0,025 мл диагностикума. Учет результатов исследования в микротитраторе проводят спустя 2 ч инкубации в термостате; при макрометоде иногда требуется дополнительная экспозиция в течение 1-2 ч при комнатной температуре.

При постановке РНГА можно использовать многоканальные пипетманы с указанными объемами ингредиентов. Реакцию оценивают по общепринятой четырехплюсовой системе.

За титр противоменингококковых антител принимают максимальное разведение сыворотки крови, в котором наблюдают четко выраженную агглютинацию эритроцитов с интенсивностью не менее чем на 2+ при условии, что в предыдущих лунках реакция шла на 4+ или 3+. Сыворотки крови с разведением 1:5 и выше с четко выраженной агглютинацией эритроцитов оценивают как положительные.

_____________________________

* Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации от 23.12.98 N 375 (раздел "Необходимые реагенты и приборы").

Серологическая диагностика заболеваний генерализованной и локализованной формами менингококковой инфекции

Оптимальные сроки взятия крови у больного генерализованной формой - первые дни болезни (1-3 день), вторая и (или) третья недели болезни. Первую сыворотку крови необходимо брать сразу же при поступлении больного в стационар, последующие - через 7-10 дней.

Антитела к группоспецифическим полисахаридам менингококка серогрупп А и С при генерализованной форме можно выявить уже в первые дни болезни. Максимальный уровень антител отмечается на 2-3-й неделях болезни, с 4-5-й недели уровень антител постепенно снижается.

За условно-диагностический титр антител к полисахариду менингококка серогрупп А и С у детей старше 3-х лет и взрослых принимают положительную реакцию в разведении сыворотки крови 1:40-1:80, т.к. у лиц, не инфицированных менингококком в момент обследования, антитела в таких титрах встречаются сравнительно редко (9-11%).

У детей в возрасте до 1 года продукция антител выражена слабо, в связи с чем положительные реакции наблюдают обычно в более поздние сроки (со второй недели болезни).

У детей моложе 3-х лет за условно-диагностический титр антител к полисахаридам А и С принимают положительную реакцию в разведении 1:20 и выше, т.к. при отсутствии менингококковой инфекции у детей этого возраста антитела или не обнаруживаются, или встречаются в единичных случаях в титрах не выше чем 1:5-1:10.

Интенсивность антителообразования неодинакова при различных клинических формах менингококковой инфекции. При менингококкцемии и сочетанных формах (менингококкцемия + менингит) уровень антител обычно выше, чем при других формах болезни.

При тяжелом течении генерализованной формы и особенно при инфекционно-токсическом шоке противоменингококковые антитела обнаруживаются в низких титрах, а в отдельных случаях не выявляются вообще. При очень тяжелом течении болезни, особенно при наличии тяжелых осложнений (отек и набухание мозга), антителообразование выражено слабо: в остром периоде болезни обнаруживают около 10% серо-позитивных проб с низкими титрами (1:5-1:10). В дальнейшем при улучшении состояния больных титры антител и число серопозитивных проб может возрастать.

Обнаружение антител уже на первой неделе болезни в титре 1:160 и выше подтверждает менингококковую этиологию заболевания. В некоторых случаях такие титры антител, обнаруженные на первой неделе болезни, могут сохраняться и в более поздние сроки заболевания. Хотя у данных больных не наблюдается сероконверсии, высокие показатели РНГА могут служить достаточным основанием для серологического подтверждения диагноза генерализованной формы менингококковой инфекции.

Диагноз генерализованной формы менингококковой инфекции определяется как этиологически подтвержденный при наличии динамики (четырехкратного и более) нарастания уровня антител. При двукратном нарастании титра антител диагноз оценивается как подтвержденный лишь при выраженной клинической картине.

У больных назофарингитом менингококковой этиологии в 90% случаев выявляются противоменингококковые антитела, причем в 50% случаев - с титрами от 1:40 и выше.

РНГА при иммунологических исследованиях

При проведении иммунологических исследований среди населения объем репрезентативных выборок составляет ежегодно не менее 2 000 исследований. Полученные результаты группируются по сезонам года и по возрастным группам: взрослые и дети.

Процент серонегативных проб отражает число восприимчивых лиц к исследуемой серогруппе менингококка (титры антител менее 1:5).

Процент серопозитивных проб (все серопозитивные сыворотки крови, начиная с разведения 1:5 и выше) свидетельствует о наличии антител к исследуемой серогруппе менингококка.

Титр противоменингококковых антител 1:80-1:160 и выше расценивается как свежее заражение на момент обследования.

Полученные результаты позволят судить об интенсивности циркуляции менингококка той или иной серогруппы (А или С). Преобладание процента серопозитивных лиц (сывороток) свидетельствует о формировании иммунитета к данной серогруппе менингококка. И наоборот, преобладание серонегативных сывороток свидетельствует о большом количестве восприимчивых.