Приложение 1. Правила отбора, условия хранения и транспортирования клинического материала для лабораторной диагностики высокопатогенного штамма вируса гриппа типа А методом полимеразной цепной реакции

Приложение 1
к Приказу министерства
здравоохранения
Самарской области
от 16 ноября 2015 г. N 1656

Правила

отбора, условия хранения и транспортирования клинического материала для лабораторной диагностики высокопатогенного штамма вируса гриппа типа А методом полимеразной цепной реакции (далее - ПЦР)

1. Мазки из ротоглотки
1.1. Сбор материала	Мазки берут сухими стерильными зондами с ватными тампонами вращательными движениями с поверхности миндалин, небных дужек и задней стенки ротоглотки после предварительного полоскания полости рта водой. После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную одноразовую пробирку с 500 мкл стерильного 0,9-% раствора натрия хлорида или раствора фосфатного буфера. Конец зонда отламывают или отрезают с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть крышку пробирки. Пробирку с раствором и рабочей частью зонда закрывают.
1.2. Метод исследования	ОТ-ПЦР
1.3. Условия хранения материала	При температуре от 2 до 8 градусов С - в течение трех суток.
1.4. Условия транспортирования материала	В специальном термоконтейнере с охлаждающими элементами или в термосе со льдом: - при температуре 0-4 градусов С - не более трех суток.
2. Мазки из полости носа
2.1. Сбор материала	Мазки (слизь) берут сухими стерильными зондами с ватными тампонами. Зонд с ватным тампоном вводят легким движением по наружной стенке носа на глубину 2-3 см до нижней раковины. Затем зонд слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход под нижнюю носовую раковину, делают вращательное движение и удаляют вдоль наружной стенки носа. Для ПЦР-анализа. После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную одноразовую микропробирку с 500 мкл стерильного 0,9-процентного раствора натрия хлорида или раствора фосфатного буфера. Конец зонда отламывают или отрезают с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть крышку пробирки. Пробирку с раствором и рабочей частью зонда закрывают.
2.2. Метод исследования	ОТ-ПЦР
2.3. Условия хранения материала	См. пункт 1.3
2.4. Условия транспортирования материала	См. пункт 1.4
3. Смывы из полости носа
3.1. Сбор материала	Сбор материала производят в положении больного сидя с отклоненной назад головой. Для получения смыва из полости носа в оба носовых хода поочередно с помощью одноразового шприца вводят по 3-5 мл теплого стерильного 0,9-процентного раствора натрия хлорида. Промывную жидкость из обоих носовых ходов собирают через воронку в одну стерильную пробирку. Не допускается повторное использование воронки без предварительного обеззараживания автоклавированием
3.2. Метод исследования	ОТ-ПЦР
3.3. Условия хранения материала	См. пункт 1.3
3.4. Условия транспортирования материала	См. пункт 1.4
4. Смывы из ротоглотки
4.1. Сбор материала	Перед сбором материала необходимо предварительное полоскание полости рта водой. После этого проводят тщательное полоскание ротоглотки (в течение 10-15 сек.) 8-10 мл 0,9-процентного раствора натрия хлорида. Жидкость собирают через воронку в стерильную пробирку. Не допускается повторное использование воронки без предварительного обеззараживания автоклавированием
4.2. Метод исследования	ОТ-ПЦР
4.3. Условия хранения материала	См. пункт 1.3
4.4. Условия транспортирования материала	См. пункт 1.4
5. Носоглоточное отделяемое
5.1. Сбор материала	Производится натощак после взятия мазков из полости носа. Осуществляется двумя способами: 1. Больной в три приема прополаскивает горло 10-15 мл 0,9-процентного раствора натрия хлорида. Смыв собирают в одноразовые полипропиленовые флаконы с завинчивающимися крышками объемом 50 мл. Ватными тампонами, зажатыми пинцетом, протирают заднюю стенку глотки и носовые ходы. Ватные тампоны опускают во флакон со смывом; 2. Сухим или слегка увлажненным 0,9-процентным раствором натрия хлорида тампоном, который удерживают с помощью пинцета, протирают заднюю стенку глотки и опускают его в пробирку с 5 мл стабилизирующей среды (взятой в вирусологической лаборатории). Процедуру повторяют 2-3 раза. Все тампоны от одного больного собирают в одну пробирку. После взятия материала с задней стенки глотки тщательно протирают носовые ходы небольшими ватными тампонами и опускают их в ту же пробирку (пробирку закрывают)
5.2. Метод исследования	Выделение вируса
5.3. Условия хранения материала	При температуре от 2 до 8 градусов С - не более 3 дней. При температуре минус 70 градусов С или в жидком азоте - длительно. Допускается только однократное замораживание - оттаивание материала. Температура хранения минус 20 градусов С не допускается
5.4. Условия транспортирования материала	См. пункт 1.4
6. Секционный материал
6.1. Сбор материала	В качестве секционного материала используются ткани легких, трахеи, сегментарных бронхов, селезенки. Секционный материал собирают в одноразовые полипропиленовые флаконы с завинчивающимися крышками объемом 50 мл
6.2. Метод исследования	ОТ-ПЦР, выделение вируса
6.3. Условия хранения материала	См. пункт 1.3
6.4. Условия транспортирования материала	См. пункт 1.4

Примечание:

1. Отбор проб осуществляет медицинский работник ЛПУ в защитной одежде - противочумном костюме III типа, дополненном респиратором.

2. Доставка материала осуществляется медицинским работником.

3. О времени отправления материала немедленно сообщить в Центр гигиены и эпидемиологии в Самарской области по телефонам: 260-38-17, 260-38-02.

4. Пробы, предназначенные для передачи в вирусологическую лабораторию и содержащие неинактивированный возбудитель, помещают во вторичную герметичную тару, имеющую особый знак "Опасно! Не открывать во время перевозки" (Санитарные правила "СП 1.2.036-95. 1.2. Эпидемиология. Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности", утвержденные постановлением Госкомсанэпиднадзора России от 28.08.1995 N 14).

Правила

отбора, хранения и транспортирования клинического материала для лабораторной диагностики и идентификации вирусов гриппа другими методами

1. Метод флюоресцирующих антител - ИФА (экспресс-анализ)

Цель: определение антигенов гриппа и ОРВИ в мазках из носа больных.

Расходные материалы: флакон с бесцветной средой (хранится в бытовом холодильнике при +4 градусах несколько месяцев), два тампона. Выдается в лаборатории по заявке лечебного учреждения (далее - учреждение).

Материал необходимо собирать в первые 4-6 дней от начала заболевания. Необходимо сделать соскоб из полости носа по одному тампону из каждой половины носа.

Полость носа предварительно очищается от выделений при помощи сухих ватных тампонов или можно попросить больного высморкаться. Далее сухой ватный тампон вводят в нижний носовой ход на глубину 3-4 см для взрослых или 1,5-2 см для детей вращательным движением с небольшим нажимом снимаются эпителиальные клетки с наружной стенки носовой полости. Эта же процедура повторяется вторым тампоном в другой половине носа. Оба тампона погружаются во флакон со средой. Флакон закрывается резиновой пробкой, маркируется и доставляется в лабораторию в течение 6 часов от момента забора с охлаждением (материал нельзя замораживать).

2. Выделение инфекционного вируса гриппа на клеточной культуре (культуральный метод)

Цель: определение циркулирующих штаммов вирусов гриппа в данный эпидсезон.

Расходные материалы: флакон с розовой или желтой средой (хранится в бытовом холодильнике при температуре +4 градуса С несколько месяцев, до забора материала нельзя замораживать), два тампона. Выдается в лаборатории по заявке учреждения.

Материал необходимо собирать в первые 3-4 дня от начала заболевания. Необходимо сделать соскоб из полости носа по одному тампону из каждой половины носа.

Полость носа предварительно очищается от выделений при помощи сухих ватных тампонов или можно попросить больного высморкаться. Далее сухой ватный тампон вводят в нижний носовой ход на глубину 3-4 см для взрослых или 1,5-2 см детям, вращательным движением с небольшим нажимом снимаются эпителиальные клетки с наружной стенки носовой полости. Эта же процедура повторяется вторым тампоном в другой половине носа. Оба тампона погружаются во флакон со средой. Флакон закрывается резиновой пробкой, маркируется. Проба может храниться в бытовом холодильнике до 24 часов. При более длительном хранении пробу необходимо заморозить и хранить не более 10 дней. Доставляется в лабораторию с охлаждением.

3. Определение антител к вирусам гриппа методом реакции торможения гемагглютинации (далее - РТГА) в парных сыворотках

Цель: определить прирост титра антител (при положительном ответе 4-кратный) или наличие сероконверсии к различным видам вирусов гриппа.

Расходные материалы: пластиковые или стеклянные пробирки обеспечиваются за счет учреждения.

Первая проба крови отбирается в первые дни от начала заболевания, как можно раньше, отбирается сыворотка, и сыворотка хранится в бытовом холодильнике или морозильнике в лечебном учреждении. Вторая проба сыворотки отбирается через 7-10 дней. Маркируются и доставляются обе пробы в лабораторию одновременно.

В направлении для исследования указываются Ф.И.О. больного, возраст, дата заболевания, дата забора материала, диагноз, вид исследования (МФА, выделение вируса или РТГА).

На бланке должен быть штамп лечебного учреждения. Направление должно быть в двух экземплярах.