Приложение 5. Инструкция о сборе и транспортировке антилейкоцитарных анти-HLA гистотипирующих сывороток

Приложение 5

к приказу Минздрава СССР

от 25 мая 1989 г. N 326

Инструкция
о сборе и транспортировке антилейкоцитарных анти-HLA гистотипирующих сывороток

Настоящее положение предусматривает унификацию сбора и первичного исследования сывороток для более полного выявления антилейкоцитарных антител, обеспечивая их сохранность при транспортировке, стандартизации реагентов, комплектации гистотипирующих панелей.

1. Сбор и первичное исследование сывороток.

Источником антилейкоцитарных сывороток могут быть сыворотки крови лиц, имевших аллоантигенные воздействия в анамнезе (беременности, трансфузии крови и ее компонентов, трансплантации органов и тканей). Таким образом, контингент возможных доноров гистотипирующих сывороток достаточно большой, однако, наиболее перспективная группа для получения активных образцов с ограниченным спектром направленности анти-HLA-антител - это женщины, имевшие в анамнезе беременности и роды. Установлено, что HLA-антитела после прерывания или завершения беременности обнаруживаются в сыворотке крови в течение продолжительного периода. Данный факт делает возможным привлечение таких женщин к донорству, что обеспечивает получение ценных реагентов в большом количестве.

Кровь получают путем венопункции в количестве 50 - 350 мл. Сыворотку через 10-12 часов отделяют центрифугованием и разливают в следующие емкости:

по 0,2 мл в 5 микропробирок,

по 5,0 мл в пенициллиновый флакон,

по 20,0-30,0 мл в бакпечатки.

На все емкости наклеивают этикетки, где указывается индекс сыворотки и дата эксфузии. Сыворотку сохраняют в холодильнике при температуре - 25 ... - 30°С. Первичное исследование сывороток проводят в лаборатории иммунологического типирования станций переливания крови в соответствии с методическими рекомендациями "Получение, хранение и применение тестовых реактивов для тканевого типирования при аллотрансплантациях и гемотрасфузиях" в издании "Иммунология и вопросы клиники и лечения гемотрансфузионных осложнений" М., 1979 г., стр. 277.

На отобранные активные сыворотки с предварительно установленной специфичностью заполняется карта анти-HLA тест-сыворотки. Образцы сывороток в количестве 0,4 мл в 2-х микропробирках вместе с картой направляются для дополнительного исследования и стандартизации во Всесоюзный банк гистотипирующих сывороток Ленинградского НИИ гематологии и переливания крови и в референс-лабораторию Института иммунологии Минздрава СССР 5,0 мл во флаконе и по 0,2 мл в 2-х микропробирках. Все образцы для исследования в указанных учреждениях направляются в одном термоконтейнере в Ленинградский НИИ гематологии и переливания крови с маркировкой емкостей "Для ЛенНИИ ГиПК", "Для Института иммунологии".

2. Для транспортировки сывороток используются термоконтейнеры ТКМ-3 или ТКМ-5, которые при укладке на 2/3 объема заполняют "сухим" льдом. Транспортировку сывороток можно производить любым видом транспорта, но срок нахождения контейнера в пути не должен превышать 48 часов. Контейнер должен иметь маркировку "Кровь" и "Содержать в холоде". При отправке сывороток следует соблюдать следующие требования: сыворотки отсылаются в ЛенНИИ ГиПК с 1 по 5 число каждого месяца; при отправке сывороток адресат должен быть уведомлен о дате отправки, виде транспорта, номере рейса, предполагаемых сроках прибытия.

3. Стандартизация сывороток производится: первичная - в Ленинградском НИИ гематологии и переливания крови (Всесоюзный банк гистотипирующих сывороток); заключительная - в референс-лаборатории Института иммунологии Минздрава СССР. На каждый образец пригодный для использования в качестве тест-сыворотки заполняются необходимые разделы карты и дается заключение о пригодности использования в типирующей панели. На поставку сывороток, соответствующих критериям гистотипирующих стандартов, Ленинградский НИИ ГиПК высылает запрос в лаборатории иммунологического типирования станций переливания крови для пополнения коллекции Всесоюзного банка и комплектации панелей.

4. Определение пригодности сывороток для включения в коллективную панель. В панель включают наиболее активные сыворотки, имеющие коэффициент корреляции не менее 0,8. Комплектацию панелей производит Ленинградский НИИ гематологии и переливания крови в соответствии с рекомендациями и под контролем референс-лаборатории Института иммунологии Минздрава СССР.

Комплектуют три панели сывороток:

I-я панель предназначена для сугубо производственных целей: подбора доноров для трансплантации органов и тканей, трансфузии крови и ее компонентов. В нее включают сыворотки против ограниченного числа антигенов, которые хорошо изучены и рекомендованы ВОЗ для практических целей. I панель является единой обязательной для этих учреждений, выполняющих трансплантацию органов и тканей, трансфузию крови и ее компонентов.

II-я панель предназначена для исследовательских целей: изучения серологии HLA антигенов и антител, изучения связи HLA с заболеваниями. В нее включают сыворотки против максимального числа антигенов HLA-системы.

III-я панель, предназначающаяся для проведения популяционных исследований, составляется из сывороток крови представителей различных национальностей.

Кроме того, составляется диагностическая панель.

Приготовленные панели проходят контроль и реферируются в референс-лаборатории Института иммунологии Минздрава СССР, для чего Всесоюзный банк гистотипирующих сывороток направляет сыворотки в количестве не менее 0,6 мл каждого образца. Исследование выполняется в течение 15 дней и дается заключение о качестве наборов и возможности их использования для тканевого типирования.

5. Распределение панели.

Панель сывороток направляет Ленинградский НИИ ГиПК два раза в год в соответствии с планом рассылки в учреждения службы крови и другие медицинские учреждения, занимающиеся тканевым типированием, по их заявкам с указанием для какой цели будут использованы сыворотки.

Начальник Главного управления лечебно-профилактической помощи Минздрава СССР

В.И. Калинин