Методические указания МУК 4.2.3007-12 "Порядок организации и проведения лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней" (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом РФ 28 марта 2012 г.)

4.2. Методы контроля: биологические и микробиологические факторы

Методические указания МУК 4.2.3007-12
"Порядок организации и проведения лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней"
(утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом РФ 28 марта 2012 г.)

Дата введения: 28 марта 2012 г.
Введены впервые

1. Область применения

1. Настоящие методические указания (далее - МУ) определяют порядок организации и проведения лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней, формы и методы их взаимодействия, номенклатуру и объем исследования, требования к лабораториям, специалистам и персоналу, участвующим в выполнении исследований, материально-техническому обеспечению исследований, к биологической безопасности проведения работ.

2. Настоящие методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор в Российской Федерации, специалистов противочумных учреждений, органов исполнительной власти субъектов Российской Федерации в области охраны здоровья граждан и медицинских организаций.

2. Перечень сокращений

Аг - антиген;

Ат - антитело;

Вирус ККГЛ - вирус Крымской-Конго геморрагической лихорадки;

ИФА - иммуноферментный анализ;

КГЛ - Крымская геморрагическая лихорадка;

КРС - крупный рогатый скот;

МО - медицинские организации;

МРС - мелкий рогатый скот;

МУ - методические указания;

МУК - методические указания по контролю;

ООИ - особо опасные инфекции;

ОТ-ПЦР - полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией;

ПЦР - полимеразная цепная реакция;

ПЧС - противочумная станция;

РНК - рибонуклеиновая кислота;

СанПиН - Санитарные правила и нормы;

СП - Санитарные правила;

ЦПЭ - цитопатический эффект;

IgG - иммуноглобулины класса G;

IgM - иммуноглобулины класса М.

3. Общие положения

3.1. Характеристика болезни и возбудителя Крымской геморрагической лихорадки

Крымская геморрагическая лихорадка (КГЛ) (Crimean haemorrhagic fever) - арбовирусная трансмиссивная природно-очаговая инфекционная болезнь, вызываемая вирусом Крымской-Конго геморрагической лихорадки (вирусом ККГЛ) семейства Bunyaviridae рода Nairovirus. Вирус ККГЛ обладает вазотропностью, поражает эндотелий капилляров, вследствие чего наступает нарушение водного и белкового обмена и возникают воспалительно-токсические процессы в паренхиматозных органах. По степени тяжести выделяют: тяжелые, среднетяжелые, легкие и инаппарантные (субклинические) формы болезни. Тяжелые и среднетяжелые формы могут протекать с геморрагическим синдромом и без геморрагического синдрома.

В соответствии с "Международной статистической классификацией болезней и проблем, связанных со здоровьем" (Десятый пересмотр. - Женева, 2003. МКБ-10) код болезни - А98.0 Крымская геморрагическая лихорадка. По принятой в Российской Федерации классификации патогенных биологических агентов вирус ККГЛ относится к микроорганизмам II группы патогенности.

Основным резервуаром и переносчиком вируса ККГЛ являются иксодовые клещи рода Hyalomma. В природных очагах КГЛ вирус изолирован из клещей Hyalomma marginatum marginatum, H. anatolicum, Dermacentor marginatus, Rhipicephalus rossicus, R. bursa, Boophilus annulatus, Ixodes ricunus и др.

Основными прокормителями имаго клещей в хозяйственных условиях являются крупный (КРС) и мелкий рогатый скот (МРС), а также зайцы, ежи, а преимагинальных фаз клещей - птицы семейства врановых (грачи, вороны, сороки) и куриных (куропатки, индейки).

Основным механизмом передачи вируса ККГЛ является трансмиссивный с реализацией инокуляционного (при укусе зараженными клещами) или контаминационного путей передачи. В отдельных случаях заражение человека может происходить при контактном механизме передачи возбудителя КГЛ. При контакте с кровью и биологическими выделениями, содержащими кровь (мокрота, испражнения) больного заражаются члены семьи, медицинские работники, больные и др. Гемоконтактный путь передачи инфекции также может реализовываться при убое и разделке крупного и мелкого рогатого скота, снятии шкурок и разделке туш зайцев и т.п. Возможен аспирационный механизм заражения с воздушно-капельным и воздушно-пылевым путями передачи возбудителя при авариях в условиях лабораторий и при оказании помощи больным КГЛ с поражением легких.

Вирус ККГЛ имеет сферическую форму (диаметр вириона 80-120 нм) и внешнюю липопротеидную оболочку. РНК вируса сегментирована и состоит из малого (S), среднего (M) и большого сегментов (L), кодирующих нуклеокапсидный белок (N), оболочечные гликопротеины (G1 и G2) и белки полимеразного комплекса соответственно.

Малый и большой сегменты РНК высоко консервативны, и их нуклеотидные последовательности используются как для разработки тест-систем, выявляющих РНК вируса ККГЛ в пробах различного происхождения, так и для филогенетического анализа. Средний сегмент РНК вариабелен, даже в одной генетической группе наблюдаются значительные различия в нуклеотидной последовательности у различных штаммов вируса ККГЛ.

