Методические указания МУК 4.2.3009-12 "Порядок организации и проведения лабораторной диагностики лихорадки Западного Нила для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней" (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом РФ 29 марта 2012 г.)

4.2. Методы контроля: биологические и микробиологические факторы

Методические указания МУК 4.2.3009-12
"Порядок организации и проведения лабораторной диагностики лихорадки Западного Нила для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней"
(утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом РФ 29 марта 2012 г.)

Дата введения: 29 марта 2012 г.
Введены впервые

1. Область применения

1. Настоящие методические указания (далее - МУ) определяют порядок организации и проведения лабораторной диагностики лихорадки Западного Нила в лабораториях территориального, регионального и федерального уровней, формы и методы их взаимодействия, номенклатуру и объем исследования, требования к лабораториям, специалистам и персоналу, участвующим в выполнении исследований, материально-техническому обеспечению исследований, к биологической безопасности проведения работ.

2. Настоящие МУ предназначены для специалистов органов, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор в Российской Федерации, специалистов противочумных учреждений, органов исполнительной власти в области охраны здоровья граждан и медицинских организаций независимо от их организационно-правовой формы и формы собственности.

2. Нормативные ссылки

2.1 Федеральный закон от 03.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".

ГАРАНТ:

По-видимому, в тексте предыдущего абзаца допущена опечатка. Дату названного Федерального закона следует читать как "30.03.1999"

2.2. Федеральный закон от 04.05.2011 N 99-ФЗ "О лицензировании отдельных видов деятельности".

2.3. Постановление Правительства Российской Федерации от 22.01.2007 г. N 31 "Об утверждении положения о лицензировании деятельности, связанной с использованием возбудителей инфекционных заболеваний".

2.4. Постановление Правительства Российской Федерации от 29.10.2007 N 720 "О внесении изменений в пункт 5 Положения о лицензировании деятельности, связанной с использованием возбудителей инфекционных заболеваний, утвержденного постановлением Правительства Российской Федерации от 22.01.2007 N 31".

2.5. Приказ Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации от 07.07.2009 N 415н "Об утверждении квалификационных требований к специалистам с высшим и послевузовским медицинским и фармацевтическим образованием в сфере здравоохранения" (Зарегистрирован в Минюсте Российской Федерации 09.07.2009 N 14292).

2.6. Международные медико-санитарные правила (2005 г.). - ВОЗ, Женева, 2006. 80 с.

2.7. Санитарные правила "Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности". СП 1.2.036-95

ГАРАНТ:

Нумерация пунктов приводится в соответствии с источником

2.6. Санитарные правила "Общие требования по профилактике инфекционных и паразитарных болезней". СП 3.1./3.2.1379-03

2.8. Санитарно-эпидемиологические правила и нормативы "Санитарно-эпидемиологические требования к организации и проведению дезинсекционных мероприятий против синантропных членистоногих". СанПиН 3.5.2.1376-03. - М., 2003.

2.9. Санитарно-эпидемиологические правила "Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)". СП 1.3.1285-03 (Утв. постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 15.04.2003 N 42 "О введении в действие санитарно-эпидемиологических правил СП 1.3.1285-03". Зарегистрировано в Минюсте Российской Федерации 10.05.2003 N 4545).

2.10. "Санитарно-эпидемиологические требования к организации и осуществлению дезинфекционной деятельности". СП 3.5.1378-03".

2.11. Санитарно-эпидемиологические правила "Санитарная охрана территории Российской Федерации". СП 3.4.2318-08.

2.12. Санитарно-эпидемиологические правила и нормативы "Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами". СанПиН 2.1.7.2790-10.

2.13. Санитарно-эпидемиологические правила и нормативы "Санитарно-эпидемиологические требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность". СанПиН 2.1.3.2630-10.

2.14. Приказ Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 17.03.2008 N 88 "О мерах по совершенствованию мониторинга за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней".

2.15. Приказ Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 18.04.2011 N 385 "О совершенствовании эпидемиологического надзора и профилактике лихорадки Западного Нила в Российской Федерации".

2.16. Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 24.02.2009 N 11 "О представлении внеочередных донесений о чрезвычайных ситуациях в области общественного здравоохранения санитарно-эпидемиологического характера"

2.17. Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 14.04.2011 N 31 "О совершенствовании эпидемиологического надзора и профилактике лихорадки Западного Нила"

2.17. Методические указания "Мероприятия по борьбе с лихорадкой Западного Нила на территории Российской Федерации". МУ 3.1.3.2600-10.

2.18. Методические указания по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения. МУ-287-113 от 30.12.1998 г.

2.19. Методические указания "Сбор, учет и подготовка к лабораторному исследованию кровососущих членистоногих-переносчиков возбудителей природно-очаговых инфекций". МУ 3.1.1027-01.

2.20. Методические указания "Отлов, учет и прогноз численности мелких млекопитающих и птиц в природных очагах инфекций". МУ 3.1.1029-01.

2.21. Методические указания "Организация и проведение первичных противоэпидемических мероприятий в случаях выявления больного (трупа), подозрительного на заболевания инфекционными болезнями, вызывающими чрезвычайные ситуации в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения". МУ 3.4.2552-09.

2.22. Методические указания "Организация, обеспечение и оценка противоэпидемической готовности медицинских учреждений к проведению мероприятий в случае завоза или возникновения особо опасных инфекций, контагиозных вирусных геморрагических лихорадок, инфекционных болезней неясной этиологии, представляющих опасность для населения Российской Федерации и международного сообщения". МУ 3.4.1030-01.

2.23. Методические указания "Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории". МУ 4.2.2039-05.

2.24. Методические указания "Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности". МУ 1.3.2569-09.

2.25. Методические указания "Контроль численности кровососущих комаров рода Culex, места выплода которых находятся в населенных пунктах". МУ 3.2.2568-09.

3. Перечень сокращений

Аг - антиген;

Ат - антитело;

ВЗН - вирус Западного Нила;

ИА - индекс авидности;

ИФА - иммуноферментный анализ;

ЛЗН - лихорадка Западного Нила;

КРС - крупный рогатый скот;

КЭ - клещевой энцефалит;

МРС - мелкий рогатый скот;

МУ - методические указания;

МУК - методические указания по контролю;

ООИ - особо опасные инфекции;

ОТ-ПЦР - полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией;

ПЦР - полимеразная цепная реакция;

ПЧС - противочумная станция;

РНК - рибонуклеиновая кислота;

СанПиН - Санитарные правила и нормы;

СП - Санитарные правила;

СМЖ - спинномозговая жидкость;

ТИФА - твердофазный иммуноферментный анализ;

т.п.н. - тысяч пар нуклеотидов;

ЦНС - центральная нервная система;

IgG - иммуноглобулины класса G;

IgM - иммуноглобулины класса М.

