Приложение Г (обязательное). Определение цвета и мутности патоки фотометрическим методом III. Метод ЕВС (Европейской ассоциации пивоваров)

Приложение Г
(обязательное)

Определение цвета и мутности патоки фотометрическим методом III.
Метод ЕВС (Европейской ассоциации пивоваров)

Г.1 Сущность метода заключается в измерении значения оптической плотности фильтрованного и нефильтрованного растворов патоки относительно дистиллированной воды с последующим пересчетом в значение цвета и мутности.

Г.2 Средства измерений, вспомогательные устройства и реактивы

Весы лабораторные с наибольшим пределом взвешивания 200 и 500 или 1000 г по ГОСТ 24104.

Фотометр или спектрофотометр с пределом допускаемого значения основной абсолютной погрешности при измерении коэффициента пропускания не более 0,5% и с пределом допускаемой абсолютной погрешности установки длины волны не более 3 нм.

Кюветы фотометрические длиной оптического пути 5 см.

Термостат жидкостный, обеспечивающий поддержание температуры °С.

Фильтры мембранные диаметром пор 0,45 мкм.

Колбы мерные 1-100-2 по ГОСТ 1770.

Термометр жидкостный стеклянный, диапазон измерения от 0°С до 100°С, цена деления шкалы 1°С по ГОСТ 28498.

Стаканы стеклянные В-1-150, В-1-250 ТС или ТХС по ГОСТ 25336.

Колбы конические Кн-1-250-34 ТС или ТХС по ГОСТ 25336.

Пипетки стеклянные мерные 1-1-2-1, 1-1-2-5, 1-1-2-10 по ГОСТ 29227.

Гидразин сернокислый, ч.д.а, по ГОСТ 5841.

Гексаметилентетрамин (уротропин) марки С, высший сорт по ГОСТ 1381 или фармакопейный.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709, профильтрованная через мембранный фильтр.

Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками, а также реактивов по качеству не ниже вышеуказанных.

Г.3 Подготовка к проведению анализа

Перед выполнением измерений необходимо настроить фотометр или спектрофотометр согласно инструкции по эксплуатации.

Г.3.1 Градуировка фотометра или спектрофотометра

Г.3.1.1 Приготовление суспензии формазина 1000 ЕВС

В стеклянные стаканы взвешивают 1,000 г сернокислого гидразина и 10,000 г гексаметилентетрамина. Навески растворяют в небольшом объеме дистиллированной воды и количественно переносят в мерные колбы вместимостью 100 . При температуре растворов 20°С доводят их объем дистиллированной водой до метки. Приготовленные растворы должны быть выдержаны при комнатной температуре не менее 4 ч.

Растворы гексаметилентетрамина и сернокислого гидразина смешивают в соотношении 1:1 в конической колбе и выдерживают не менее 24 ч в термостате при температуре °С.

Срок хранения суспензии формазина не более 6 мес при комнатной температуре.

Г.3.1.2 Приготовление суспензии формазина 100 ЕВС

Суспензию формазина, приготовленную по Г.3.1.1, разбавляют в 10 раз. Для этого пипеткой переносят 10  суспензии 1000 ЕВС в мерную колбу вместимостью 100 , доводят до метки дистиллированной водой при температуре суспензии 20°С и тщательно перемешивают. Срок хранения суспензии не более 14 дней при комнатной температуре.

Г.3.1.3 Приготовление градуировочных суспензий формазина

Градуировочные суспензии формазина 100 ЕВС готовят соответствующим разбавлением суспензии. Для этого в мерные колбы вместимостью 100  пипеткой переносят 0,1; 0,3; 0,5; 0,7; 0,8; 1,0; 2,0; 3,0; 5,0; 10,0  суспензии 100 ЕВС, доводят дистиллированной водой до метки при температуре суспензии 20°С и тщательно перемешивают. Полученные суспензии имеют значение мутности 0,1; 0,3; 0,5; 0,7; 0,8; 1,0; 2,0; 3,0; 5,0; 10,0 ЕВС соответственно. Их используют для градуировки фотометра или спектрофотометра. Срок хранения растворов - не более 1 сут при комнатной температуре.

Г.3.1.4 Проведение градуировки фотометра или спектрофотометра

Проводят измерение оптической плотности растворов 0,1 - 10,0 ЕВС при длине волны 560 нм по отношению к фильтрованной дистиллированной воде.

Строят график зависимости значений оптической плотности от значений мутности.

Допускается обработка результатов анализа методом линейной регрессии с использованием соответствующего компьютерного программного обеспечения (например Microcal Origin 5.0). В этом случае получают градуировочное уравнение

, (Г.1)

где М - мутность в единицах ЕВС;

- оптическая плотность, измеренная для суспензии формазина при длине волны 560 нм;

b и с - градуировочные коэффициенты.

Полученный градуировочный график или градуировочное уравнение используют для определения мутности.

Г.3.2 Подготовка пробы

В стеклянном стакане вместимостью 250  взвешивают 20 г патоки и 180 г горячей 40°С-50°С дистиллированной воды, тщательно перемешивают до полного растворения патоки, раствор охлаждают до комнатной температуры. Этот раствор используют для определения мутности.

100  приготовленного раствора патоки фильтруют через мембранный фильтр. Этот раствор используют для определения цвета.

Г.4 Проведение анализа

Устанавливают на фотометре или спектрофотометре светофильтры длиной волны 560 нм. Кювету сравнения прибора заполняют дистиллированной водой и устанавливают значение 0,000 оптической плотности.

Измерительную кювету прибора заполняют нефильтрованным раствором патоки и проводят измерение оптической плотности согласно инструкции по эксплуатации прибора.

Проводят два параллельных измерения.

Устанавливают на фотометре или спектрофотометре длину волны 430 нм. Кювету сравнения прибора заполняют дистиллированной водой и устанавливают значение 0,000 оптической плотности.

Измерительную кювету прибора заполняют фильтрованным раствором патоки и проводят измерение оптической плотности согласно инструкции по эксплуатации прибора.

Проводят два параллельных определения.

Г.5 Обработка результатов

Значение цвета в единицах ЕВС вычисляют по формуле

, (Г.2)

где - оптическая плотность, измеренная для фильтрованного раствора патоки при длине волны 430 нм;

50 - коэффициент, учитывающий разбавление патоки и длину оптического пути кюветы.

По градуировочному графику или уравнению вычисляют значение мутности в единицах ЕВС, соответствующее измеренному значению оптической плотности для нефильтрованного раствора при длине волны 560 нм.

За окончательный результат анализа принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений.

Вычисление проводят до третьего десятичного знака с последующим округлением до второго десятичного знака.

Сходимость результатов определений (допускаемое расхождение между результатами двух параллельных определений) при определении цвета и мутности не должна превышать 0,10 ЕВС абс.

Воспроизводимость результатов анализа (допустимые расхождения между результатами анализов, выполненных в разных лабораториях) при определении цвета и мутности не должна превышать 0,20 ЕВС абс.

Допускаемая абсолютная погрешность ЕВС.