Вирус малоустойчив в окружающей среде. При кипячении инактивируется моментально, при температуре 60°С разрушается в течение 30 мин, при 37°С - через 20 часов, при 45°С - через 2 часа. Лиофилизированная культура сохраняется до двух лет. Вирус чувствителен к ультрафиолетовому облучению. По отношению к дезинфицирующим веществам вирус ККГЛ обладает обычной для вирусов чувствительностью.

3.2. Лабораторная диагностика КГЛ

Лабораторная диагностика КГЛ включает:

- проведение диагностических исследований клинического материала от людей с подозрением на заболевание КГЛ, умерших с подозрением на заболевание КГЛ и от лихорадки неясного генеза на эндемичных по КГЛ территориях;

- проведение лабораторных исследований полевого материала, собранного в природных биотопах КГЛ (клещи, мышевидные грызуны, птицы семейства врановых, сыворотка крови сельскохозяйственных животных) для изучения циркуляции вируса ККГЛ на данной территории.

Для лабораторной диагностики КГЛ и выделения вируса ККГЛ используют молекулярно-генетический метод (ПЦР), иммуноферментный анализ (ИФА), вирусологический метод.

Для лабораторной диагностики заболевания у людей используют ПЦР и ИФА. Лабораторные исследования проводят на территориальном уровне (лаборатории ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в субъекте Российской Федерации"), региональном уровне (Региональные центры по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности (противочумные станции, НИИ Роспотребнадзора) и Центры индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней (НИИ Роспотребнадзора).

При необходимости изучения вируса ККГЛ, циркулирующего на данной территории и появлении заболеваний КГЛ с атипичной клинической картиной проводят вирусологические исследования в учреждениях федерального уровня.

К учреждениям федерального уровня относятся Референс-центр по мониторингу за возбудителем КГЛ, Национальный центр верификации диагностической деятельности и Национальный центр, осуществляющий функции государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций, риккетсиозов, Роспотребнадзора.

Для проведения лабораторных исследований полевого материала используют аналогичный алгоритм.

4. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки для лабораторий территориального уровня

4.1 Действия специалистов медицинских организаций при подозрении на выявление больного Крымской геморрагической лихорадкой

4.1.1. Требования к лабораториям медицинских организаций, осуществляющим учет, хранение, передачу, транспортирование биологического материала, подозрительного на наличие возбудителя Крымской геморрагической лихорадки

Наличие разрешительных и регламентирующих работу документов

Лаборатории МО должны соответствовать требованиям действующих нормативных документов.

Учет, хранение, передача и транспортирование биологического материала, подозрительного на наличие возбудителя Крымской геморрагической лихорадки, должны осуществляться в соответствии с действующими санитарно-эпидемиологическими правилами по безопасности работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности).

Утилизация отходов должна осуществляться в соответствии с действующими санитарными правилами по обращению с медицинскими отходами.

Проведение работ на всех этапах: отбор проб, их хранение, транспортировка и передача, взаимодействие с учреждениями Роспотребнадзора должны соответствовать требованиям действующих нормативных и распорядительных документов.

Требования к обеспечению безопасности работы персонала

Каждая лаборатория медицинской организации должна иметь пакет рабочих экземпляров нормативно-методической документации и инструкций, определяющих режим безопасной работы сотрудников с учетом характера работ, особенностей технологии, свойств микроорганизмов. Инструкции должны быть согласованы с комиссией по контролю соблюдения требований биологической безопасности, специалистами по охране труда, противопожарным мероприятиям и утверждены руководителем учреждения. Результаты проверок знаний правил техники безопасности персонала при проведении работ фиксируются в специальном журнале.

Все сотрудники обязаны выполнять требования по обеспечению безопасности работы с материалом, подозрительным или зараженным возбудителями инфекционных болезней III-IV групп патогенности (опасности), в соответствии с действующими нормативными документами.

Порядок организации внутреннего контроля качества работы лабораторий

Контроль качества работы в лабораториях медицинских организаций реализуется через следующие контрольные процедуры:

- контроль качества отбора материала на исследование;

- контроль качества транспортировки материала;

- контроль качества оформления сопроводительной документации;

- контроль качества стерильности лабораторной посуды, дистиллированной воды;

- контроль стерилизации паровых и суховоздушных стерилизаторов;

- контроль работы бактерицидных ламп;

- контроль температурного режима работы холодильников;

- контроль температурного режима работы термостатов;

- проверка санитарного состояния помещений, включая условия уборки, контроль качества дезинфекции, контроль смывов с поверхностей и оборудования.

Результаты контроля фиксируют в специальных журналах.

Правила ведения документации

Ведение лабораторной документации, включая регистрационные и рабочие журналы, осуществляют ежедневно в соответствии с требованиями действующих методических документов.

Требования к материальным ресурсам, необходимым для отбора проб

Для отбора материала на Крымскую геморрагическую лихорадку в лабораториях МО должен быть в наличии комплект медицинский (укладка универсальная для забора материала от людей для исследования на особо опасные инфекционные болезни).

Для проведения работ персонал лабораторий должен быть обеспечен спецодеждой и средствами индивидуальной защиты.

4.1.2. Номенклатура и объем исследований

В МО производят отбор клинического материала от лиц с подозрением на КГЛ и секционного материала при летальном исходе.

В МО не проводят диагностические исследования материала от больных с подозрением на КГЛ.

4.1.3. Порядок работы при отборе материала для исследования на Крымскую геморрагическую лихорадку в медицинских организациях

Отбор проб материала от людей (трупов) с подозрением на КГЛ осуществляет медицинский персонал с соблюдением требований противоэпидемического режима (во избежание внутрибольничного заражения) в соответствии с требованиями действующих санитарных правил по безопасности работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности). При заборе крови необходимо использование защитного костюма I типа.

В случае летального исхода при наличии анамнеза, клинических данных и результатов лабораторных исследований, подтверждающих КГЛ, труп с учетом высокого риска заражения персонала вскрытию не подлежит.

При наличии анамнестических и клинических признаков КГЛ без подтверждения диагноза лабораторными исследованиями труп подлежит патологоанатомическому вскрытию с применением средств индивидуальной защиты (противочумный костюм I типа, дополненный фартуком, второй парой резиновых перчаток и нарукавниками) и соблюдением мер личной безопасности в соответствии с требованиями действующих методических указаний по организации и проведению первичных мероприятий в случаях выявления больного (трупа), подозрительного на заболевание карантинными инфекциями, контагиозными вирусными геморрагическими лихорадками, малярией и инфекционными болезнями неясной этиологии, имеющими международное значение. Забор секционного материала при вскрытии умерших от КГЛ, а также лиц с подозрением на данную инфекцию (умерших от лихорадки неясного генеза в эндемичных по КГЛ территориях) проводит патологоанатом или судмедэксперт в присутствии врача-эпидемиолога с соблюдением требований биологической безопасности. Секционный материал отбирают для исследования методом ПЦР, в случае необходимости - для вирусологического исследования.

Материалом для исследования на наличие вируса ККГЛ является: цельная кровь, образцы сыворотки и плазмы крови, сгусток крови, секционный материал (печень, легкие, селезенка, почки, головной мозг).

Для ПЦР исследований материал от больных (кровь) забирают в ранние сроки от начала заболевания (до 7 дня), в период вирусемии. Для серологического исследования кровь отбирают дважды - на 5-7 день и на 10-14 день от начала заболевания, в случае необходимости забор крови может быть осуществлен и в более поздние сроки.

Отбор и упаковку проб клинического материала для лабораторного исследования на КГЛ осуществляют согласно действующим методическим указаниям по организации и проведению профилактических и противоэпидемических мероприятий против Крымской геморрагической лихорадки.

Забор проб для молекулярно-генетического исследования осуществляют в соответствии с действующими методическими указаниями по организации работы при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного микроорганизмами I-II групп патогенности и методическими рекомендациями по забору, транспортировке, хранению клинического материала для ПЦР-диагностики.

Хранят сыворотку крови при температуре от 2°С до 8°С не более 3 сут. при температуре не выше минус 16°С - в течение 1 месяца, при температуре не выше минус 68°С - в течение 1 года. Допускается только однократное замораживание-оттаивание материала. При замораживании клинического материала его транспортировка должна проводиться также в замороженном состоянии.

4.1.4. Оформление направления на исследование

На каждую отправляемую в лабораторию пробу от больного КГЛ или с подозрением на эту инфекцию заполняют направление в соответствии с приложением 5. На пробы секционного материала (от умершего от КГЛ или с подозрением на эту инфекцию) заполняют направление в соответствии с приложением 6. Направляемую пробу (пробы) сопровождают письмом на имя руководителя учреждения, в котором указывают вид направляемого материала, количество образцов и цель исследования; письмо подписывает руководитель направившего учреждения.

4.1.5. Порядок взаимодействия медицинских организаций с учреждениями Роспотребнадзора

Информацию о выявленных случаях КГЛ направляют в установленном порядке в соответствии с действующими нормативными документами.

Отобранный материал от больных в МО направляют в специализированные лаборатории ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации. В случае отсутствия в ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации лаборатории, осуществляющей исследования на КГЛ, а также при необходимости подтверждения диагноза клинический материал доставляют в Региональный центр по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности или Центр индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней в установленном порядке. Передачу и транспортирование осуществляют в соответствии с действующими санитарными правилами по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности (опасности).

4.1.6. Транспортировка крови, сывороток крови и секционного материала в специализированную лабораторию регионального или федерального уровня

Транспортировку проб клинического материала для лабораторного исследования на КГЛ осуществляют согласно действующим методическим указаниям по организации и проведению профилактических и противоэпидемических мероприятий против Крымской геморрагической лихорадки.

Материал с направлением доставляют специально выделенным транспортом в сопровождении медицинского работника.

Если материал для исследований может быть доставлен в лабораторию в течение 2-4 ч, то его транспортируют в термосе с сухим льдом или термоконтейнере с хладоагентами. Если время доставки материала превышает 4 ч, его замораживают и доставляют в термоконтейнерах с сухим льдом. Биологический материал от больных (трупа) с подозрением на КГЛ отправляют в специализированную лабораторию не позднее 24 часов.

4.2. Порядок работы при проведении лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки для филиалов ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации (в муниципальном образовании, городе, административном районе)

По эпидпоказаниям сбор полевого материала (иксодовые клещи, органы птиц и грызунов (головной мозг, печень), проб крови крупного и мелкого рогатого скота могут осуществлять специалисты ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" и его филиалов.

Сбор и транспортировка полевого материала согласно п. 5.3.3.1 настоящих МУ.

ГАРАНТ:

По-видимому, в тексте предыдущего абзаца допущена опечатка. Имеется в виду "п. 4.3.3.1"

4.3. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки для лабораторий ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации

4.3.1. Требования к лабораториям ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации, осуществляющим исследования на Крымскую геморрагическую лихорадку

Лабораторные исследований на КГЛ могут проводить лаборатории особо опасных инфекций, ПЦР-исследований, вирусологические лаборатории ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации.

Наличие разрешительных и регламентирующих работу документов

Лаборатории ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации должны быть аккредитованы в установленном порядке.

Лаборатории ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации, осуществляющие лабораторные исследования на КГЛ, должны соответствовать требованиям действующих нормативных документов.

Учет, хранение, передача и транспортирование подозрительного материала на КГЛ, деконтаминация и утилизация отходов должна осуществляться в соответствии с действующими санитарными правилами. Транспортировка материала проводится в условиях "холодовой цепи".

Требования к специалистам и персоналу, участвующим в выполнении исследований на КГЛ

Требования к специалистам и персоналу, участвующим в выполнении исследований на КГЛ

Исследования на КГЛ могут выполнять специалисты не моложе 18 лет с высшим и средним медицинским, биологическим образованием, окончившие курсы профессиональной переподготовки по специальности "Вирусология" и/или курсы профессиональной переподготовки по специальности "Бактериология" с основами безопасной работы с патогенными биологическими агентами (ПБА) I-II групп, не имеющие противопоказаний к лечению специфическими препаратами и имеющие допуск к работе с ПБА II-IV групп на основании приказа руководителя учреждения.

Инженерно-технический персонал и дезинфекторы проходят специальную подготовку по месту работы в соответствии с должностными обязанностями.

Специалисты, осуществляющие деятельность, связанную с использованием возбудителей инфекционных болезней, должны повышать квалификацию не реже одного раза в пять лет.

Необходимый уровень подготовки специалистов с высшим медицинским (биологическим) образованием и средним медицинским образованием представлен в приложении 1 МУ.

Требования к обеспечению безопасности работы персонала

Каждая лаборатория должна иметь пакет документов, определяющих режим безопасной работы сотрудников с учетом характера работ, особенностей технологии, свойств микроорганизмов. Документы должны быть согласованы с комиссией по контролю соблюдения требований биологической безопасности, специалистами по охране труда, противопожарным мероприятиям и утверждены руководителем учреждения. Результаты проверок знаний правил техники безопасности персонала при проведении работ фиксируются в специальном журнале.

Все сотрудники должны выполнять требования по обеспечению безопасности работы с материалом, подозрительным и зараженным возбудителями инфекционных болезней II-IV групп патогенности (опасности), в соответствии с действующими нормативными документами.

Порядок организации внутреннего контроля лабораторных исследований.

Контроль качества диагностических исследований на КГЛ в лабораториях ООИ ФБУЗ включает:

- проведение контроля качества диагностических препаратов и тест-систем, дезинфицирующих средств, химических реактивов;

- проведение своевременной поверки средств измерений, аттестации испытательного оборудования;

- контроль качества стерильности лабораторной посуды, дистиллированной воды;

- контроль качества работы паровых и суховоздушных стерилизаторов;

- контроль температурного режима холодильников;

- контроль температурного режима термостатов;

- контроль работы бактерицидных облучателей;

- проверка состояния воздуха производственных помещений и боксов, температурного режима, влажности, давления;

- проверка санитарного состояния помещений, включая условия уборки, контроль качества дезинфекции, контроль смывов с поверхностей и оборудования.

Результаты контроля фиксируют в специальных журналах.

Правила ведения документации

Ведение лабораторной документации, включая регистрационные и рабочие журналы, осуществляют в соответствии с требованиями действующих нормативно-методических документов.

Требования к материальным ресурсам, необходимым для выполнения диагностических исследований на КГЛ

Для проведения диагностических исследований на КГЛ в лабораториях ООИ должны быть в наличии:

- диагностические препараты, тест-системы, зарегистрированные в установленном порядке (приложение 2 МУ);

- приборы, оборудование (приложение 3 МУ);

- расходные и дезинфицирующие материалы (приложение 4 МУ);

- комплект медицинский (укладка универсальная для забора материала от людей и из объектов окружающей среды для исследования на особо опасные инфекционные болезни);

- рабочая и защитная одежда, тип защитной одежды зависит от характера выполняемой работы.

4.3.2. Номенклатура и объем исследований

Лаборатории ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации проводят:

- сбор полевого материала (иксодовые клещи, органы птиц и грызунов (головной мозг, печень), пробы крови крупного и мелкого рогатого скота - по эпидпоказаниям;

- исследование полевого материала и сывороток крови крупного и мелкого рогатого скота;

- исследование материала от больных и умерших с подозрением на КГЛ иммуносерологическими и молекулярно-генетическими методами, согласно действующим методическим указаниям по лабораторной диагностике КГЛ.

4.3.3. Порядок диагностических исследований на КГЛ в лабораториях ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации

Забор клинического материала от больных и умерших с подозрением на КГЛ осуществляют в соответствии с п. 5.1.3 настоящих МУ.

ГАРАНТ:

По-видимому, в тексте предыдущего абзаца допущена опечатка. Имеется в виду "п. 4.1.3"

4.3.3.1. Сбор и транспортировка полевого материала

Сбор материала и его транспортировку осуществляют зоогруппы ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации с соблюдением правил безопасности работы с материалом, подозрительным на зараженность возбудителями I-II групп патогенности.

Рекомендуется использовать для забора материала комплект медицинский (укладку универсальную для забора материала от людей и из объектов окружающей среды для исследования на особо опасные инфекционные болезни).

В сельскохозяйственных комплексах объектами наблюдения являются КРС, МРС, индейки и клещи на разных фазах развития, собранные с животных. В природных биотопах проводят отстрел врановых птиц, отлов мелких диких млекопитающих с целью получения от них материала для лабораторного исследования на наличие антител к вирусу ККГЛ, антигена или РНК этого возбудителя. Кроме того, с животных и птиц собирают клещей для последующего исследования.

Отбор, упаковку и транспортировку проб полевого материала для лабораторного исследования на КГЛ осуществляют согласно действующим Методическим указаниям по организации и проведению профилактических и противоэпидемических мероприятий против Крымской геморрагической лихорадки.

4.3.3.2. Оформление направления на исследование

На пробы полевого материала заполняют направление (приложение 9) в двух экземплярах, один - вкладывают контейнер с пробами, второй - доставляет нарочный. Направляемые пробы сопровождают письмом на имя руководителя учреждения, в котором указывают вид направляемого материала и цель его исследования; письмо подписывает руководитель направившего учреждения.

4.3.3.3. Методы исследования полевого и клинического материала на КГЛ включают специфическую индикацию возбудителя в исследуемом материале (выявление РНК вируса ККГЛ методом ОТ-ПЦР, обнаружение вирусного антигена и специфических антител класса М (IgM) и класса G (IgG) иммуноферментным методом).

Порядок исследования материала включает:

I этап

- прием, сортировку и регистрацию проб;

- первичную обработку проб и подготовку их к исследованию;

- постановку ПЦР и ИФА.

II этап

5-6 ч от начала исследования - учет результатов ИФА;

8-12 ч от начала исследования - учет результатов ПЦР;

- выдача ответа специфической индикации на основании результатов ИФА и ПЦР.

4.3.3.4. Регистрация и оформление результатов исследования

Регистрацию результатов анализа в лабораториях ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" производят по учетным формам и оформляют в соответствии с приложениями 7,8 МУ.

ГАРАНТ:

Нумерация пунктов приводится в соответствии с источником

4.5.3.3.5. Порядок взаимодействия лабораторий ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъекте Российской Федерации с иными учреждениями Роспотребнадзора

Информацию о выявленных положительных пробах передают в соответствии с действующей нормативной документацией и направляют в Референс-центр по мониторингу за Крымской геморрагической лихорадкой.

При необходимости изоляции штаммов вируса ККГЛ (по эпидпоказаниям) положительные на КГЛ пробы от людей, из объектов окружающей среды передают в установленном порядке в Референс-центр по мониторингу за возбудителем КГЛ для выделения штаммов и идентификации возбудителя. Срок доставки - 5 суток. Передачу и транспортирование осуществляют в соответствии с действующими СП по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности. Прилагаются сопроводительное письмо, акт упаковки и акт передачи.

5. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки для лабораторий регионального уровня

5.1. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки для лабораторий Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней I-II групп патогенности, курирующих субъекты Российской Федерации и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней

5.1.1. Требования к лабораториям Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней

Лаборатории Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней должны быть аккредитованы на техническую компетентность в установленном порядке в соответствии с действующей законодательной базой Российской Федерации.

Наличие разрешительных и регламентирующих работу документов для лабораторий Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней, требования к учету, хранению, передаче и транспортированию положительных проб на КГЛ, утилизации отходов, требования к специалистам и персоналу, участвующим в выполнении исследований на КГЛ, требования к обеспечению безопасности работы персонала, порядок организации внутреннего контроля качества лабораторных исследований, правила ведения документации, требования к материальным ресурсам, необходимым для выполнения диагностических исследований на КГЛ аналогичны п. 5.3.1 настоящих МУ.

ГАРАНТ:

По-видимому, в тексте предыдущего абзаца допущена опечатка. Имеется в виду "п. 4.3.1"

5.1.2. Номенклатура и объем исследований аналогичны п. 5.3.2. настоящих МУ.

ГАРАНТ:

По-видимому, в тексте предыдущего абзаца допущена опечатка. Имеется в виду "п. 4.3.2"

5.1.3. Порядок диагностических исследований на Крымскую геморрагическую лихорадку в лабораториях Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней аналогичны п. 5.3.3. настоящих МУ.

ГАРАНТ:

По-видимому, в тексте предыдущего абзаца допущена опечатка. Имеется в виду "п. 4.3.3"

5.1.4. Оформление результатов исследования

Регистрацию результатов анализа в лаборатории Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней производят в учетных формах рабочей документации. Результаты исследования оформляют на соответствующем бланке учреждения.

5.1.5. Порядок взаимодействия лабораторий Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней с учреждениями Роспотребнадзора аналогичны п. 5.3.3.5. настоящих МУ.

ГАРАНТ:

По-видимому, в тексте предыдущего абзаца допущена опечатка. Имеется в виду "п. 4.5.3.3.5"

6. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки для лабораторий федерального уровня

6.1. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки для Референс-центра по мониторингу за возбудителем КГЛ

6.1.1. Требования к лабораториям Референс-центра по мониторингу за возбудителем КГЛ

Наличие разрешительных и регламентирующих работу документов для лабораторий Референс-центра по мониторингу за возбудителем КГЛ, требования к учету, хранению, передаче и транспортированию положительных проб на КГЛ, утилизации отходов, требования к специалистам и персоналу, участвующим в выполнении исследований на КГЛ, требования к обеспечению безопасности работы персонала, правила ведения документации аналогичны п. 6.1.1 настоящих МУ.

Порядок организации внутреннего контроля качества лабораторных исследований

Контроль качества диагностических исследований на КГЛ в лабораториях Референс-центра по мониторингу за КГЛ включает:

- контроль качества культур клеток, питательных сред, растворов для культур клеток, диагностических препаратов и тест-систем, выделенных штаммов, антибактериальных препаратов, дистиллированной воды, дезинфицирующих средств, химических реактивов;

- своевременная поверка средств измерений, аттестация испытательного оборудования;

- контроль качества стерильности лабораторной посуды;

- контроль качества работы паровых и суховоздушных стерилизаторов;

- контроль температурного режима работы холодильников и термостатов;

- контроль работы бактерицидных ламп;

- проверка состояния воздуха производственных помещений и боксов, температурного режима, влажности;

- проверка санитарного состояния помещений, включая условия уборки, дезинфекции, контроля смывов с поверхностей и оборудования.

Результаты контроля фиксируют в специальных журналах.

Требования к материальным ресурсам, необходимым для выполнения диагностических исследований на КГЛ

Для проведения диагностических исследований на КГЛ в лабораториях должны быть в наличии:

- диагностические препараты, тест-системы, зарегистрированные в установленном порядке и экспериментальные серии (приложение 2 МУ);

- приборы, оборудование (приложение 3 МУ);

- расходные и дезинфицирующие материалы (приложение 4 МУ).

- культуры клеток, зарегистрированные в установленном порядке, питательные среды и растворы для культур клеток, рекомендуемые антибиотики (приложение 10 МУ).

6.1.2. Номенклатура и объем исследований

Лаборатории Референс-центра по мониторингу за КГЛ проводят:

- исследование материала иммунологическими и молекулярно-генетическими методами от больных и умерших с подозрением на КГЛ;

- выделение вируса;

- полную идентификацию и изучение биологических, молекулярно-генетических, биохимических свойств штаммов возбудителя КГЛ, в том числе с атипичными свойствами;

- генетическое типирование и секвенирование РНК штаммов возбудителя КГЛ, а также анализ геномов штаммов вируса;

- исследование клинического (секционного) и полевого материала, по эпидемиологическим показаниям с учетом сложившейся эпизоотологической и эпидемиологической обстановки.

6.1.3. Организация и обеспечение диагностической деятельности при мониторинге за возбудителем Крымской геморрагической лихорадки

Материалом для исследования служат клинический и полевой материал, штаммы возбудителя КГЛ, в том числе штаммы с атипичными свойствами.

При исследовании клинического, полевого материала и штаммов возбудителя КГЛ, в том числе с атипичными свойствами, используют весь комплекс современных высокотехнологичных методов вирусологического, иммуносерологического и молекулярно-генетического анализа, включая применение экспериментально-лабораторных серий препаратов.

Порядок исследования клинического и полевого материала на КГЛ

Для выделения вируса и выявления маркеров возбудителя от больных людей берут кровь (до 5-х сут от начала клинических проявлений заболевания при посеве на культуры клеток и до 7-х сут - при заражении новорожденных белых мышей при проведении вирусологического исследований и на 10-14-й день - для серологического исследования при выявлении IgM). От умерших для исследования берут пробы легких, печени, селезенки, почек и мозг (головной и спинной).

Специфическая индикация возбудителя КГЛ осуществляется:

- иммуноферментным анализом: для выявления антигена вируса исследуют сыворотку крови, а также суспензии органов;

- полимеразной цепной реакцией с обратной транскрипцией: выявление РНК возбудителя КГЛ.

Выделение и идентификация возбудителя КГЛ:

- культивирование вируса ККГЛ в перевиваемых клетках линий Vero-Е6, SW-13 и др. Вирус ККГЛ культивируется в перевиваемых клетках Vero-Е6 без цитопатического эффекта, на перевиваемой культуре клеток аденокарциномы человека SW-13 вирус ККГЛ вызывает цитопатический эффект (ЦПЭ), проявляющийся в виде разрежения монослоя и отслаивания клеток от поверхности. Вирусный антиген накапливается в цитоплазме клеток.

- исследование монослоя зараженных клеток с помощью МФА через 24-48 (72) ч. Вирусный антиген выявляется в цитоплазме клеток в виде светящихся мельчайших зернышек и гранул различной величины, сливающихся в диффузную массу;

- заражение белых мышей-сосунков в головной мозг. Инкубационный период при первичном заражении составляет 5-12 дней. Через 24 ч и 48 ч часть мышей забивают и из мозга готовят мазки-отпечатки для МФА и суспензии - для РНГА. При получении отрицательных результатов исследования этого материала за оставшимися мышами наблюдают еще трое суток, после чего подвергают их мозг такому же исследованию. Модель новорожденных белых мышей более чувствительна, чем культура клеток.

Выявление антител к вирусу ККГЛ в сыворотке (плазме) крови человека.

Серодиагностику заболевания осуществляют с помощью ИФА (выявление IgM и IgG к вирусу ККГЛ). Титр IgG определяют одновременно в парных сыворотках крови.

6.1.4. Порядок взаимодействия лабораторий Референс-центра по мониторингу за возбудителем КГЛ с Национальным центром верификации диагностической деятельности и Национальным центром, осуществляющим функцию государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций, риккетсиозов Роспотребнадзора

Выделенные штаммы вируса ККГЛ передают в соответствии с действующими нормативными документами в Национальный центр верификации диагностической деятельности и Национальный центр, осуществляющий функцию государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций, риккетсиозов Роспотребнадзора.

Передачу и транспортирование осуществляют в соответствии с действующими СП по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности.

6.2. Порядок и организация лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки для Национального центра верификации диагностической деятельности и Национального центра, осуществляющего функции государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций, риккетсиозов Роспотребнадзора

6.2.1. Требования к лабораториям Национального центра верификации диагностической деятельности и Национального центра, осуществляющего функции государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций, риккетсиозов Роспотребнадзора

Лаборатории Национального центра верификации диагностической деятельности и Национального центра, осуществляющего функции государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций, риккетсиозов, Роспотребнадзора должны быть аккредитованы на техническую компетентность в установленном порядке в соответствии с действующей законодательной базой Российской Федерации.

Наличие разрешительных и регламентирующих работу документов, требования к специалистам и персоналу, участвующим в выполнении исследований на КГЛ, требования к обеспечению безопасности работы персонала, порядок организации внутреннего контроля лабораторных исследований, правила ведения документации и требования к материальным ресурсам, необходимым для выполнения диагностических исследований на КГЛ, аналогичны п. 6.1.1 настоящих МУ.

6.2.2. Номенклатура и объем исследований

Лаборатории Национального Центра верификации диагностической деятельности Национального центра, осуществляющего функции государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций, риккетсиозов, Роспотребнадзора проводят:

- изоляцию штаммов вируса ККГЛ из проб материала, полученных из Референс-центра по мониторингу за возбудителем КГЛ;

- верификацию результатов диагностики КГЛ;

- диагностические исследования материала от больных КГЛ и умерших от этой болезни - по эпидпоказаниям;

- осуществляют хранение коллекционных штаммов вируса ККГЛ, охраноспособное и авторское депонирование.

6.2.3. Организация и обеспечение диагностической деятельности

Порядок исследования клинического и полевого материала на КГЛ соответствует п. 7.1.3 настоящих МУ.

ГАРАНТ:

По-видимому, в тексте предыдущего абзаца допущена опечатка. Имеется в виду "п. 6.1.3"

Дополнительно проводят:

- полногеномное секвенирование;

- хранение коллекционных штаммов, охраноспособное и авторское депонирование;

- на основании результатов расширенной характеристики штаммов вируса ККГЛ составляют паспорта на штаммы, хранящиеся в Национальном центре, осуществляющем функции государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций, риккетсиозов Роспотребнадзора.

6.2.4. Порядок взаимодействия лабораторий Национального центра верификации диагностической деятельности и Национального центра, осуществляющего функции государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций, риккетсиозов с учреждениями Роспотребнадзора

Национальный Центр верификации диагностической деятельности и Национальный центр, осуществляющий функции государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций, риккетсиозов, Роспотребнадзора направляет результаты проведенных исследований в Региональные центры по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I-II групп патогенности, Центры индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней, Референс-центр по мониторингу за возбудителем КГЛ.

7. Нормативные ссылки

7.1. Федеральный закон от 03.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".

ГАРАНТ:

По-видимому, в тексте предыдущего абзаца допущена опечатка. Дату названного Федерального закона следует читать как "30.03.1999"

7.2. Федеральный закон от 04.05.2011 N 99-ФЗ "О лицензировании отдельных видов деятельности".

7.3. Постановление Правительства Российской Федерации от 22.01.2007 г. N 31 "Об утверждении положения о лицензировании деятельности, связанной с использованием возбудителей инфекционных заболеваний".

7.4. Постановление Правительства Российской Федерации от 29.10.2007 N 720 "О внесении изменений в пункт 5 Положения о лицензировании деятельности, связанной с использованием возбудителей инфекционных заболеваний, утвержденного постановлением Правительства Российской Федерации от 22.01.2007 N 31".

7.5. Приказ Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации от 07.07.2009 N 415н "Об утверждении квалификационных требований к специалистам с высшим и послевузовским медицинским и фармацевтическим образованием в сфере здравоохранения".

7.6. Приказ Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 17.03.2008 N 88 "О мерах по совершенствованию мониторинга за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней".

7.7. Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 01.04.2005 г. N 12 "Об эпидемиологической обстановке по Крымской геморрагической лихорадке в Южном федеральном округе и мерах по ее профилактике".

7.8. Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 02.04.2007 г. N 17 "О мерах по совершенствованию профилактики Крымской геморрагической лихорадки в Южном федеральном округе".

7.9. Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 24.02.2009 N 11 "О представлении внеочередных донесений о чрезвычайных ситуациях в области общественного здравоохранения санитарно-эпидемиологического характера".

7.10. Санитарные правила "Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности". СП 1.2.036-95.

7.11. "Санитарно-эпидемиологические требования к проведению дератизации" СП 3.5.3.1129-02".

7.12. Санитарно-эпидемиологические правила "Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)". СП 1.3.1285-03.

7.13. Санитарно-эпидемиологические правила "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней". СП 1.3.2322-08.

7.14. Санитарно-эпидемиологические правила "Санитарная охрана территории Российской Федерации". СП 3.4.2318-08".

7.15. Санитарно-эпидемиологические правила "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней" Дополнения и изменения N 1 к СП 1.3.2322-08". СП 1.3.2518-09.

7.16. Санитарно-эпидемиологические требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность. СанПиН 2.1.3.2630-10.

7.17. Санитарно-эпидемиологические правила и нормативы "Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами". СанПиН 2.1.7.2790-10.

7.18. Методические указания по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения. МУ-287-113.

7.19. Методические указания "Сбор, учет и подготовка к лабораторному исследованию кровососущих членистоногих-переносчиков возбудителей природно-очаговых инфекций" МУ 3.1.1027-01.

7.20. Методические указания "Отлов, учет и прогноз численности мелких млекопитающих и птиц в природных очагах инфекций" МУ 3.1.1029-01.

7.21. Методические указания "Организация и проведение первичных противоэпидемических мероприятий в случаях выявления больного (трупа), подозрительного на заболевания инфекционными болезнями, вызывающими чрезвычайные ситуации в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения" МУ 3.4.2552-09.

7.22. Методические указания "Организация, обеспечение и оценка противоэпидемической готовности медицинских учреждений к проведению мероприятий в случае завоза или возникновения особо опасных инфекций, контагиозных вирусных геморрагических лихорадок, инфекционных болезней неясной этиологии, представляющих опасность для населения Российской Федерации и международного сообщения" МУ 3.4.1030-01.

7.23. Методические указания "Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории". МУ 4.2.2039-05.

7.24. Методические указания "Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности" МУ 1.3.2569-09.

7.25. Методические указания "Организация и проведение профилактических и противоэпидемических мероприятий против Крымской геморрагической лихорадки" МУ 3.1.1.2488-09.

7.26. Методические рекомендации "Забор, транспортировка, хранение клинического материала для ПЦР-диагностики".

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко