Приложение 1. Приготовление питательных сред с антибиотиками для селективного выделения изолятов E.coli О104:Н4 из клинического материала и пищевых продуктов

Приложение 1

Приготовление питательных сред с антибиотиками для селективного выделения изолятов E.coli О104:Н4 из клинического материала и пищевых продуктов

В качестве селективных питательных сред для выделения Escherichia coli О104:Н4 из исследуемого материала используют: плотные дифференциально-диагностические среды МакКонки и Левина и жидкие накопительные среды SDS-бульон, TSB-бульон и среду N 11 ГРМ, в которые добавлены антибиотики цефотаксим (25 мкг/мл) и налидиксовая кислота (4 мкг/мл).

Указанные выше среды готовят согласно прописи производителя:

- агар МакКонки-ГРМ - 25 г порошка растворить в 500 мл дистиллированной воды, кипятить в течение 3 мин и стерилизовать автоклавированием при 121°С (1 атм.) в течение 15 мин.

- агар Левина-ГРМ - 17 г порошка растворить в 500 мл дистиллированной воды, кипятить в течение 2 - 3 мин, профильтровать через ватно-марлевый фильтр и стерилизовать автоклавированием при 110°С (0,5 атм.) в течение 20 мин.

- SDS-бульон - 3.2 г порошка растворить в 100 мл дистиллированной воды Прокипятить 1 - 2 мин. Не автоклавировать.

- Среда N 11 ГРМ - 27,08 г препарата размешивают в 1 л дистиллированной воды, кипятят в течение 2 мин, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и стерилизуют автоклавированием при температуре 121°С в течение 15 минут.

Приготовленные среды охладить до температуры 40 - 45°С и внести в них растворы антибиотиков до конечной концентрации: цефотаксима - 25 мкг/мл, налидиксовой кислоты - 4 мкг/мл. Разлить агар по чашкам, а бульон - в колбы в количестве 100 мл.

Приготовление антибиотиков:

- Цефотаксим (ОАО "Биосинтез", Россия или аналог).

Антибиотик взвешивают на аналитических или торсионных весах в количестве 100 мг и растворяют навеску в 10 мл дистиллированной воды. Получают концентрацию препарата 10 мг/мл

- вносят антибиотик в объеме 0,25 мл на 100 мл среды (конечная концентрация 25 мкг/мл) или

- 1,25 мл на 500 мл среды (конечная концентрация 25 мкг/мл)

- Налидиксовая кислота ("Неграм" KRKA, Словения, или аналог).

На аналитических или торсионных весах взвешивают 16 мг антибактериального препарата и растворяют его в 5 мл дистиллированной воды, в которую по каплям при постоянном перемешивании вносят IN раствор NaOH до полного растворения препарата и доводят общий объем дистиллированной водой до 10 мл. Получают концентрацию препарата 1,6 мг/мл

- вносят антибактериальный препарат в объеме 0,25 мл на 100 мл среды (конечная концентрация 4 мкг/мл) или

- 1,25 мл на 500 мл среды (конечная концентрация 4 мкг/мл)

На указанных выше средах с антибиотиками хорошо вырастает культура E.coli О104:Н4, но подавляется рост энтеробактерий, чувствительных к цефотаксиму и налидиксовой кислоте.