Приложение 10 (обязательное). Методика контроля содержания микроорганизмов в воздухе рабочей зоны

Приложение 10

Обязательное

Методика
контроля содержания микроорганизмов в воздухе рабочей зоны

1. Общие положения

1.1. Методика определяет требования к измерению в воздухе рабочей зоны концентраций микроорганизмов, живых клеток и спор, находящихся в составе товарных форм препаратов на предприятиях по производству препаратов методом биосинтеза, а также помещений общественных и промышленных зданий.

1.2. К использованию в технологических процессах допускаются штаммы микроорганизмов, разрешенные департаментом госсанэпиднадзора Минздрава России.

1.3. Контроль воздуха на содержание вредных веществ биологической природы - продуктов микробного синтеза (ферменты, витамины, антибиотики и др.) проводится так, как это принято для химических веществ.

2. Требования к отбору проб

2.1. Отбор проб воздуха для контроля содержания микроорганизмов проводится путем аспирации их из воздуха на поверхность плотной питательной среды.

2.2. Отбору проб должна предшествовать краткая характеристика микроорганизмов: указывается семейство, род, вид, штамм, морфологическая характеристика колоний на твердой питательной среде и оптимальные условия роста колоний на твердой питательной среде (РН, Т°).

2.3. Отбор проб воздуха проводят:

- при засеве инокуляторов в зоне дыхания и между инокуляторами;

- при отборе проб из инокуляторов;

- при засеве посевных аппаратов (при условии прямого засеивания);

- при отборе проб из посевных аппаратов у пробника и между посевными аппаратами;

- при отборе проб из ферментеров;

- при спуске культуральной жидкости из ферментеров в коагуляторы или прямо на фильтрацию.

Если в технологическом процессе имеет место сушка биомассы, то отбор проб проводится:

- при перемешивании;

- при выгрузке из сушильных аппаратов;

- при фасовке биомассы.

Перечисленные точки отбора ориентировочные и на каждом предприятии устанавливаются индивидуально с учетом данных валидации, характеристик процесса, методологии тестирования и т.п.

2.4. При текущем контроле в одном помещении число контрольных точек должно быть не менее трех.

2.5. Для сравнительного анализа концентраций микроорганизмов в воздухе рабочей зоны отбор проб должен проводиться не реже 1 раза в неделю в аналогичный по интенсивности технологического процесса временной период.

2.6. Объем пробы воздуха должен быть достаточным для обнаружения микроорганизмов. Он устанавливается опытным путем с учетом характеристик используемого пробоотборника и концентрации микроорганизмов в тестируемой зоне.

Примечание. Для импакторов и центрифужных пробоотборников одним из ограничивающих факторов является высыхание поверхности агара при больших объемах проб, а также возможность повреждения поверхности агарового слоя (растрескивание).

2.7. Отбор проб на содержание микроорганизмов проводят в рабочей зоне; высота установки прибора 1,5 м от уровня пола.

3. Характеристика метода

3.1. Метод основан на аспирации микроорганизмов из воздуха на поверхность плотных элективных питательных сред (специфичных для данного микроорганизма) и подсчета выросших колоний по типичным морфологическим признакам.

3.2. В специфическую питательную среду добавляют вещества (этиловый спирт, нефтепродукты, антибиотики и т.п.) для подавления посторонней микрофлоры, в зависимости от особенностей изучаемого штамма.

3.3. Отбор проб проводится с концентрированием воздуха на чашке Петри с посевной средой.

Примечание.

7. Выбор питательной среды является важным фактором. Базовой средой для бактерий является среда N 1 (по ГФ, изд. XI, вып.2., с.200*) и среда N 2 (агар Сабуро) для дрожжей и грибов. Посевы на среде N 1 инкубируются при температуре от 30 до 35°С в течение 48 ч, на агаре Сабуро - от 20 до 25°С в течение 72 ч.

2. Перед исследованием разлитые на чашки Петри или на пластины питательные среды необходимо выдержать в термостате при температуре от 30 до 35°С в течение 24 ч для подтверждения их стерильности. Проросшие чашки бракуют.

3. Ростовые свойства питательных сред должны быть проверены соответствующими тест-штаммами (для среды N I и среды N 2 по ГФ, изд. XI, вып. 2, с.208 "Требования к ростовым свойствам питательных сред").

3.4. Предел измерения от 0,5 до до 2 - 106 КОЕ/м3.

3.5. Выявленные в процессе отбора пробы воздуха микроорганизмы подлежат обязательной макроскопической (форма, цвет, консистенция колоний) и микроскопической идентификации окрашенных по Грамму мазков. Результаты исследований должны регистрироваться в документах, где указывают основные морфологические признаки: отношение к окраске по Грамму, наличие или отсутствие спорообразования, форма микроорганизмов (кокки, палочки, овоиды и т.п.).

В процессе идентификации микроорганизмов могут быть использованы биохимические тест-системы, идентификационные автоматизированные системы, а также любые современные методы идентификации микроорганизмов.

4. Приборы и посуда

4.1. Для бактериологического анализа воздуха используют импактор воздуха микробиологический "Флора-100" (ТУ 64-098- 33-95).

Примечание. Современная отечественная модель - высокопроизводительный импактор "Флора 100" работает в автоматическом режиме, отбирает заданный объем воздуха и осаждает биологический аэрозоль на чашку Петри с плотной питательной средой. Импактор полностью заменяет широко используемый для контроля прибор Кротова и превосходит его по всем техническим характеристикам (точность определения, масса, габариты, скорость пробоотбора, автоматический контроль параметров пробоотбора и диагностики неисправностей).

Импактор "Флора-100" прошел государственные испытания и рекомендован Комитетом по новой технике (протокол N 7 от 26.12.95) к применению в медицинской практике.

4.2. Методику проведения контроля с использованием импактора "Флора-100" рекомендуется согласовывать с разработчиком импактора для уточнения времени аспирации в зависимости от особенностей контролируемой микрофлоры.

     4.3.  Прибор для бактериологического      ТУ 64-1-791-77

           анализа воздуха, модель 818

     4.4.  Секундомер                          ГОСТ 9586-75

     4.5.  Чашки бактериологические,           ГОСТ 10937-75

           плоско донные, стеклянные диаметром

           100 мм

     4.6.  Термостаты электрические            ТС, ТУ 64-1-1382-76

           суховоздушные, типа

     4.7.  Пипетки мерные                      ГОСТ 1770-74

     4.8.  Колбы конические                    ГОСТ 1770-74

     4.9.  Весы аналитические                  ВЛА-200-М

     4.10. Камера для стерильной сушки         ЕМ3804-014СП

           чашек Петри типа

5. Методика проведения контроля

5.1. Воздух аспирируют со скоростью от 20 - 30 до 150 - 200 л/мин на поверхность питательной (посевной) среды на чашках Петри

5.2. Время аспирации 2 - 5 мин.

5.3. Инкубирование отобранных из воздуха проб производится в зависимости от выделяемых микроорганизмов в диапазоне температур от 27 - 28 до 41 - 42°С. При оценке пигментообразования чашки Петри дополнительно (после инкубирования) выдерживают 48 ч при комнатной температуре.

5.4. Метод предполагает учет количества типичных по морфологическим признакам колоний, выросших на 3 - 4 сут. и более, в зависимости от штамма после посева воздуха.

5.5. Прямой метод позволяет учитывать на чашке до 150 - 200 колоний. Результаты расчета концентрации дают в колониеобразующих единицах (КОЕ) в 1м3 воздуха.

5.6. Расчет концентрации (колониеобразующих единиц), содержащихся в 1 м3 воздуха, производится по формуле:

 К = П l000/C t кл/м3,

 где:

       К - концентрации искомой культуры в воздухе, КОЕ/м3;

       П - количество изотипов бактерий, сходных по  морфологии

           колоний и клеток;

    1000 - коэффициент пересчета на 1 м3 воздуха;

       С - скорость аспирации;

       t - время аспирации.

5.7. Результаты замеров вносят в протокол.

"Протокол
оценки содержания промышленных штаммов микроорганизмов в воздухе рабочей зоны"

                                                    Дата___________

1. Ф. И. О. работающего (рабочее место) ___________________________

___________________________________________________________________

2. Профессия_______________________________________________________

3. Производство____________________________________________________

4. Участок (технологическая стадия, операция)______________________

5. Точка отбора (наименование оборудования, у которого производится

   отбор)__________________________________________________________

6. Вид пробоотборника______________________________________________

7. Дата последней метрологической поверки оборудования для отбора

   проб ___________________________________________________________

8. Микроорганизм, содержание которого контролируется (род, вид,

   штамм) _________________________________________________________

9. Питательная среда, оптимум роста, время инкубации_______________

___________________________________________________________________

10. Количественная и качественная характеристика выросших колоний

    (морфологические признаки - форма, цвет, консистенция; окраска

    по Граму; количество типичных колоний) ________________________

___________________________________________________________________

___________________________________________________________________

11. Результаты идентификации микроорганизмов с указанием метода

___________________________________________________________________

12. Результаты расчета концентрации микроорганизма (КОЕ/м3)

___________________________________________________________________

13. Соотношение полученных результатов с уровнем ПДКр.з.

___________________________________________________________________

14. Отбор пробы произведен

___________ (Ф.И.О., должность) _________ (подпись, дата)

Идентификация штамма и расчет концентрации произведен:

___________ (Ф.И.О., должность) _________ (подпись, дата)

________________________________

* Государственная Фармокопея СССР XI издания, вып. 2.