Откройте актуальную версию документа прямо сейчас
Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.
Вход
Купить систему ГАРАНТ
Получить демо-доступ
Узнать стоимость
Информационный банк
Подобрать комплект
Семинары
Приложение А (справочное). Состав питательных сред
Приложение А
(справочное)
Состав
питательных сред
А.1 Среды для поддержания выделенных культур и культивирования бактерий рода Listeria
А.1.1 Триптон-соевый бульон с дрожжевым экстрактом (TSYEB)*
Состав среды на 1 , г:
гидролизат казеина ферментативный......................17,0
папаиновый отвар соевой муки.......................... 3,0
хлорид натрия......................................... 5,0
дрожжевой экстракт.................................... 6,0
гидрофосфат калия..................................... 2,5
глюкоза............................................... 2,5
рН................................................... 7,3+-0,1
Компоненты растворяют при нагревании в 1000 дистиллированной воды и тщательно перемешивают до полного растворения. Устанавливают рН
и стерилизуют в автоклаве при температуре
°С в течение 15 мин.
Приготовленную среду хранят не более 22 сут в защищенном от света месте при температуре не выше 8°С.
А.1.2 Триптон-соевый агар с дрожжевым экстрактом (TSYEA)*
Состав среды на 1 , г:
гидролизат казеина ферментативный.....................17,0
папаиновый отвар соевой муки......................... 3,0
хлорид натрия........................................ 5,0
дрожжевой экстракт................................... 6,0
гидрофосфат калия.................................... 2,5
глюкоза.............................................. 2,5
агар-агар............................................15,0
рН.................................................. 7,3+-0,1
Компоненты растворяют при нагревании в 1000 дистиллированной воды и тщательно перемешивают до полного растворения. Устанавливают рН
и стерилизуют в автоклавах при температуре
°С в течение 15 мин.
Приготовленную среду разливают в чашки Петри и хранят не более 22 сут в защищенном от света месте при температуре не выше 8°С.
А.1.3 Трипказо-соевый бульон (TSB)**
Состав среды на 1 , г:
био-трипказа..........................................17,0
био-сойаза........................................... 3,0
хлорид натрия........................................ 5,0
дигидрофосфат калия.................................. 2,5
декстроза............................................ 2,5
рН................................................... 7,3+-0,1
Компоненты растворяют при нагревании в 1000 дистиллированной воды и тщательно перемешивают до полного растворения. Устанавливают рН
и стерилизуют в автоклавах при температуре
°С в течение 15 мин.
Приготовленную среду хранят не более 4 мес в защищенном от света месте при температуре не выше 8°С.
Допускается использовать трипказо-соевый бульон взамен триптон-соевого бульона с дрожжевым экстрактом по А.1.1.
А.1.4 Трипказо-соевый агар (TSA)**
Состав среды на 1 , г:
био-трипказа..........................................15,0
био-сойаза........................................... 5,0
хлорид натрия........................................ 5,0
агар-агар............................................ 5,0
рН................................................... 7,3+-0,1
Компоненты растворяют при нагревании в 1000 дистиллированной воды и тщательно перемешивают до полного растворения. Устанавливают рН
и стерилизуют при температуре
°С в течение 15 мин.
Приготовленную среду разливают в чашки Петри и хранят не более 47 сут в защищенном от света месте при температуре не выше 8°С.
Допускается использовать трипказо-соевый агар взамен триптон-соевого агара с дрожжевым экстрактом по А.1.2.
А.2 Среды селективные для предварительного обогащения
А.2.1 Питательный бульон для выделения и культивирования листерий (ПБЛ I)
Состав основы среды на 1 , г:
гидролизат казеина ферментативный.....................10,0
пептон ферментативный мясной..........................15,0
гидролизат автолизованных дрожжей.................... 2,0
хлорид натрия........................................ 3,5
хлорид лития......................................... 3,0
рН................................................... 7,0+-0,2
Компоненты растворяют при нагревании в 1000 дистиллированной воды и тщательно перемешивают до полного растворения. Устанавливают рН
и стерилизуют в автоклаве при температуре
°С в течение 15 мин.
Перед употреблением к 1 основы среды с соблюдением правил асептики добавляют 4,44
раствора селективных компонентов. Раствор готовят следующим образом: 10 мг налидиксовой кислоты, 5 мг акрифлавина и 5 мг полимиксина В сульфата*** растворяют в 10
стерильного физиологического раствора.
Приготовленную среду разливают в стерильные колбы по 225 и хранят не более 2 сут в защищенном от света месте при температуре не выше 8°С.
А.2.2 Полуконцентрированный бульон Фразера (Half Eraser broth)
А.2.2.1 Состав основы среды* на 1 , г:
гидролизат казеина ферментативный.................... 5,0
пептический отвар животной ткани..................... 5,0
дрожжевой экстракт................................... 5,0
хлорид натрия.........................................20,0
дигидрофосфат калия...................................1,35
гидрофосфат натрия................................... 12,0
эскулин.............................................. 1,0
хлорид лития......................................... 3,0
цитрат аммонийного железа............................ 0,5
рН................................................... 7,2+-0,2
Компоненты растворяют при нагревании в 1000 дистиллированной воды и тщательно перемешивают до полного растворения. Устанавливают рН
и стерилизуют в автоклаве при температуре
°С в течение 15 мин.
Перед употреблением к 1 основы среды с соблюдением правил асептики добавляют селективные компоненты: 10 мг налидиксовой кислоты и 12,5 мг акрифлавина, растворенные в 10
стерильного раствора гидроокиси натрия концентрации 0,2
.
Приготовленную среду разливают в стерильные колбы (по 225 ) и хранят не более 22 сут в защищенном от света месте при температуре не выше 6°С.
А.2.2.2 Состав среды (готовая форма, 225 )** на 1
, г:
пептон...............................................10,0
мясной экстракт...................................... 5,0
дрожжевой экстракт................................... 5,0
хлорид натрия.........................................20,0
дигидрофосфат калия...................................1,35
гидрофосфат натрия....................................12,0
эскулин.............................................. 1,0
хлорид лития......................................... 3,0
цитрат аммонийного железа............................ 0,5
акрифлавин............................................0,0125
налидиксовая кислота..................................0,01
рН................................................... 7,3+-0,1
Среду хранят не более 6 мес в защищенном от света месте при температуре не выше 8°С. Допускается использовать полуконцентрированный бульон Фразера взамен ПБЛ I по А.2.1.
А.3 Среды селективные для обогащения
А.3.1 Питательный бульон для выделения и культивирования листерий (ПБЛ II)
Состав основы среды на 1 , г:
гидролизат казеина ферментативный....................10,0
пептон...............................................15,0
гидролизат автолизованных дрожжей................... 2,0
хлорид натрия....................................... 3,5
хлорид лития........................................ 3,0
рН.................................................. 7,0+-0,2
Компоненты растворяют при нагревании в 1000 дистиллированной воды и тщательно перемешивают до полного растворения. Устанавливают рН
и стерилизуют в автоклаве при температуре
°С в течение 15 мин.
Перед употреблением к 1 основы среды с соблюдением правил асептики добавляют 4,44
раствора селективных компонентов. Раствор готовят следующим образом: 10 мг налидиксовой кислоты, 5 мг акрифлавина и 5 мг полимиксина В сульфата*** растворяют в 5
стерильного физиологического раствора.
Приготовленную среду разливают в стерильные пробирки (по 10 ) и хранят не более 22 сут в защищенном от света месте при температуре не выше 8°С.
А.3.2 Бульон Фразера (Fraser broth)
А.3.2.1 Состав основы среды* на 1 , г:
гидролизат казеина ферментативный................... 5,0
пептический отвар животной ткани.................... 5,0
дрожжевой экстракт.................................. 5,0
хлорид натрия........................................20,0
дигидрофосфат калия..................................1,35
гидрофосфат натрия...................................12,0
эскулин............................................. 1,0
хлорид лития........................................ 3,0
цитрат аммонийного железа........................... 0,5
рН.................................................. 7,2+-0,2
Компоненты растворяют при нагревании в 1000 дистиллированной воды и тщательно перемешивают до полного растворения. Устанавливают рН
и стерилизуют в автоклаве при температуре
°С в течение 15 мин.
Перед употреблением к 1 основы среды с соблюдением правил асептики добавляют селективные компоненты: 100 мг налидиксовой кислоты и 250 мг акрифлавина, растворенные в 10
стерильного раствора гидроокиси натрия концентрации 0,2
.
Приготовленную среду разливают в стерильные пробирки по 10 и хранят не более 22 сут в защищенном от света месте при температуре не выше 6°С.
А.3.2.2 Состав среды (готовая форма, 10 )** на 1
, г:
пептон................................................10,0
мясной экстракт...................................... 5,0
дрожжевой экстракт................................... 5,0
хлорид натрия.........................................20,0
буферная смесь........................................13,35
эскулин.............................................. 1,0
хлорид лития......................................... 3,0
цитрат аммонийного железа............................ 0,5
акрифлавин............................................0,025
налидиксовая кислота..................................0,02
рН................................................... 7,3+-0,1
Среду хранят не более 6 мес в защищенном от света месте при температуре не выше 8°С.
Допускается использовать бульон Фразера взамен ПБЛ II по А.3.1.
А.4 Среды селективно-диагностические
А.4.1 Питательный агар для выделения листерий (ПАЛ)
Состав основы среды на 1 , г:
гидролизат казеина панкреатический...................10,0
гидролизат рыбной муки панкреатический...............15,0
гидролизат автолизованных дрожжей................... 2,0
хлорид натрия....................................... 3,5
хлорид лития.........................................15,0
цитрат аммонийного железа........................... 0,5
эскулин............................................. 0,8
агар-агар............................................13,0
рН.................................................. 7,0+-0,2
Компоненты растворяют при нагревании в 1000 дистиллированной воды и тщательно перемешивают до полного растворения. Устанавливают рН
и стерилизуют в автоклаве при температуре
°С в течение 15 мин.
К 1 стерильной расплавленной основы среды добавляют с соблюдением правил асептики 4,44
раствора селективных компонентов. Раствор готовят следующим образом: 0,02 г налидиксовой кислоты, 0,01 г полимиксина В сульфата*** и 0,01 г акрифлавина растворяют в 10
стерильной дистиллированной воды и тщательно перемешивают.
Приготовленную питательную среду разливают в стерильные чашки Петри и хранят не более 22 сут в защищенном от света месте при температуре не выше 8°С.
А.4.2 Оксфордский агар (Oxford agar)
А.4.2.1 Состав основы среды* на 1 , г:
пептон...............................................23,0
крахмал кукурузный.................................. 1,0
хлорид натрия....................................... 5,0
эскулин............................................. 1,0
хлорид лития.........................................15,0
цитрат аммонийного железа........................... 0,5
агар-агар............................................10,0
рН.................................................. 7,0+-0,2
Компоненты растворяют при нагревании в 1000 дистиллированной воды и тщательно перемешивают до полного растворения. Устанавливают рН
и стерилизуют в автоклаве при температуре
°С в течение 15 мин.
К 1 стерильной расплавленной основы среды добавляют с соблюдением правил асептики селективные компоненты: 0,005 г акрифлавина, 0,02 г колистина, 0,4 г циклогексимида, 0,01 г фосфомидина, 0,002 г цефотетана, растворенные в 10
стерильной дистиллированной воды.
Приготовленную питательную среду разливают в стерильные чашки Петри и хранят не более 22 сут в защищенном от света месте при температуре не выше 8°С.
А.4.2.2 Состав среды (готовая форма)** на 1 , г:
пептон...............................................23,0
крахмал............................................. 1,0
хлорид натрия....................................... 5,0
эскулин............................................. 1,0
хлорид лития.........................................15,0
цитрат аммонийного железа........................... 0,5
акрифлавин...........................................0,005
колистин.............................................0,02
циклогексимид....................................... 0,4
цефотетан............................................0,002
фосфомицин...........................................0,01
агар-агар............................................10,0
рН.................................................. 7,0+-0,1
Среду хранят не более 6 мес в защищенном от света месте при температуре не выше 8°С.
Допускается использовать Оксфордский агар взамен среды ПАЛ по А. 4.1.
А.4.3 ПАЛКАМ агар (PALCAM agar)
А.4.3.1 Состав основы среды* на 1 , г:
пептон..............................................23,0
крахмал............................................ 1,0
хлорид натрия. .. ................................. 5,0
эскулин............................................ 0,8
хлорид лития........................................15,0
цитрат аммонийного железа.......................... 0,5
глюкоза............................................ 0,5
маннит..............................................10,0
феноловый красный...................................0,08
агар-агар...........................................13,0
рН................................................. 7,0+-0,2
Компоненты растворяют в 1000 дистиллированной воды и тщательно перемешивают. Устанавливают рН
и стерилизуют в автоклаве при температуре
°С в течение 15 мин.
К 1 стерильной расплавленной основы среды добавляют с соблюдением правил асептики селективные компоненты: 0,005 г акрифлавина, 0,01 г полимиксина В, 0,02 г цефтазидина, растворенные в 10
стерильной дистиллированной воды.
Приготовленную питательную среду разливают в стерильные чашки Петри и хранят не более 22 сут в защищенном от света месте при температуре не выше 8°С.
А.4.3.2 Состав среды (готовая форма)** на 1 , г:
пептон...............................................23,0
дрожжевой экстракт.................................. 3,0
крахмал............................................. 1,0
хлорид натрия....................................... 5,0
эскулин............................................. 0,8
хлорид лития.........................................15,0
цитрат аммонийного железа........................... 0,5
декстроза........................................... 0,5
маннит...............................................10,0
феноловый красный....................................0,08
акрифлавин...........................................0,005
полимиксин В сульфат.................................0,01
цефтазидин...........................................0,02
агар-агар............................................10,0
рН.................................................. 7,2+-0,1
Среду хранят не более 6 мес в защищенном от света месте при температуре не выше 8°С.
Допускается использовать ПАЛКАМ агар взамен среды ПАЛ по А. 4.1.
А.5 Среда для изучения биологических свойств при идентификации листерий
А.5.1 Полужидкая питательная среда для определения подвижности листерий (Listeria motility medium)*
Состав среды на 1 , г:
гидролизат казеина ферментативный.....................20,0
пептон............................................... 6,1
хлорид натрия........................................ 5,0
агар-агар............................................ 3,5
рН................................................... 7,3+-0,2
Компоненты растворяют в 1000 дистиллированной воды, кипятят до полного растворения среды и стерилизуют в автоклаве при температуре
°С в течение 15 мин.
Приготовленную среду хранят не более 22 сут в защищенном от света месте при температуре не выше 8°С.
А.6 Требования к микробиологическим питательным средам и биологическим препаратам
Питательные среды и биологические препараты отечественного производства должны вырабатываться по нормативной и технической документации, утвержденной в установленном порядке.
Питательные среды и биологические препараты импортного производства должны иметь разрешение Министерства здравоохранения Российской Федерации на их применение, выданное на основании международных сертификатов качества ИСО 9000 или EN 29000.
------------------------------
* По прописи фирмы "HiMedia Lab. Ltd.", Индия.
** По прописи фирмы "BioMerieux.", Франция.
*** Допускается применение других веществ, обладающих аналогичными ингибиторными свойствами.
|
<< Назад |
Приложение >> Б (справочное). Библиография |
|
|
Содержание Государственный стандарт РФ ГОСТ Р 51921-2002 "Продукты пищевые. Методы выявления и определения бактерий Listeria monocytogenes"... |