Государственный стандарт СССР ГОСТ 29032-91 "Продукты переработки плодов и овощей. Методы определения оксиметилфурфурола" (утв. постановлением Государственного комитета СССР по управлению качеством продукции и стандартам от 17 июня 1991 г. N 882) (документ утратил силу)

Государственный стандарт СССР ГОСТ 29032-91
"Продукты переработки плодов и овощей. Методы определения оксиметилфурфурола"
(утв. постановлением Государственного комитета СССР по управлению качеством продукции и стандартам от 17 июня 1991 г. N 882)

Fruit and vegetable products. Methods for determination of hydroxymethylfurfural

Дата введения - 1 июля 1982 г.

Введен впервые

Настоящий стандарт распространяется на продукты перераработки плодов и овощей и устанавливает методы определения оксиметилфурфурола, образующегося при тепловой обработке плодов и овощей.

Требования стандарта являются обязательными.

1. Фотометрический метод

1.1. Сущность метода

Метод основан на измерении интенсивности окраски производного оксиметилфурфурола с n-толуидином и барбитуровой кислотой в водной вытяжке из пробы продукта. Нижний предел определения оксиметилфурфурола - 2 мг/кг.

Метод не распространяется на продукты переработки цитрусовых плодов.

1.2. Отбор и подготовка проб

Отбор проб - по ГОСТ 26313, подготовка их к испытаниям - ГОСТ 26671.

1.3. Аппаратура, материалы, реактивы

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания до 20 г не ниже 3-го класса точности.

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания до 500 г 41-го класса точности.

Колориметр фотоэлектрический лабораторный по ГОСТ 12083 с пределами измерений оптической плотности от 0 до 2 и пределом допускаемой основной абсолютной погрешности при измерении коэффициента пропускания не более 1%, со светофильтром с длиной волны, (5410) нм и кюветами рабочей длиной 30 мм.

Стаканы по ГОСТ 25336 исполнения 1 типа В вместимостью 50 и 150 .

Колба плоскодонная по ГОСТ 25336 исполнения 2 вместимостью 250 .

Воронка лабораторная по ГОСТ 25336 типа В диаметром 56 мм и высотой 80 мм.

Пипетка по ГОСТ 20292 исполнения 6 или 7 вместимостью 10 .

Пипетка по ГОСТ 20292 исполнения 4 или 5 вместимостью 22 .

Колбы мерные по ГОСТ 1770 исполнения 2 вместимостью 50, 100 и 250 .

Цилиндр мерный по ГОСТ 1770 вместимостью 25 или 50 .

Баня водяная.

Электроплитка по ГОСТ 14919.

Термометр жидкостный стеклянный по ГОСТ 27544 с пределом допускаемой погрешности 1°С в диапазоне измерений 0 - 100°С.

Фильтры бумажные обеззоленные марки ФОМ по ГОСТ 12026-76.

Оксиметилфурфурол кристаллический, перекристаллизованный при температуре (1153)°С и давлении 1,3 Па.

Калий железистосинеродистый 3-водный по ГОСТ 4207, х. ч., раствор концентрацией 150 (раствор Карреза I).

Цинк уксуснокислый 2-водный по ГОСТ 5823, ч. д. а., раствор концентрацией 300 (раствор Карреза II).

n-Толуидин по ТУ 6-09-66, ч.

Кислота барбитуровая по ТУ 6-09-512, ч.

Кислота уксусная по ГОСТ 61, х. ч.

Спирт изопропиловый (2-пропанол) по ГОСТ 9805, ч.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

1.4. Подготовка к испытанию

1.4.1 Приготовление основного раствора оксиметилфурфурола

0,1000 г кристаллического оксиметилфурфурола количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 , доводят до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают. 1  полученного раствора переносят пипеткой в другую колбу вместимостью 100 , доводят до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают. Получают раствор оксиметилфурфурола концентрацией 10 . Раствор хранят в холодильнике при температуре не выше 5°С в сосуде с притертой пробкой, завернутой в алюминиевую фольгу, не более 2 мес.

1.4.2. Приготовление реактивов для проведения цветной реакции

Реактив 1. 10,00 г n-толуидина растворяют в 60 - 70 изопропилового спирта при нагреваний на водяной бане при температуре 45 - 50°С, добавляют 10  уксусной кислоты, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 , охлаждают до 20°С и доводят до метки изопропиловым спиртом.

Реактив 2. 0,50 г барбитуровой кислоты растворяют в 60 - 70 дистиллированной воды при нагревании на водяной бане при температуре 45 - 50°С, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 , охлаждают до 20°С н доводят до метки дистиллированной водой.

Реактивы 1 и 2 хранят в холодильнике при температуре не выше 5°С в плотно закрытых сосудах, завернутых в алюминиевую фольгу. Срок годности реактивов 1 и 2 при этих условиях - 1 мес.

1.4.3. Построение градуировочного графика

1.4.3.1. Приготовление контрольного раствора

B стакан вместимостью 50  вносят пипеткой 4,5  дистиллированной воды и 7,5  реактива 1, перемешивают.

1.4.3.2. Приготовление рабочих растворов

В 6 стаканов вместимостью 50  вносят пипеткой 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 и 3,0  основного раствора оксиметилфурфурола. Дистиллированной водой с помощью пипетки доводят объем содержимого до 3,0 . Масса оксиметилфурфурола в каждом растворе равна соответственно 5, 10, 15, 20, 25 и 30 мкг.

1.4.3.3. Проведение цветной реакции и фотометрирование

В стаканы с рабочими растворами добавляют по 7,5  реактива 1, перемешивают. С содержимым каждого стакана поочередно проводят следующие операции. В стакан пипеткой вносят 1,5  реактива 2, перемешивают, переносят в кювету фотоэлектроколориметра и наблюдают изменение оптической плотности в течение 3 - 4 мин от момента внесения реактива 2 при светофильтре с длиной волны, соответствующей максимуму пропускания, (54010) нм против контрольного раствора. Отмечают максимальное значение оптической плотности.

1.4.3.4. По полученным данным строят график зависимости оптической плотности от количества оксиметилфурфурола в микрограммах.

1.5. Проведение испытания

1.5.1. Приготовление водной вытяжки из образца

Навеску продукта массой 40,0 - 60,0 г (в зависимости от предполагаемого содержания оксиметилфурфурола) помещают в стакан вместимостью 150 , смешивают с небольшим количеством дистиллированной воды и количественно переносят в мерную колбу вместимостью 250 . Цилиндром добавляют 15  раствора Карреза 1 и 15  раствора Карреза III. Содержимое колбы доводят до метки дистиллированной водой, тщательно перемешивают и фильтруют в плоскодонную колбу через бумажный складчатый фильтр.

1.5.2. Проведение цветной реакции и фотометрирование

В два стакана вместимостью 50  вносят пипеткой 3  водной вытяжки из образца и 7,5  реактива 1, перемешивают. В один из стаканов добавляют 1,5  дистиллированной воды, перемешивают, переносят в кювету фотоэлектроколориметра (контрольный раствор). В другой стакан добавляют 1,5  реактива 2, перемешивают, переносят в кювету фотоэлектроколориметра и наблюдают изменение оптической плотности в течение 3 - 4 мин от момента внесения реактива 2 при светофильтре с длиной волны, соответствующей максимуму пропускания, (54010) нм против контрольного раствора. Отмечают максимальное значение оптической плотности.

1.6. Обработка результатов

Массовую долю оксиметилфурфурола (X), (мг/кг), вычисляют по формуле

,

- масса оксиметилфурфурола в испытуемом растворе, найденная по градуировочному графику, мкг;

- объем водной вытяжки из пробы продукта, ;

- объем вытяжки, используемой для проведения цветной реакции, ;

- масса навески продукта, г.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений, допускаемое относительное расхождение между которыми не должно превышать 5% (Р = 0,95).

2. Метод тонкослойной хроматографии

2.1. Сущность метода

Метод основан на экстракции оксиметилфурфурола из продукта органическим растворителем и определении оксиметилфурфурола с помощью метода тонкослойной хроматографии. Нижний предел определения оксиметилфурфурола - 8 мг/кг.

Метод распространяется на продукты переработки цитрусовых плодов.

2.2. Отбор и подготовка проб

Отбор проб и подготовка их к испытаниям - по п. 1.2.

2.3. Аппаратура, материалы, реактивы

При проведении испытания используют аппаратуру, материалы и реактивы, указанные в п. 1.3, за исключением фотоэлектроколориметра, n-толуидина, барбитуровой и уксусной кислот со следующими дополнениями:

микрошприц МШ-10 вместимостью 0,01 ;

камеру для тонкослойной хроматографии с притертой крышкой;

колбу круглодонную по ГОСТ 25336 исполнения 2 с взаимозаменяемым конусом 14/23 вместимостью 50 ;

распылитель стеклянный с грушей;

вату медицинскую гигроскопическою по ГОСТ 5556;

пластинки для тонкослойной хроматографии "Силуфол" 15Х15 см фирмы Кавалиер, ЧССР;

эфир этиловый технический по ГОСТ 6265, не содержащий перекисей;

эфир этиловый уксусной кислоты по ГОСТ 22300, ч. д. а. (этилацетат);

кислоту муравьиную по ГОСТ 5848;

бензидин, раствор в муравьиной кислоте концентрацией 5 ;

натрий сернокислый безводный по ГОСТ 4166, х. ч., прокаленный.

2.4. Подготовка к испытанию

2.4.1. Приготовление основного раствора оксиметилфурфурола

0,1000 г кристаллического оксиметилфурфурола количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 , доводят до метки этилацетатом и тщательно перемешивают. 1  полученного раствора переносят пипеткой в другую мерную колбу вместимостью 100 , доводят до метки этилацетатом и тщательно перемешивают. Получают раствор оксиметилфурфурола концентрацией 10 . Раствор хранят в холодильнике при температуре не выше 5°С в сосуде с притертой пробкой, плотно завернутой в алюминиевую фольгу, не более 6 мес.

2.5. Проведение испытания

2.5.1. Приготовление водной вытяжки из образца

Водную вытяжку из образца готовят по п. 1.5.1.

2.5.2. Экстрагирование оксиметилфурфурола из водной вытяжки

В стакан вместимостью 50  пипетками вносят 1,0  водной вытяжки из образца и 10,0  этилового эфира. Содержимое перемешивают в течение 1 мин, затем в стакан добавляют около 5 г сернокислого натрия. Содержимое стакана перемешивают стеклянной палочкой, разрушая крупные комки соли. Смеси дают отстояться, после чего эфир декантируют через ватный тампон в круглодонную колбу. Остаток в стакане промывают еще два раза свежими порциями эфира, каждый раз тщательно перемешивая содержимое стакана. Эфирный экстракт упаривают досуха на водяной бане при температуре 35 - 40°С. Остаток в круглодонной колбе перерастворяют в 0,5  этилацетата.

2.5.3. Хроматографическое разделение

На пластинку "Силуфол" снизу и сверху наносят две тонкие карандашные линии на расстоянии 2 см от краев. На нижней линии отмечают 12 точек на расстоянии 8 - 10 мм друг от друга, при этом расстояние от крайних точек до краев пластины должно быть не менее 1 см. В шесть точек микрошприцем наносят различные объемы основного раствора оксиметилфурфурола, чередуя пятна со свободными точками. Количество оксиметилфурфурола в пятнах должно быть от 0,025 до 0,150 мкг. В оставшиеся точки микрошприцем наносят этилацетатные экстракты из исследуемых образцов (от одного до шести), объемом 0,001 - 0,020  в зависимости от ожидаемого содержания оксиметилфурфурола. Пластинку стартовой линией вниз помещают в камеру для тонкослойной хроматографии, предварительно заполненную этилацетатом на высоту около 1 см. Развитие хроматограммы проводят до достижения фронтом растворителя верхней карандашной линии. Пластинку извлекают из камеры и сушат в вытяжном шкафу до исчезновения запаха растворителя.

2.5.4. Обнаружение оксиметилфурфурола

Пластинку опрыскивают из распылителя раствором бензидина, затем сушат в вытяжном шкафу в течение 5 - 10 мин. Оксиметилфурфурол обнаруживают в виде желтых пятен. Обнаружение на пластинке пятна, соответствующего по цвету и хроматографической подвижности пятнам основного раствора оксиметилфурфурола, свидетельствует о наличии оксиметилфурфурола в продукте. Количество оксиметилфурфурола определяют, сравнивая размер и интенсивность окраски пятен основного раствора оксиметилфурфурола и пятна оксиметилфурфурола в анализируемой пробе.

2.6. Обработка результатов

Массовую долю оксиметилфурфурола (X), (мг/кг), вычисляют по формуле

,

где - количество оксиметилфурфурола, обнаруженное в пятне, мкг;

- объем водной вытяжки из пробы продукта, ;

- общий объем этилацетатного экстракта, ;

m - масса навески продукта, г;

- объем водной вытяжки, используемый для экстрагирования оксиметилфурфурола, ;

- объем этилацетатного экстракта, наносимого на пластинку, ;

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений, допускаемое относительное расхождение между которыми, не должно превышать 20% (Р = 0,95).