Приложение 6. Инструкция по применению иммунохроматографического экспресс-теста для определения энтерогеморрагических E.coli О157

Приложение 6

Инструкция
по применению иммунохроматографического экспресс-теста для определения энтерогеморрагических E.coli О157

Принцип работы иммунохроматографического теста основан на взаимодействии антигенов, находящихся в образце исследуемого материала с антителами, меченными золотом (SinglepathE.coli О157 или аналог).

Иммунохроматографический тест представляет собой диагностическую тест-панель с круглой лункой для добавления образца, овальным окном с тестовой (Т) и контрольной (С) зонами.

1) Образец добавляется в круглую лунку.

2) Образец адсорбируется подложкой и взаимодействует со специфичными к E.coli О157 антителами мечеными золотом.

3) В присутствии антигенов E.coli О157 образуется комплекс с мечеными антителами, который мигрирует до зоны связывания в тестовой зоне (Т).

4) Зона связывания (Т) содержит антитела к комплексу антиген-антитело. В результате образуется четкая красная линия.

5) Оставшийся образец продолжает движение к контрольной зоне (С) и образует четкую красную линию, указывающую на то, что тест работает правильно.

Чувствительность метода - 1 клетка (КОЕ) E.coli О157 в 25 г образца

Ограничения метода

1) На результат не влияет наличие сопутствующих микроорганизмов

Условия хранения

Иммунохроматографический тест для определения E.coli О157 стабилен до даты, указанной на упаковке, при хранении в условиях +2-8°С.

Проведение анализа

1. Смешать 25 г (мл) образца с 225 мл среды обогащения. Выбор среды обогащения зависит от типа продукта. Среда для молочных продуктов - модифицированный триптиказо-соевый бульон с новобиоцином. Среда для мясных продуктов - модифицированный бульон ЕС с новобиоцином. При необходимости гомогенизировать образец.

2. Инкубировать 18 - 24 ч при 37°С

3. Перенести примерно 1 - 2 мл культуральной жидкости в полипропиленовую (или стеклянную) пробирку и инкубировать на кипящей водяной бане 15 мин.

4. Дать остыть пробе до комнатной температуры.

Проведение тестирования

1. Перед использованием обогащенный образец и иммунохроматографический тест должны быть комнатной температуры (обычно тесты хранятся в холодильнике).

2. Вскрыть пакет из фольги, в который упакован тест.

3. Положить тест на ровную поверхность и отмаркировать (указать номер исследуемого образца). Тестирование должно быть проведено в течение 2 часов после вскрытия фольги!

4. Используя микропипетку и одноразовый наконечник, добавить 150 мкл термически инактивированной и охлажденной культуральной жидкости в круглую лунку для образца.

5. Считать результаты через 20 минут после добавления образца.

Интерпретация результатов

1. Результаты теста учитываются только при наличии четкой красной линии в контрольной зоне (С) через 20 минут.

2. Образец считается положительным, если после 20 минут или ранее красные линии образовались как в тестовой (Т), так и в контрольной (С) зоне.

3. Образец считается отрицательным, если красная линия отсутствует в тестовой зоне (Т), но присутствует в контрольной зоне (С).

4. Тест следует повторить, если красные линии отсутствуют как в тестовой, так и в контрольной зоне через 20 минут.