Диагностикум риккетсиозный Тифи для РСК (Диагностикум риккетсиозный)

Торговое название: Диагностикум риккетсиозный Тифи для РСК

Международное название: Диагностикум риккетсиозный& (Diagnosticum rickettsiarum)

Фармакологическая группа: МИБП-диагностикум

Фармакологическая группа по АТХ: V04CX. Другие диагностические средства

Состав:

Диагностикум риккетсиозный Тифи для реакции связывания комплемента (РСК) представляет собой лиофилизированные антигенные комплексы, выделенные методом эфирной обработки из риккетсий Тифи вирулентного штамма "Исаханян", выращенных в желточных мешках куриных эмбрионов и инактивированных фенолом. Препарат содержит в рабочем разведении не менее 4 антигенных единиц в 1 мл.

Консервант - фенол в конечной концентрации 0,5 %.

Описание:

Препарат представляет собой порошок или аморфную массу от желтовато-белого до коричневато-розового цвета.

Препарат выпускается в комплекте с сывороткой диагностической к риккетсиям Тифи сухой для РСК.

Фармакодинамика:

Диагностикум выявляет комплементсвязывающие антитела к риккетсиям группы сыпного тифа.

Показания к применению:

Серологическая диагностика эндемического (крысиного) сыпного тифа.

Режим дозирования:

Содержимое ампулы с диагностикумом в день постановки РСК растворить в объёме 0,9 % раствора хлорида натрия, указанном на этикетке ампулы. После растворения препарат имеет вид прозрачной или слегка опалесцирующей жидкости, время растворения не превышает 2 мин.

Определение рабочей дозы комплемента

1. Приготовить разведение гемолитической сыворотки, соответствующее утроенному ее титру. Например, при титре 1:1200 к 0,1 мл гемолитической сыворотки необходимо добавить 39,9 мл 0,9 % раствора натрия хлорида (разведение 1:400).

2. Приготовить гемолитическую систему: смешать равные объемы 3 % взвеси эритроцитов барана и приготовленного разведения гемолитической сыворотки. Гемолитическую систему выдержать при температуре (37+/-1)град. С в течение (30+/-2) мин.

3. Содержимое ампулы с комплементом растворить в 1 мл 0,9 % раствора натрия хлорида, после чего приготовить разведение комплемента 1:10 в 0,9 % растворе натрия хлорида.

4. В ряд из 10 пробирок микропипеткой отмерить от 0,01 до 0,1 мл комплемента в разведении 1:10.

5. 0,9 % раствором натрия хлорида довести объём в каждой пробирке до 0,6 мл.

6. В каждую пробирку добавить по 0,4 мл гемолитической системы.

7. Встряхиванием перемешать содержимое пробирок до получения гомогенной взвеси эритроцитов. Пробирки выдержать при температуре (37+/-1)град. С в течение (30+/-2) мин.

8. Учесть результаты реакции сразу после выдержки. Результаты реакции оценить по системе 4-х крестов:

4+ - отсутствие гемолиза, жидкость над осадком эритроцитов не окрашена;

3+ - следы гемолиза, жидкость над осадком эритроцитов слегка окрашена в розовый цвет;

2+ - ясный гемолиз, жидкость над осадком красноватого цвета, значительный осадок на дне пробирки;

1+ - почти полный гемолиз, жидкость красного цвета, незначительный осадок эритроцитов;

- "-" полный гемолиз: жидкость красного "лакового" цвета, осадка на дне пробирки нет.

