Приложение 2 (обязательное). Правила отбора и транспортирования материала от больных и подозрительных на заражение людей для исследования на лихорадку Западного Нила

Приложение 2

(обязательное)

Правила
отбора и транспортирования материала от больных и подозрительных на заражение людей для исследования на лихорадку Западного Нила

1. Для предохранения от инфицирования медицинского персонала и пациентов при сборе проб биоматериалов и доставке его в лабораторию необходимо:

- не загрязнять наружную поверхность посуды при сборе и доставке проб;

- не загрязнять сопроводительные документы (направления);

- свести к минимуму непосредственный контакт пробы биоматериала с руками медицинского работника, собирающего и доставляющего его в лабораторию;

- соблюдать асептические условия для предотвращения инфицирования пациента в процессе выполнения инвазивных мероприятий;

- собирать пробы в стерильную одноразовую посуду;

- транспортировать пробы в переносках или укладках с раздельными гнездами.

2. Для серологического исследования необходимо двукратное взятие крови. Первую пробу берут при первых признаках болезни, при подозрении на ЛЗН, вторую - через 10-14 дней после первого забора крови. Кровь забирают в асептических условиях из вены в количестве 5-8 мл в стерильную пробирку и закрывают стерильной пробкой.

3. Для вирусологического исследования берут кровь не позднее 5-го дня болезни, в стадии вирусемии.

4. Кровь должна быть доставлена в вирусологическую лабораторию в течение первых 24 ч с момента взятия в термосе или сумке-холодильнике с Холодовыми элементами. Транспортируют кровь при температуре от 0 до 8°С.

Цельную кровь нельзя замораживать, так как это ведет к полному гемолизу. Кровь становится непригодной для серологических исследований и приобретает токсические свойства для лабораторных животных и тканевых культур.

Сопроводительный документ (направление) тщательно упаковывают в полиэтиленовый пакет и прикрепляют к емкости с клиническим материалом.

5. Обработка проб крови для серологического анализа в лаборатории. Кровь центрифугируют в течение 10-15 мин при 2 500 об./мин, сыворотку отделяют от осадка и используют для серологических исследований.

6. При посмертной диагностике берут кусочки мозга (из разных отделов), печени и селезенки. Взятый материал помещают в стерильные флаконы с пробками, которые помещают в полиэтиленовые пакеты, завязывают и опускают в термос со льдом.

7. Если материал для выделения вируса может быть доставлен в лабораторию в течение 2-4 ч, то достаточно поместить его в термос со льдом при температуре от 0 до 8°С. В лаборатории кусочки тщательно измельчают и готовят 10%-ю суспензию в растворе Хенкса (или в фосфатно-буферном растворе, или питательной среде), поддерживая температуру обрабатываемого материала на уровне 5°С. Суспензию центрифугируют в течение 15 мин при 2 500 об./мин. Прибавляют к надосадочной жидкости пенициллин и стрептомицин по 100-200 ЕД/мл и используют ее для заражения белых мышей или клеточных культур.

Если доставка материала требует нескольких дней, то его транспортируют в термосах с азотом или сухим льдом. В этом случае до замораживания нужно отделить сыворотку крови от сгустка.

8. Для проведения ОТ-ПЦР забор плазмы крови и спинномозговой жидкости проводят не позднее 12 дня от начала заболевания. Материал для обследования методом ПЦР (плазма и/или сыворотка крови, СМЖ, образцы других тканей, моча) должен забираться с использованием только одноразовых пробирок и медицинского инструментария с соблюдением правил асептики и храниться при температуре -70°С или в жидком азоте, не допуская его оттаивания до проведения исследования.