4. Общие положения

4.1. Характеристика болезни и возбудителя лихорадки Западного Нила

Лихорадка Западного Нила (ЛЗН) - природно-очаговая арбовирусная инфекционная болезнь с трансмиссивным механизмом передачи возбудителя. В соответствии с "Международной статистической классификацией болезней и проблем, связанных со здоровьем" (Десятый пересмотр. - Женева, 2003. МКБ-10) болезнь кодируется как А92.3 - Лихорадка Западного Нила. Как правило, вирус Западного Нила вызывает у человека бессимптомную инфекцию. Примерно у 20% инфицированных людей возможно развитие вирусной лихорадки, которая протекает относительно лёгко с гриппоподобными симптомами: лихорадка (от умеренной до высокой), головная боль (чаще фронтальная), миалгии, артралгии, слабость, тошнота и респираторная симптоматика. ЛЗН протекает у человека в виде острого лихорадочного заболевания с симптомами общей интоксикации; в тяжелых случаях с поражением ЦНС - серозным воспалением мозговых оболочек, реже - менингоэнцефалитом и острым вялым параличом, которые часто наблюдаются в комбинации. Менингиальные и менингоэнцефалитические явления встречаются приблизительно в 15 процентов случаев. Летальность при ЛЗН составляет около 4 %. Обычно летальные формы заболевания характерны для людей старшего и пожилого возраста: для пожилых людей летальность от ЛЗН может достигать 10%. Инкубационный период от 2 до 8-14 дней, в среднем 3-6 суток.

На территории юга Российской Федерации ЛЗН имеет летне-осеннюю сезонность. Пик заболеваемости совпадает с максимальной численностью и инфицированностью комаров - основных переносчиков вируса Западного Нила. К категориям повышенного риска заражения относятся рыбаки, охотники, лица, занятые сельскохозяйственной деятельностью, в том числе на дачных и приусадебных участках, а также те, кто проживает или посещает территории с высокой численностью комаров. Заражение людей в антропоургических очагах связано с популяциями комаров, обитающих в городской черте и массово выплаживающихся в подвалах жилых домов.

Возбудитель ЛЗН - вирус Западного Нила (вирус ЗН) является представителем семейства Flaviviridae, рода Flavivirus и принадлежит к антигенному комплексу Японского энцефалита. По принятой в Российской Федерации классификации патогенных биологических агентов вирус ЗН относится к микроорганизмам II группы патогенности.

Вирион состоит из сферического рибонуклеокапсида, окруженного липопротеидной мембраной. Размер вирусной частицы составляет около 50 нм в диаметре. Вирус содержит однонитевую позитивную несегментированную РНК размером 11 т.п.н., которая имеет одну открытую рамку считывания (open reading frame, ORF) - более 10000 оснований, кодирующую все структурные и неструктурные протеины. По 5/- и 3/-концам ORF ограничена короткими некодирующими участками (noncoding regions, NCR), формирующими специфические вторичные структуры, необходимые для репликации генома.

В состав вириона входят 3 структурных протеина (один небольшой основной капсидный белок C и два мембрано-ассоциированных протеина - мажорный оболочечный протеин E и протеин M, который у незрелых вирионов представлен prеM белком) и 7 неструктурных протеинов: NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B, NS5.

Вирус хорошо сохраняется в замороженном и высушенном состоянии. При кипячении инактивируется моментально, при температуре 60°С разрушается в течение 30 мин, при 37°С - через 20 часов, при 45°С - через 2 часа. Вирус чувствителен к ультрафиолетовому облучению, облучение вируса ртутно-кварцевой лампой (в водном растворе с толщиной слоя до 1 см) с интенсивностью лучевого потока 75 на расстоянии 25 см приводит через 15 минут к его полной инактивации. По отношению к дезинфицирующим веществам вирус ЗН обладает обычной для вирусов чувствительностью.

По современным представлениям вирус ЗН является самым широко распространенным флавивирусом. В России ареал вируса ЗН охватывает территории юга ее европейской части, регионы Сибири и Дальнего Востока. При условии потепления климата возможно расширение ареала вируса, в том числе и на центральные регионы России, о чем свидетельствует заболеваемость последних лет.

В настоящее время выделяют, по меньшей мере, 7 предполагаемых генетических линий (генотипов) вируса ЗН. На территории Российской Федерации циркулирует преимущественно вируса ЗН I генотипа. В Астраханской, Волгоградской и Ростовской областях обнаружен II генотип вируса ЗН. Штамм вируса ЗН IV генетической группы выявлен в Краснодарском крае.

Основными хозяевами вируса в природе являются птицы и, в меньшей степени, млекопитающие. Среди птиц основную роль в поддержании природных циклов циркуляции вируса ЗН играют представители водного (бакланы лысухи, чомги, фламинго), околоводного (цапли, кулики, чайки и крачки) и наземного (врановые и голуби) экологических комплексов. Индикаторными видами птиц для изучения циркуляции вируса в природных биотопах являются бакланы, а в антропогенных - врановые.

Среди млекопитающих в циркуляцию вируса могут включаться лошади, верблюды, грызуны, КРС и др. Выраженные клинические формы болезни с лихорадкой и возможным развитием менингоэнцефалита встречаются у лошадей.

Основным переносчиком вируса ЗН являются комары различных родов. Комары, способные к передаче вируса ЗН, включают более 60 видов из родов Aedes, Anopheles, Coquillettidia, Culex, Culiseta, Deinocerites, Ochlerotatus, Orthopodomyia, Psorophora, Uranotaenia.

Человеку вирус ЗН может передаваться во время укуса зараженными членистоногими (трансмиссивный путь передачи инфекции). Сам человек не представляет опасности для окружающих в связи с невысоким уровнем виремии, не достаточным для заражения комаров.

Наряду с основным - трансмиссивным механизмом передачи вируса ЗН, имеются данные о передачи вируса с материнским молоком, при трансплантации органов, с донорской кровью, а также при внутриутробном и лабораторном заражении.

4.2. Лабораторная диагностика лихорадки Западного Нила

Лабораторная диагностика ЛЗН включает:

- проведение диагностических исследований клинического материала от людей для установления диагноза у больных с подозрением на заболевание ЛЗН, умерших с подозрением на заболевание ЛЗН и от лихорадки неясного генеза на эндемичных по ЛЗН территориях;

- проведение лабораторных исследований полевого материала, собранного в природных биотопах ЛЗН (комары, иксодовые клещи, мелкие млекопитающие, птицы, сыворотка крови сельскохозяйственных животных) для изучения циркуляции вируса ЗН на данной территории.

Для лабораторной диагностики ЛЗН и выделения вируса ЗН используют молекулярно-генетический метод (ПЦР), иммуноферментный анализ (ИФА), вирусологический метод.