Пример титрования комплемента

Номер пробирки - №1

Комплемент в разведении 1:10 - 0,01

0,9 % раствор хлорида натрия - 0,59

Гемолитическая система - 0,4

Результат - 4+

Номер пробирки - №2

Комплемент в разведении 1:10 - 0,02

0,9 % раствор хлорида натрия - 0,58

Гемолитическая система -0,4

Результат - 3+

Номер пробирки - №3

Комплемент в разведении 1:10 - 0,03

0,9 % раствор хлорида натрия - 0,57

Гемолитическая система - 0,4

Результат - 2+

Номер пробирки - №4

Комплемент в разведении 1:10 - 0,04

0,9 % раствор хлорида натрия - 0,56

Гемолитическая система - 0,4

Результат - 2+

Номер пробирки - №5

Комплемент в разведении 1:10 - 0,05

0,9 % раствор хлорида натрия - 0,55

Гемолитическая система - 0,4

Результат - 1+

Номер пробирки - №6

Комплемент в разведении 1:10 - 0,06

0,9 % раствор хлорида натрия - 0,54

Гемолитическая система - 0,4

Результат - 1+

Номер пробирки - №7

Комплемент в разведении 1:10 - 0,07

0,9 % раствор хлорида натрия - 0,53

Гемолитическая система - 0,4

Результат - "-"

Номер пробирки - №8

Комплемент в разведении 1:10 - 0,08

0,9 % раствор хлорида натрия - 0,52

Гемолитическая система - 0,4

Результат - "-"

Номер пробирки - №9

Комплемент в разведении 1:10 - 0,09

0,9 % раствор хлорида натрия - 0,51

Гемолитическая система - 0,4

Результат - "-"

Номер пробирки - №10

Комплемент в разведении 1:10 - 0,1

0,9 % раствор хлорида натрия - 0,5

Гемолитическая система - 0,4

Результат - "-"

За одну единицу комплемента принимают его количество, содержащееся во второй пробирке с полным гемолизом (в данном случае 0,07 мл комплемента в разведении 1:10, что соответствует 0,007 мл неразведённого комплемента).

РСК можно проводить как при температуре (6+/-2)град. С в течение (18+/-2) ч ("холодное" связывание), так и при температуре (37+/-1)град. С в течение (60+/-5) мин ("горячее" связывание).

Рабочая доза комплемента при "холодном" связывании составляет две единицы, при "горячем" связывании - одну единицу комплемента.

Титрование комплемента для постановки РСК осуществляют непосредственно перед его использованием.

Расчет необходимого количества комплемента

Реакцию ставят в общем объёме 1,0 мл:

- 0,2 мл разведенной исследуемой сыворотки;

- 0,2 мл диагностикума в рабочем разведении;

- 0,2 мл комплемента в рабочем разведении;

- 0,4 мл гемолитической системы.

Пример расчёта необходимого количества комплемента для постановки реакции методом "холодного" связывания: в приведённом выше примере 2 единицы комплемента соответствуют 0,007 мл х 2 = 0,014 мл неразведённого комплемента; для постановки реакции на 100 пробирках необходимо взять 0,014 мл х 100 = 1,4 мл неразведённого комплемента; при этом количество 0,9 % раствора натрия хлорида, которое должно быть добавлено к данному объему комплемента, составит 0,2 мл х 100 - 1,4 мл =18,6 мл. Таким образом, общий объем комплемента в рабочем разведении на 100 пробирок реакции составит 20 мл.

Для постановки реакции методом "горячего" связывания на 100 пробирках необходимо взять 0,007 мл х 100 = 0,7 мл неразведённого комплемента и развести его в 19,3 мл 0,9 % раствора хлорида натрия.

Постановка РСК для серологической диагностики эндемического сыпного тифа.

1. Исследуемые сыворотки инактивировать при температуре (56+/-1)град. С в течение (30+/-2) мин. В пробирках приготовить последовательные двукратные разведения сывороток на 0,9 % растворе натрия хлорида от 1:10 до 1:1280 в объеме 0,2 мл.

2. В каждую пробирку с сывороткой добавить по 0,2 мл диагностикума в рабочем разведении.

3. В каждую пробирку добавить 0,2 мл комплемента в рабочем разведении.

4. Контроль опыта:

4.1. Контроль исследуемых и диагностической сывороток на антикомплементарность: к 0,2 мл минимального разведения каждой сыворотки добавить 0,2 мл 0,9 % раствора хлорида натрия и 0,2 мл комплемента в рабочем разведении.

4.2. Контроль титра диагностической сыворотки, выпускаемой в комплекте с диагностикумом. Для получения разведения сыворотки 1:10 содержимое ампулы регидратировать в 1 мл 0,9 % раствора натрия хлорида*. В пробирках приготовить последовательные двукратные разведения сыворотки от 1:10 до 1:640 в объеме 0,2 мл. При титре 1:320 использовать разведения 1:80; 1:160; 1:320; 1:640. В каждую пробирку с диагностической сывороткой добавить 0,2 мл диагностикума и 0,2 мл комплемента в рабочем разведении.

4.3. Контроль диагностикума на антикомплементарность: в пробирку налить 0,2 мл диагностикума в рабочем разведении, 0,2 мл 0,9 % раствора хлорида натрия и 0,2 мл комплемента в рабочем разведении.

4.4. Контроль рабочей дозы комплемента: в три пробирки внести 0,2 мл, 0,1 мл и 0,05 мл комплемента в рабочем разведении и 0,4 мл, 0,5 мл и 0,55 мл 0,9 % раствора хлорида натрия соответственно.

4.5. Контроль гемолитической системы: в пробирку налить 0,6 мл 0,9 % раствора хлорида натрия.

5. Содержимое пробирок перемешать встряхиванием и выдержать при температуре (6+/-2)град. С в течение (18+/-2) ч ("холодное" связывание) или при температуре (37+/-1)град. С в течение (60+/-5) мин ("горячее" связывание), после чего в каждую пробирку добавить 0,4 мл гемолитической системы, предварительно прогретой в течение (30+/-2) мин при температуре (37+/-1)град. С. Содержимое пробирок снова перемешать встряхиванием и выдержать при температуре (37+/-1)град. С в течение 20-30 мин, ориентируясь на завершение реакции в пробирках контроля рабочей дозы комплемента: в первых двух пробирках контроля рабочей дозы комплемента должен быть полный гемолиз (-), в третьей пробирке - задержка гемолиза не менее чем на 3+.

Учёт результатов

Учёт результатов проводят через 1 ч после того, как штативы с пробирками будут вынуты из термостата.

Результаты опыта достоверны, если контроли оценены по системе 4-х крестов следующим образом:

контроль исследуемых и диагностической сывороток на антикомплементарность -;

контроль диагностической сыворотки в заявленном титре не менее чем 3+;

контроль диагностикума на антикомплементарность -;

контроль гемолитической системы 4+.

За титр исследуемой сыворотки принимают положительную реакцию с задержкой гемолиза не менее чем на 3+. Диагностическим титром исследуемой сыворотки является положительная реакция с разведения 1:160.

При заболевании эндемическим сыпным тифом РСК становится положительной со 2- ой недели болезни в разведении сыворотки 1:160 - 1:320, максимальных величин комплементсвязывающие антитела достигают на 3-й неделе заболевания (1:640 - 1:1280).

Срок годности:

5 лет. Препарат с истекшим сроком годности применению не подлежит.

Допускается хранение сывороток, разведенных 1:10, при температуре от 2 до 8град. С в течение недели.

Условия хранения:

Хранят в недоступном для детей месте.

Дата актуализации инструкции 13.11.2013

Производитель: Микроген НПО ФГУП Пермское НПО "Биомед", Россия

Владелец регистрационного удостоверения: Микроген НПО ФГУП Минздрава России, Россия

Формы выпуска: лиофилизат [для диагностических целей], ампулы

Условия отпуска: для лечебно-профилактических учреждений

Данные гос. регистрации: ЛС-002207 от 03.11.2006

Состояние регистрационного удостоверения: окончание срока действия 03.11.2011

Номер фармстатьи: ФСП 42-0504-7376-06