Приложение 4. Инструкция по применению набора реагентов латексной диагностики для быстрой идентификации шига-токсинпродуцирующего штамма Escherichia coli O104:H4

Приложение 4

Инструкция
по применению набора реагентов латексной диагностики для быстрой идентификации шига-токсинпродуцирующего штамма Escherichia coli O104:H4

1. Назначение и характеристика тест-системы

Латексная тест-система Е. coli О104:Н4 предназначена для экспресс-выявления и идентификации микробных клеток Escherichia coli О104:Н4 при проведении лабораторных исследований и представляет собой набор из трех флаконов емкостью 5 мл.

Латексная тест-система Е. coli О104:Н4 обеспечивает типоспецифическое выявление и идентификацию микробных клеток Е. coli O104:H4 в суспензиях, полученных из колоний микроорганизмов, выращенных на пластинках ГРМ-агара. Специфическими мишенями данного теста являются липополисахарид О104 и жгутиковый антиген Н4.

2. Состав тест-системы

В состав "латексной тест-системы Е. coli O104:H4" входят:

- флакон 1 (латексный тест), содержит 0,5% взвеси частиц монодисперсного полистирольного альдегидного латекса диаметром 0,65 мкм, сенсибилизированного иммуноглобулинами G, выделенными из сывороток крови кроликов, содержащих антитела к липополисахариду О104 и жгутиковому антигену Н4 Е. coli O104:H4;

- флакон 2 (контрольный тест), содержит 0,5% взвеси частиц монодисперсного полистирольного альдегидного латекса, сенсибилизированного иммуноглобулинами из сывороток крови не иммунизированных кроликов;

- флакон 3 (позитивный контроль), содержит инактивированную нагреванием взвесь культуры Е. coli О104:Н4, концентрация 10 единиц по ОСО 42-28-85 П.

3. Принцип действия

Микробные клетки Е. coli O104:H4, присутствующие в исследуемой пробе, взаимодействуют с латексными частицами, сенсибилизированными антителами против липополисахаридого антигена О104 и жгутикового антигена Н4 с последующим образованием видимых агглютинатов.

4. Меры предосторожности

Подготовку материала для исследования проводят с соблюдением специальной техники безопасности в соответствии с СП 1.3.2322-08 "Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности и возбудителями паразитарных болезней".

5. Проведение анализа

5.1. Материалы и оборудование

- 0,01 моль натрий-фосфатный буфер, рН 7,4 (ФБР);

- механические дозаторы переменного объема, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,1; 0,01 и 0,005 мл;

- предметные стекла;

- стеклянные палочки.

5.2. Анализируемые образцы

5.2.1. Подозрительные колонии микроорганизмов, выращенные на пластинках ГРМ-агара в аэрофильных условиях в течение 18 - 24 часов при температуре 37°С.

Примечание - Анализируемые образцы не подвергать автоклавированию.

5.3. Анализ

5.3.1. На предметное стекло нанести 20 мкл физиологического раствора, стеклянной палочкой снять часть колонии тестируемого штамма (исследуемый образец) и растереть в капле физиологического раствора до получения гомогенной суспензии.

5.3.2. Извлечь необходимое количество упаковок латексной тест-системы из холодильника и выдержать при комнатной температуре 20 минут.

Примечание - перед применением латексный тест тщательно суспендировать до гомогенного состояния.

5.3.3. К исследуемому образцу механическим дозатором нанести на предметное стекло 0,015 мл латексного теста (флакон N 1) и оба компонента осторожно перемешать стеклянной палочкой до получения гомогенной суспензии. Реакционную смесь на стекле инкубировать при комнатной температуре 2 минуты, периодически покачивая, а затем регистрировать результаты реакции.

5.3.4. Проверка качества контрольного теста. К 0,02 мл исследуемого образца, нанесенного на предметное стекло, добавить 0,015 мл контрольного теста (флакон N 2) и оба компонента осторожно перемешать стеклянной палочкой до получения гомогенной суспензии. Реакционную смесь на стекле инкубировать при комнатной температуре 2 минуты, периодически покачивая, а затем регистрировать результаты реакции.

5.3.5. Контроль специфичности латексного теста. К 0,02 мл позитивного контроля (флакон N 3), нанесенного на предметное стекло, добавить 0,015 мл латексного теста (флакон N 1) и оба компонента осторожно перемешать стеклянной палочкой до получения гомогенной суспензии. Реакционную смесь на стекле инкубировать при комнатной температуре 2 минуты, периодически покачивая, а затем регистрировать результаты реакции.

6. Регистрация и учет результатов

Учет результатов по п. 5.3.3, 5.3.4 и 5.3.5 провести через 2 минуты, руководствуясь таблицей.

Таблица 1

Интерпретация результата

Положительный результат	Наличие видимой четкой окрашенной агглютинации частиц при добавлении к исследуемому образцу латексного теста (флакон 1).
	Наличие видимой четкой окрашенной агглютинации частиц при добавлении к позитивному контролю (флакон 3) латексного теста (флакон 1).
	Отсутствие агглютинации, фон равномерно мутный при добавлении к исследуемому образцу контрольного теста (флакон 2).
Отрицательный результат	Отсутствие агглютинации, фон равномерно мутный при добавлении к исследуемому образцу латексного теста (флакон 1).
	Наличие видимой четкой окрашенной агглютинации частиц при добавлении к позитивному контролю (флакон 3) латексного теста (флакон 1).
Тест не работает	Отсутствие агглютинации, фон равномерно мутный при добавлении к позитивному контролю (флакон 3) латексного теста (флакон 1).

7. Условия хранения и эксплуатации латексной тест-системы

Набор реагентов тест-системы необходимо хранить в герметично закрытых флаконах в сухом защищенном от света месте при температуре 2 - 8°С. Допускается транспортировка набора реагентов при температуре 2 - 25°С в срок не более 7 суток.

Примечание - Не замораживать.

Срок годности - 1 год. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение настоящей инструкции по применению.