Для лабораторной диагностики заболевания у людей используют ПЦР и ИФА. Лабораторные исследования на территориальном уровне проводят лаборатории медицинских организаций, лаборатории ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в субъекте Российской Федерации", региональном уровне - Региональные центры по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности и Центры индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней (противочумные станции, НИИ Роспотребнадзора).

При необходимости изучения вируса ЗН, циркулирующего на данной территории, появлении заболеваний ЛЗН с атипичной клинической картиной заболевания проводят вирусологические исследования в учреждениях федерального уровня.

К учреждениям федерального уровня относятся Референс-центр по мониторингу за возбудителем ЛЗН, Национальный центр верификации диагностической деятельности и Национальный центр, осуществляющий функции государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций, риккетсиозов Роспотребнадзора.

Для проведения лабораторных исследований полевого материала используют аналогичный алгоритм.

5. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики лихорадки Западного Нила для лабораторий территориального уровня

5.1. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики лихорадки Западного Нила для лабораторий медицинских организаций

5.1.1. Требования к клиническим лабораториям медицинских организаций, осуществляющим учет, хранение, передачу, транспортирование и исследование биологического материала, подозрительного на наличие возбудителя лихорадки Западного Нила

Наличие разрешительных и регламентирующих работу документов

Лаборатории медицинских организаций должны соответствовать требованиям действующих нормативных документов.

Учет, хранение, передача и транспортирование биологического материала, подозрительного на наличие возбудителя лихорадки Западного Нила, должны осуществляться в соответствии с действующими санитарно-эпидемиологическими правилами по безопасности работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности) и действующими санитарными правилами о порядке учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности.

Утилизация отходов должна осуществляться в соответствии с действующими СанПиН по обращению с медицинскими отходами.

Проведение исследований на всех этапах: отбор проб, их хранение, транспортировка и передача, а также взаимодействие с учреждениями Роспотребнадзора должны соответствовать требованиям действующих нормативных и распорядительных документов.

Требования к обеспечению безопасности работы персонала

Каждая лаборатория медицинской организации должна иметь пакет рабочих экземпляров нормативно-методической документации и инструкций, определяющих режим безопасной работы сотрудников с учетом характера работ, особенностей технологии, свойств микроорганизмов. Инструкции должны быть согласованы с комиссией по контролю соблюдения требований биологической безопасности, специалистами по охране труда, противопожарным мероприятиям и утверждены руководителем учреждения. Результаты проверок знаний правил техники безопасности персонала при проведении работ фиксируются в специальном журнале.

Все сотрудники обязаны выполнять требования по обеспечению безопасности работы с материалом, подозрительным или зараженным возбудителями инфекционных болезней III-IV групп патогенности (опасности), в соответствии с действующими нормативными документами.

Требования к специалистам и персоналу, участвующим в выполнении исследований на ЛЗН

Исследования на ЛЗН могут выполнять специалисты не моложе 18 лет с высшим и средним профессиональным образованием, окончившие соответствующие курсы профессиональной переподготовки с освоением методов безопасной работы с возбудителями инфекционных болезней I-IV групп патогенности (опасности), не имеющие противопоказаний к лечению специфическими препаратами и имеющие допуск к работе с ПБА III-IV групп на основании приказа руководителя организации. Специалисты, проводящие исследования на ЛЗН, должны иметь необходимые профессиональные навыки (приложение 1 МУ).

Специалисты, осуществляющие деятельность, связанную с использованием возбудителей инфекционных болезней, должны повышать квалификацию не реже одного раза в пять лет.

Порядок организации внутреннего контроля лабораторных исследований

Контроль качества работы в лабораториях медицинских организаций реализуется через следующие контрольные процедуры:

- контроль качества отбора материала на исследование;

- контроль качества транспортировки материала;

- контроль качества оформления сопроводительной документации;

- контроль качества стерильности лабораторной посуды, дистиллированной воды;

- контроль работы паровых и суховоздушных стерилизаторов, автоклавов;

- контроль работы бактерицидных ламп;

- контроль температурного режима работы холодильников;

- контроль температурного режима работы термостатов;

- проверка санитарного состояния помещений, включая условия уборки, контроль качества дезинфекции, контроль смывов с поверхностей и оборудования.

Результаты контроля фиксируют в специальных журналах.

Правила ведения документации

Ведение лабораторной документации, включая регистрационные и рабочие журналы, осуществляют ежедневно в соответствии с требованиями действующих нормативных документов.

Требования к материальным ресурсам, необходимым для отбора проб

Для проведения диагностических исследований на ЛЗН в лабораториях медицинских организаций должны быть в наличии:

- диагностические препараты, тест-системы, зарегистрированные в установленном порядке (приложение 2 МУ);

- приборы, оборудование (приложение 3 МУ);

- расходные и дезинфицирующие материалы (приложение 4 МУ);

- комплект медицинский (укладка универсальная для забора материала от людей и из объектов окружающей среды для исследования на особо опасные инфекционные болезни);

- рабочая и защитная одежда, тип защитной одежды зависит от характера выполняемой работы.

5.1.2. Номенклатура и объем исследований

В медицинских организациях производят отбор, хранение и транспортировку проб биологического материала от больных ЛЗН, лиц с подозрением на нее, реконвалесцентов и секционного материала при летальном исходе.

В медицинских организациях проводят иммунологические исследования клинического материала от больных ЛЗН, лиц с подозрением на нее и реконвалесцентов с целью обнаружения в крови и СМЖ специфических антител (IgM и/или IgG, при обнаружении IgG - определение индекса авидности) и антигенов к ВЗН. При наличии соответствующих лабораторий и оборудования в медицинских организациях проводят молекулярно-генетические исследования (выявление РНК вируса ЗН).

5.1.3. Порядок работы при отборе материала для исследования на лихорадку Западного Нила в медицинских организациях

Требования к отбору и транспортировке проб клинического материала

Забор материала от больных ЛЗН, лиц с подозрением на нее, реконвалесцентов, а также секционного материала, осуществляет медицинский персонал с соблюдением требований режима биологической безопасности (во избежание внутрибольничного заражения) в соответствии с требованиями санитарных правил по безопасности работы с микроорганизмами I-II групп патогенности.

Забор секционного материала при вскрытии умерших от ЛЗН, а также с подозрением на данную инфекцию проводит патологоанатом или судмедэксперт в присутствии специалиста по особо опасным инфекциям.

По окончании манипуляций лабораторный инвентарь и расходные материалы немедленно после применения подлежат обязательному обеззараживанию.

Транспортировку материала осуществляют в соответствии с требованиями санитарных правил по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности.

Забор материала для иммунологической диагностики

Материалом для иммунологического исследования является сыворотка крови и спинномозговая жидкость больного или реконвалесцента.

Кровь для иммунологического исследования забирают дважды - при поступлении больного с подозрением на ЛЗН, а также на 10-14 день после первого забора крови.

Кровь у больного берут натощак из локтевой вены в количестве 5-10 мл, соблюдая правила асептики, шприцем или с использованием вакуумной системы типа "" с активатором сыворотки. Для предотвращения гемолиза, после образования сгустка сыворотку следует отобрать. Полученную сыворотку переносят в пластиковую пробирку с плотно закрывающейся (завинчивающейся) пробкой. Пробирку маркируют. Сгусток сохраняют в пробирке только при первом взятии крови. Он может быть использован для вирусологического исследования.

На каждую пробу заполняют направление (приложение 5, 6).

Забор материала для вирусологических исследований

Материалом для выделения вируса ЛЗН является: цельная кровь, плазма, сгусток крови, секционный материал (головной мозг, печень, селезенка, почки).

Материал от больных для вирусологических исследований забирают в ранние сроки от начала заболевания (до 5 дня), то есть в период вирусемии. При нормализации температуры тела возможность выделения вируса резко снижается, а при появлении в крови вирусспецифических иммуноглобулинов класса G (10-14 день от начала болезни) становится невозможной.

Забор секционного материала необходимо производить как можно быстрее после смерти больного (не позднее 20 часов, если труп находится при комнатной температуре). Отбор проб проводят из нескольких участков, подвергшихся изменениям, и из участка рядом расположенной ткани, которая выглядит неизмененной. При наличии распада ткани основное внимание обращают на пограничную зону. Забранный материал помещают в стерильные контейнеры (емкости) с плотно закрывающимися (завинчивающимися) крышками, контейнеры маркируют. На каждую пробу заполняют направление (приложение 7).

Для вирусологического исследования не допустимо внесение в пробы консерванта и проведение инактивации материала.

Забор материала для молекулярно-генетического исследования

Забор материала осуществляют в соответствии с требованиями действующих методических указаний по организации работы при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного микроорганизмами I-II групп патогенности.

Материалом для исследования служат образцы цельной крови, сыворотки и/или плазмы крови, лейкоцитарная фракция крови, СМЖ и пробы секционного материала. Для проведения ОТ-ПЦР забор плазмы крови и спинномозговой жидкости проводят в ранние сроки болезни (в период вирусемии), не позднее 12 дня от начала заболевания. При взятии крови для исследования методом ПЦР следует использовать специальную вакуумную систему типа "" с ЭДТА.

Хранение проб

Плазму и сыворотку крови хранят при температуре от 2°C до 8°C не более 2 сут., при температуре от минус 16°C до 20°C не более одного месяца, при температуре минус 70°C или в жидком азоте в течение 1 года, не допуская его оттаивания до проведения исследования.

Образцы тканей хранят при температуре минус 70°C или в жидком азоте в течение 1 года.

Транспортировка крови, сывороток и секционного материала в лабораторию

Доставку в лабораторию материала для исследования осуществляют в герметичных контейнерах. При доставке проб в биксах или в сумках-холодильниках, пробы должны иметь вторичную упаковку. Доставляемые емкости с жидкими материалами должны быть закрыты пробками, исключающими выливание содержимого во время транспортирования. Дно контейнеров, содержащих емкости с ПБА, должно быть покрыто адсорбирующим материалом (марлевая салфетка, ткань, вата и пр.), смоченным дезинфицирующим средством.

При замораживании клинического материала его транспортировка также должна проводиться в замороженном состоянии. Допускается только однократное замораживание-оттаивание образцов.

Цельная кровь замораживанию не подлежит. Необходимо отделить сыворотку крови от сгустка.

Материал для вирусологического исследования следует транспортировать в лабораторию в сосудах Дьюара с жидким азотом или в емкости с сухим льдом. Если время доставки материала для вирусологических исследований в лабораторию не превышает 4 ч, то возможно использование термоконтейнера с хладагентами.

Материал с направлением доставляют в лабораторию специально выделенным транспортом в сопровождении медицинского работника.

5.1.4. Оформление направления на исследование

На каждую отправляемую в лабораторию пробу от больного ЛЗН или с подозрением на эту инфекцию заполняют направление в соответствии с приложением 5, 6. На пробы секционного материала (от умершего от ЛЗН или с подозрением на эту инфекцию) заполняют направление в соответствии с приложением 7. При передаче материала для исследования в стороннюю организацию оформляют сопроводительный документ, в котором указывают адрес учреждения, в которое направляется проба (пробы); вид материала, взятого для исследования; количество образцов, цель исследования; наименование учреждения, должность, фамилия и инициалы лица, направляющего пробу (пробы), подпись.

5.1.5. Проведение иммунодиагностических исследований клинического материала на лихорадку Западного Нила в медицинских организациях

В лаборатории медицинской организации с целью лабораторного подтверждения диагноза ЛЗН проводят определение антител классов М и G к ВЗН в СМЖ и парных сыворотках крови. Возможно определение авидности IgG.

Для диагностики используют тест-системы, зарегистрированные в Российской Федерации. Выявление специфических антител класса M (IgM) и класса G (IgG) осуществляется с помощью иммуноферментных тест-систем в соответствии с прилагаемыми к ним инструкциями.

Клинический диагноз ЛЗН считают подтвержденным:

- при обнаружении в исследуемых образцах специфического фрагмента РНК вируса ЛЗН;

- при выявлении в ИФА IgM в одной сыворотке в титре, равном или выше диагностического (в зависимости от рекомендаций фирмы-производителя иммунодиагностической тест-системы, зарегистрированной в Российской Федерации);

- при 4-кратном увеличении титра IgG к ВЗН, при одновременном исследовании парных сывороток крови и при условии отрицательного результата на другие эндемичные флавивирусы.

При оценке результатов иммунологического исследования необходимо учитывать, что IgM в спинномозговой жидкости появляются на 1-3 сутки от начала клинических проявлений болезни, а в сыворотке крови - на 2-3 дня позже (при тяжелых формах течения болезни). При легком течении ЛЗН IgM в сыворотке крови определяют с 3-5 дня болезни. Имеются данные о длительной циркуляции IgM (12-16 месяцев).

Следует помнить, что в начальной фазе заболевания титры IgG могут быть низкие, или результат исследования на наличие антител класса G - негативный.

Если при анализе парных сывороток на антитела класса G образец, взятый в острую фазу заболевания, негативный, а образец, взятый в фазу реконвалесценции, позитивный, то имеет место сероконверсия, что свидетельствует о первичной инфекции.

Одной из важных особенностей вирусов семейства Flaviviridae является наличие выраженных антигенных связей между его представителями, в том числе между вирусами серокомплекса КЭ, а также других арбовирусных инфекций. Широкое распространение КЭ и увеличение ареала распространения ЛЗН делает проблему дифференциальной диагностики данных инфекций весьма актуальной.

На эндемичных территориях по ЛЗН при отсутствии циркуляции вируса КЭ или других флавивирусов достаточно проведения исследований на выявление антител лишь для ВЗН.

Однако, на эндемичных территориях по КЭ или другим флавивирусным инфекциям (при подозрении на ЛЗН), для подтверждения острой формы инфекций необходимо проведение сравнительных исследований на выявление антител класса IgM к другим флавивирусам, причем в парных сыворотках. Тестирование на IgG является косвенно подтверждающим диагноз исследованием, так как положительные результаты часто регистрируются при других флавивирусных инфекциях, являясь отражением перекрестных реакций.

Измерение авидности специфичных к ВЗН IgG позволяет определить период времени, прошедший после первичного инфицирования. Так, IgG, выявляемые в первые 3-5 месяцев после первичного инфицирования, имеют низкую авидность, в то время как в более поздние сроки IgG показывают высокую авидность.

При индексе авидности (ИА) менее 50%, сыворотка содержит низкоавидные антитела, что указывает на текущую, либо недавно перенесенную инфекцию (2-3 месяца назад). Если индекс авидности более 70%, то сыворотка содержит высокоавидные антитела, что указывает на перенесенную ранее инфекцию.

В то же время высокое значение ИА анализируемой пробы к антигенам ВЗН не позволяет установить время начала заболевания ЛЗН, тогда как аналогичная величина ИА к антигенам ВКЭ указывает на перенесенный ранее (более 80 дней) КЭ. Однако при клещевом энцефалите могут обнаруживаться IgG-антитела к ВЗН с высокой авидностью (до 100%).

Таким образом, наличие IgM свидетельствует об острой, либо недавно перенесенной инфекции, обусловленной ВЗН. Выявление антител класса IgG необходимо использовать в парных сыворотках в качестве подтверждающего теста и при проведении сероэпидемиологических исследований.

Результаты лабораторных анализов оформляют в соответствии с приложением 8 МУ.

5.1.6. Порядок взаимодействия медицинских организаций с учреждениями Роспотребнадзора

Информацию о выявленных случаях ЛЗН направляют в установленном порядке в соответствии с действующими нормативными документами.

Клинический материал (сыворотки крови, СМЖ) от больного с подозрением на ЛЗН для подтверждения диагноза направляют в ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации. При невозможности проведения исследований на базе ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии", материал, в соответствии с комплексными планами по эпиднадзору за ЛЗН на территории конкретного субъекта или по согласованию, направляют в Региональный центр по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности или Центр индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней.

Клинический материал (взятый в острый период и от больных тяжелой формой) для выделения вируса, а также секционный материал от трупа с подозрением на ЛЗН направляют в Референс-центр по мониторингу за лихорадкой Западного Нила. Такой же материал передают для подтверждения диагноза в ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации. При невозможности проведения исследований на базе ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" материал, в соответствии с комплексным планом по эпиднадзору за ЛЗН на территории конкретного субъекта или по согласованию, направляют в Региональный центр по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности или Центр индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней. Отправку секционного и клинического материала для выделения вируса обеспечивает ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии".

Передачу и транспортирование осуществляют в соответствии с санитарными правилами по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности.

5.2. Порядок работы при проведении лабораторной диагностики Лихорадки Западного Нила для филиалов ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в муниципальном образовании (городе, административном районе) в субъекте Российской Федерации

Специалисты филиалов ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в муниципальном образовании в субъекте Российской Федерации при осуществлении эпидемиологического надзора и по эпидпоказаниям проводят сбор полевого материала (комары, клещи, органы птиц и грызунов). При необходимости для забора крови лошадей и КРС привлекаются специалисты ветеринарной службы.

В лабораториях филиалов ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в муниципальном образовании в субъекте Российской Федерации диагностические исследования материала на наличие возбудителя ЛЗН не проводят.

5.2.1. Порядок работы при отборе материала для исследования на лихорадку Западного Нила в лабораториях филиалов ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в муниципальном образовании в субъекте Российской Федерации

5.2.1.1. Сбор и транспортировка полевого материала

Материалом для исследования на наличие возбудителя ЛЗН из окружающей среды являются:

- орнитофильные антропофильные комары, относящиеся к различным родам, в том числе Culex, Aedes и Anopheles;

- иксодовые клещи Hyalomma marginatum marginatum и другие, различных фаз метаморфоза (имаго, личинки, нимфы), снятые с прокормителей и собранные в открытых стациях; аргасовые и гамазовые клещи;

- птицы (дикие и врановые);

- мелкие млекопитающие;

- пробы крови крупного и мелкого рогатого скота.

Сбор материала и его транспортировку осуществляют с соблюдением требований безопасности работы с материалом, подозрительным на зараженность возбудителями I-II групп патогенности.

Отбор, упаковка и транспортировка проб для исследования

Сбор комаров и клещей, птиц и мелких диких млекопитающих проводят в соответствии с действующими нормативными документами по сбору, учету, подготовке к лабораторному исследованию кровососущих членистоногих-переносчиков возбудителей природно-очаговых инфекций и методическими указаниями по мероприятиям по борьбе с лихорадкой Западного Нила на территории Российской Федерации.

Хранение и транспортировку пробирок с кровью осуществляют с применением термоконтейнеров. Допускается хранение пробирок с кровью при температуре окружающей среды не более 2-3 часов.

5.2.2. Оформление направления на исследование

На пробы полевого материала заполняют направление (приложение 10) в двух экземплярах, один - вкладывают в контейнер с пробами, второй - доставляет нарочный. Направляемые пробы сопровождают письмом на имя руководителя учреждения, в котором указывают вид направляемого материала и цель его исследования, количество объектов; письмо подписывает руководитель направившего учреждения. К сопроводительным документам прилагают опись с указанием места отбора каждой пробы.

5.2.3. Порядок взаимодействия филиалов ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в муниципальном образовании в субъекте Российской Федерации с другими учреждениями Роспотребнадзора

Материал из объектов окружающей среды направляют в соответствии с требованиями действующей нормативной документации в ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации. При невозможности проведения исследований на базе ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии", материал, в соответствии с комплексными планами по эпиднадзору за ЛЗН на территории конкретного субъекта или по согласованию, направляют в Региональный центр по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности или Центр индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней.

Передачу и транспортирование осуществляют в соответствии с действующими санитарными правилами по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности (опасности).

5.3. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики лихорадки Западного Нила для лабораторий ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации

Исследования материала на наличие возбудителя ЛЗН в ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации проводят на базе вирусологической лаборатории, лаборатории ПЦР-исследований, лаборатории особо опасных инфекций.

5.3.1. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики лихорадки Западного Нила в лабораториях ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации

5.3.1.1. Требования к лабораториям ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации, осуществляющим исследования на лихорадку Западного Нила

Наличие разрешительных и регламентирующих работу документов

Лаборатории ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации должны быть аккредитованы на техническую компетентность в установленном порядке в соответствии с действующей законодательной базой Российской Федерации.

Лаборатории ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации должны соответствовать требованиям действующих нормативных документов.

Учет, хранение, передача и транспортирование материала, зараженного или подозрительного на заражение ВЗН, утилизация отходов должны осуществляться в соответствии с действующими нормативными документами (п. 5.1.1.)

Проведение исследований на всех этапах: отбор проб, их хранение, доставка в лабораторию, регистрация, порядок исследования, выдача результатов, а также взаимодействие с учреждениями Роспотребнадзора должны соответствовать требованиям действующих нормативных документов.

Требования к специалистам и персоналу, участвующим в выполнении исследований на ЛЗН

Исследования на ЛЗН могут выполнять специалисты не моложе 18 лет с высшим и средним профессиональным образованием, окончившие соответствующие курсы профессиональной переподготовки по специальности "Вирусология" и/или "Бактериология" с основами безопасной работы с патогенными биологическими агентами (ПБА) I-II групп, не имеющие противопоказаний к лечению специфическими препаратами и имеющие допуск к работе с ПБА II-IV групп на основании приказа руководителя учреждения. Специалисты, проводящие исследования на ЛЗН, должны иметь необходимые профессиональные навыки (приложение 1).

Специалисты, осуществляющие деятельность, связанную с использованием возбудителей инфекционных болезней, должны повышать квалификацию не реже одного раза в пять лет.

Требования к обеспечению безопасности работы персонала

Каждая лаборатория должна иметь пакет документов, определяющих режим безопасной работы сотрудников с учетом характера работ, особенностей технологии, свойств микроорганизмов. Документы должны быть согласованы с комиссией по контролю соблюдения требований биологической безопасности, специалистами по охране труда, противопожарным мероприятиям и утверждены руководителем учреждения. Результаты проверок знаний правил техники безопасности персонала при проведении работ фиксируются в специальном журнале.

Все сотрудники должны выполнять требования по обеспечению безопасности работы с материалом, подозрительным и зараженным возбудителями инфекционных болезней II-IV групп патогенности (опасности), в соответствии с действующими нормативными документами.

Порядок организации внутреннего контроля лабораторных исследований

Контроль качества диагностических исследований на ЛЗН в специализированных лабораториях ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" включает:

- проведение контроля качества диагностических препаратов и тест-систем, дезинфицирующих средств, химических реактивов;

- контроль эффективности мембранных фильтров;

- проведение своевременной поверки средств измерений, аттестации испытательного оборудования;

- контроль качества стерильности фильтровальных установок, лабораторной посуды, дистиллированной воды;

- контроль работы паровых и суховоздушных стерилизаторов, автоклавов;

- контроль температурного режима холодильников;

- контроль температурного режима термостатов;

- контроль работы бактерицидных ламп;

- проверка состояния воздуха производственных помещений и боксов, температурного режима, влажности, давления;

- проверка санитарного состояния помещений, включая условия уборки, контроль качества дезинфекции, контроль смывов с поверхностей и оборудования.

Результаты контроля фиксируют в специальных журналах.

Правила ведения документации

Ведение лабораторной документации, включая регистрационные и рабочие журналы, осуществляют в соответствии с требованиями действующих нормативно-методических документов.

Требования к материальным ресурсам, необходимым для выполнения диагностических исследований на ЛЗН

Для проведения диагностических исследований на ЛЗН в лабораториях должны быть в наличии:

- диагностические препараты, тест-системы, зарегистрированные в установленном порядке (приложение 2);

- приборы, оборудование (приложение 3);

- расходные и дезинфицирующие материалы (приложение 4);

- комплект медицинский (укладка универсальная для забора материала от людей и из объектов окружающей среды для исследования на особо опасные инфекционные болезни);

- рабочая и защитная одежда, тип защитной одежды зависит от характера выполняемой работы.

5.3.1.2. Номенклатура и объем исследований

ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации проводит:

- сбор полевого материала (комары, иксодовые Hyalomma marginatum marginatum и другие, различных фаз метаморфоза (имаго, личинки, нимфы), снятые с прокормителей и собранные в открытых стациях; аргасовые и гамазовые клещи, органы птиц и мелких млекопитающих), а также забор крови лошадей, крупного и мелкого рогатого скота, с привлечением специалистов ветеринарной службы (по эпидпоказаниям);

- исследование проб полевого материала;

- исследование материала от больных и умерших с подозрением на ЛЗН (кровь; сыворотка крови и/или плазма; спинномозговая жидкость; секционный материал: печень, легкие, селезенка, почки, мозг (головной и спинной), сгустки крови);

- исследование сывороток крови от здорового населения и сельскохозяйственных животных для определения уровня иммунной прослойки (по эпидпоказаниям).

Диагностические исследования материала осуществляют в следующем объеме:

- полевой материал исследуют на наличие антигена и специфической РНК ВЗН;

- клинический материала от больных (умерших) с подозрением на ЛЗН исследуют на наличие специфических антител класса М (IgМ) и класса G (IgG), а также суммарных специфических антител, антигена и специфической РНК ВЗН;

- материал от здоровых людей (доноров, выборочных групп населения), проживающих на территории природных очагов, а также сельскохозяйственных животных для изучения иммунной прослойки исследуют на наличие специфических антител класса G (IgG).

Исследования проводят согласно действующим методическим указаниям по лабораторной диагностике ЛЗН.

5.3.1.3. Порядок диагностических исследований на лихорадку Западного Нила в лабораториях ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации

Забор клинического материала от больных и умерших с подозрением на ЛЗН осуществляют в соответствии с п. 5.1.3 МУ.

Сбор материала из окружающей среды осуществляют в соответствии с п. 5.2.3 МУ.

Порядок исследования материала включает:

I этап

- прием, сортировку и регистрацию проб;

- первичную обработку проб и подготовку их к исследованию;

- постановку ПЦР, ИФА, МФА, РАО.

прием, сортировка и регистрация проб

Первичная обработка проб и подготовка их к исследованию

Подготовку образцов проводят в соответствии с инструкциями, прилагаемыми к тест-системам для постановки МФА, ИФА, РАО, ОТ-ПЦР.

Подготовку суспензий членистоногих и органов животных проводят общепринятым методом с использованием раствора для разведения образцов, заложенного в диагностические тест-системы или 0,9% раствора хлористого натрия. При заборе органов и приготовлении суспензий в полевых и лабораторных условиях необходимо принять меры для исключения перекрестной контаминации: для получения и обработки проб от каждого животного используют отдельный комплект инструментов и одноразовую посуду.

В случае необходимости длительного хранения пробы замораживают и хранят при температуре от минус 20 до минус 70°C.

Постановка ИФА, ОТ-ПЦР, МФА, РАО

Проведение ИФА, ОТ-ПЦР, МФА, РАО осуществляют согласно инструкциям, прилагаемым к тест-системам.

II этап

2-4 ч от начала исследования - учет результатов РАО, МФА;

5-6 ч от начала исследования - учет результатов ИФА;

8-12 ч от начала исследования - учет результатов ПЦР;

- выдача ответа специфической индикации на основании результатов реакций.

5.3.1.4. Регистрация и оформление результатов исследования

Регистрацию результатов исследований в лаборатории ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" производят по учетным формам в соответствии с действующими нормативно-методическими документами.

5.3.1.5. Порядок взаимодействия лабораторий ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации с учреждениями Роспотребнадзора

Информацию о выявленных положительных пробах передают в соответствии с действующей нормативной документацией и направляют в Референс-центр по мониторингу за лихорадкой Западного Нила, Региональный центр по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности или Центр индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней.

Положительные сыворотки крови направляют в Референс-центр по мониторингу за лихорадкой Западного Нила и по согласованию в Региональный центр по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности или Центр индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней.

Положительные пробы объектов окружающей среды направляют по согласованию в Референс-центр по мониторингу за лихорадкой Западного Нила и в Региональный центр по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности или Центр индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней.

Передачу и транспортирование осуществляют в соответствии с действующими СП по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности. Прилагаются сопроводительное письмо, акт упаковки и акт передачи.

6. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики лихорадки Западного Нила в лабораториях регионального уровня

6.1. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики лихорадки Западного Нила в лабораториях Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней II-IV групп патогенности, курирующих субъекты Российской Федерации

Порядок организации и проведения лабораторной диагностики ЛЗН в лабораториях Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней II-IV групп патогенности, курирующих субъекты Российской Федерации, соответствует п. 5.3.1. "Порядок организации и проведения лабораторной диагностики лихорадки Западного Нила в лабораториях ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации".

6.2. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики лихорадки Западного Нила в лабораториях Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней

6.2.1. Требования к лабораториям Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней

Наличие разрешительных и регламентирующих работу документов

Лаборатории Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней должны быть аккредитованы на техническую компетентность в установленном порядке в соответствии с действующей законодательной базой Российской Федерации.

Лаборатории Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней должны соответствовать требованиям действующих нормативных документов.

Учет, хранение, передача и транспортирование положительных проб на ЛЗН должны осуществляться в соответствии с СП по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности. Транспортировка материала проводится в условиях "холодовой цепи".

Утилизация отходов должна осуществляться в соответствии с действующими СанПиН по обращению с медицинскими отходами.

Проведение исследований на всех этапах: отбор проб, их хранение, доставка в лабораторию, регистрация, порядок исследования, выдача результатов, взаимодействие с учреждениями Роспотребнадзора должны соответствовать требованиям действующих нормативных и распорядительных документов.

Требования к специалистам и персоналу, участвующим в выполнении исследований на ЛЗН

Исследования на ЛЗН могут выполнять специалисты не моложе 18 лет с высшим и средним профессиональным образованием, окончившие соответствующие курсы профессиональной переподготовки по специальности "Вирусология" и/или "Бактериология" с основами безопасной работы с патогенными биологическими агентами (ПБА) I-II групп, не имеющие противопоказаний к лечению специфическими препаратами и имеющие допуск к работе с ПБА I-II групп на основании приказа руководителя учреждения.

Специалисты, осуществляющие деятельность, связанную с использованием возбудителей инфекционных заболеваний, должны повышать квалификацию не реже одного раза в пять лет и иметь сертификат специалиста.

Необходимый уровень подготовки специалистов с высшим медицинским (биологическим) образованием и средним медицинским образованием, представлен в приложении 1 МУ.

Требования к обеспечению безопасности работы персонала

Каждая лаборатория должна иметь пакет документов, определяющих режим безопасной работы сотрудников с учетом характера работ, особенностей технологии, свойств микроорганизмов. Документы должны быть согласованы с комиссией по контролю соблюдения требований биологической безопасности, специалистами по охране труда, противопожарным мероприятиям и утверждены руководителем учреждения. Результаты проверок знаний правил техники безопасности персонала при проведении работ фиксируются в специальном журнале.

Все сотрудники должны выполнять требования по обеспечению безопасности работы с материалом, подозрительным или зараженным возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности в соответствии с действующими нормативными документами.

Порядок организации внутреннего контроля качества лабораторных исследований, правила ведения документации соответствуют п. 5.3.1.1.

Требования к материальным ресурсам, необходимым для выполнения диагностических исследований на ЛЗН

Для проведения диагностических исследований на ЛЗН в лабораториях должны быть в наличии:

диагностические препараты, тест-системы, зарегистрированные в установленном порядке, экспериментальные серии, перевиваемые клеточные культуры, питательные среды и растворы для культур клеток (для Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней) (приложение 2 МУ);

- приборы, оборудование (приложение 3 МУ);

- расходные и дезинфицирующие материалы (приложение 4 МУ);

- комплект медицинский (укладка универсальная для забора материала от людей и из объектов окружающей среды для исследования на особо опасные инфекционные болезни);

- рабочая и защитная одежда, тип защитной одежды зависит от характера выполняемой работы.

6.2.2. Номенклатура и объем исследований

Номенклатура и объем исследований соответствует п. 5.3.1.2. МУ, дополнительно проводят исследования проб, поступивших из лабораторий ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации для подтверждения

6.2.3. Порядок проведения диагностических исследований на лихорадку Западного Нила в лабораториях Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней

Порядок исследования клинического материала и проб объектов окружающей среды, соответствует п. 5.3.1 МУ.

6.2.4. Регистрация и оформление результатов исследования

Регистрацию результатов исследований в лаборатории Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней проводят в учетных формах рабочей документации. Результаты исследования выдают на соответствующем бланке учреждения.

6.2.5. Порядок взаимодействия лабораторий Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней с учреждениями Роспотребнадзора

Информацию о выявленных положительных пробах на ЛЗН передают в соответствии с действующей нормативной документацией и направляют также в Референс-центр по мониторингу за возбудителем ЛЗН.

Положительные пробы от людей и из объектов окружающей среды передают в Референс-центр по мониторингу за лихорадкой Западного Нила по согласованию.

РНК вируса ЛЗН, пробы материала с высоким содержанием вируса передают в Референс-центр по мониторингу за лихорадкой Западного Нила.

Заключение о результатах исследования материала, присланного на подтверждение, направляют в учреждение, из которого материал получен.

Передачу и транспортирование осуществляют в соответствии с действующими СП по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности. Транспортировка материала проводится в условиях "холодовой цепи" в термоконтейнерах с хладоэлементами.

7. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики лихорадки Западного Нила в лабораториях федерального уровня

7.1. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики лихорадки Западного Нила в Референс-центре по мониторингу за лихорадкой Западного Нила

7.1.1. Требования к лабораториям Референс-центра по мониторингу за лихорадкой Западного Нила

Наличие разрешительных и регламентирующих работу документов, требования к специалистам и персоналу, участвующим в выполнении исследований на ЛЗН, требования к обеспечению безопасности работы персонала, порядок организации внутреннего контроля лабораторных исследований, правила ведения документации аналогичны п. 6.2.1 МУ.

Требования к материальным ресурсам, необходимым для выполнения диагностических исследований на ЛЗН

Для проведения диагностических исследований на ЛЗН в лабораториях должны быть в наличии:

- диагностические препараты, тест-системы, зарегистрированные в установленном порядке, экспериментальные серии, перевиваемые клеточные культуры, питательные среды и растворы для культур клеток (приложение 2, 11 МУ);

- приборы, оборудование (приложение 3);

- расходные материалы (приложение 4);

- комплект медицинский (укладка универсальная для забора материала от людей и из объектов окружающей среды для исследования на особо опасные инфекционные болезни);

- рабочая и защитная одежда, тип защитной одежды зависит от характера выполняемой работы.

7.1.2. Номенклатура и объем исследований

Лаборатории Референс-центра по мониторингу за лихорадкой Западного Нила проводят:

- исследования материала от больных с тяжелым и атипичным течением инфекции, в том числе при расследовании вспышек, а также умерших с подозрением на ЛЗН;

- подтверждение положительных проб полевого материала, поступивших из лабораторий ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъектах Российской Федерации, а также лабораторий Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности по эпидемическим показаниям;

- вирусологические исследования;

- генетическое типирование, секвенирование и анализ геномов штаммов возбудителя ЛЗН;

7.1.3. Организация и обеспечение диагностической деятельности Референс-центра по мониторингу за возбудителем лихорадки Западного Нила

Материалом для исследования служат клинический и полевой материал, а также РНК возбудителя ЛЗН.

Лабораторная диагностика ЛЗН основана на детекции вируса или его структурных компонентов, исследовании динамики титра антител и проводится с использованием всего комплекса методов, включающих современные высокотехнологичные методы вирусологического, иммунологического и молекулярно-генетического анализов с использованием как зарегистрированных, так и экспериментально-лабораторных серий диагностических препаратов.

Порядок исследования клинического и полевого материала на ЛЗН соответствует п. 5.3.2.3 МУ.

ГАРАНТ:

По-видимому, в тексте предыдущего абзаца допущена опечатка. Имеется в виду "п. 5.3.1.3 МУ"

Исследования осуществляют по схеме:

- выявление антигена вируса;

- выявление специфических антител класса М (IgM) и класса G (IgG) и определение авидности антител;

- выявление РНК возбудителя;

- секвенирование фрагментов генов ВЗН;

- филогенетический анализ результатов секвенирования;

- вирусологические исследования с целью изоляции и накопления вируса

- идентификация вируса, включающая дополнительно проведение реакции нейтрализации, реакции торможения гемагглютинации и ОТ-ПЦРс праймерами на другой фрагмент генома вируса.

7.1.4. Порядок взаимодействия лабораторий Референс-центра по мониторингу за лихорадкой Западного Нила с учреждениями Роспотребнадзора

Информацию о выявленных и подтвержденных положительных пробах на ЛЗН передают в соответствии с действующими нормативными документами и направляют в Национальный центр верификации диагностической деятельности вирусных инфекций, риккетсиозов Роспотребнадзора.

Заключение о результатах исследования материала, присланного на подтверждение, направляют в учреждение, из которого материал получен.

РНК вируса ЛЗН, пробы материала с высоким содержанием вируса, а также штаммы вируса, полученные при вирусологических исследованиях, передают по согласованию в Национальный центр верификации диагностической деятельности вирусных инфекций, риккетсиозов Роспотребнадзора в соответствии с утвержденным порядком взаимодействия.

Передачу и транспортирование осуществляют в соответствии с действующими СП по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности. Транспортировка материала проводится в условиях "холодовой цепи".

7.2. Порядок и организация лабораторной диагностики лихорадки Западного Нила в Национальном центре верификации диагностической деятельности вирусных инфекций, риккетсиозов Роспотребнадзора

7.2.1. Требования к лабораториям Национального центра верификации диагностической деятельности особо опасных вирусных инфекций, риккетсиозов Роспотребнадзора

Лаборатории Национального центра верификации диагностической деятельности вирусных инфекций, риккетсиозов Роспотребнадзора должны быть аккредитованы на техническую компетентность в установленном порядке в соответствии с действующей законодательной базой Российской Федерации.

Наличие регламентирующих работу документов, требования к специалистам и персоналу, участвующим в выполнении исследований на ЛЗН, требования к обеспечению безопасности работы персонала, порядок организации внутреннего контроля лабораторных исследований, правила ведения документации и требования к материальным ресурсам, необходимым для выполнения диагностических исследований на ЛЗН, аналогичны п. 7.1.1 МУ.

7.2.2. Номенклатура и объем исследований

Лаборатории Национального Центра верификации диагностической деятельности вирусных инфекций, риккетсиозов Роспотребнадзора проводят:

- изоляцию штаммов вируса ЛЗН из проб материала, полученных из Референс-центра по мониторингу за возбудителем ЛЗН;

- верификацию результатов лабораторной диагностики ЛЗН, проведенной в учреждениях территориального, регионального и федерального уровней;

- диагностические исследования материала от больных ЛЗН и умерших от этой болезни - по эпидпоказаниям;

- осуществляют хранение коллекционных штаммов вируса ЛЗН, охраноспособное и авторское депонирование.

7.2.3. Организация и обеспечение диагностической деятельности

Порядок исследования клинического и полевого материала на ЛЗН соответствует п. 7.1.3 МУ.

Дополнительно проводят:

- выделение ВЗН и его идентификацию;

- определение генотипов штаммов вируса ЛЗН.

На основании результатов расширенной характеристики штаммов вируса ЛЗН составляют паспорта на штаммы, хранящиеся в Национальном Центре верификации диагностической деятельности, осуществляющем функции Государственной коллекции.

7.2.4. Порядок взаимодействия лабораторий Национального Центра верификации диагностической деятельности вирусных инфекций, риккетсиозов Роспотребнадзора с учреждениями Роспотребнадзора

Национальный Центр верификации диагностической деятельности вирусных инфекций, риккетсиозов Роспотребнадзора направляет результаты проведенных исследований в Региональные центры по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности, Центры индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней, Референс-центр по мониторингу за лихорадкой Западного Нила

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко