Приложение В (справочное). Установление чувствительности популяции тест-объекта и значения метрологических характеристик методов

Приложение В
(справочное)

Установление чувствительности популяции тест-объекта и значения метрологических характеристик методов

В.1 Чувствительность популяции тест-объекта проверяют по интенсивности реагирования к эталонному токсиканту 1) медь (II) сернокислая или 2) калий двухромовокислый. Показателем чувствительности служит за 24 ч экспозиции, т.е. концентрация эталонного токсиканта, в которой гибнет 50% взятой в опыт популяции.

В практике токсикологических исследований показано, что к гибели 50% взятой в эксперимент выборки популяции тест-объектов () приводит не одна концентрация эталонного токсиканта, а диапазон концентраций.

Так, например, для тест-объекта коловратки Brachionus calyciflorus этот диапазон составляет от 0,009 до 0,029 мг/л меди (II) сернокислой и от 0,075 до 0,250 мг/л калия двухромовокислого.

определяют графическим методом. В ходе эксперимента учитывают погибших особей. Гибель выражают в процентах. Процентные значения переводят в пробитные значения согласно таблице В.1. Соответствующие концентрации эталонного токсиканта выражают в логарифмических значениях.

На основе пробитных значений и концентраций эталонного токсиканта, выраженных в десятичных логарифмах, строят график в виде прямой линии. На графике на оси ординат находят точку пробитного значения 5,0 и от нее параллельно оси абсцисс проводят линию до пересечения с линией графика, построенного по результатам эксперимента с различными концентрациями эталонного токсиканта. Получают точку А - пересечение прямой и координаты пробитного значения 5,0 (см. рисунок В.1). Точка пересечения опущенного перпендикуляра и оси абсцисс определяет значение - Значение последней соответствует концентрации эталонного токсиканта, при которой гибнет 50% взятой в опыт популяции.

В случае, когда полученная по графику концентрация эталонного токсиканта () выходит за пределы указанных выше диапазонов, то для биотестирования следует взять другую популяцию. В противном случае результаты биотестирования будут некорректными.

Таблица В.1 - Таблица перевода гибели выборки тест-объектов, выраженной в процентах, в пробитные значения

%	0,0	1,0	2,0	3,0	4,0	5,0	6,0	7,0	8,0	9,0
0	-	2,67	2,95	3,12	3,25	3,35	3,44	3,52	3,59	3,66
10	3,72	3,77	3,85	3,87	3,92	3,96	4,01	4,05	4,08	4,12
20	4,16	4,19	4,22	4,26	4,29	4,33	4,36	4,39	4,42	4,45
30	4,48	4,50	4,53	4,56	4,59	4,61	4,64	4,67	4,69	4,72
40	4,75	4,77	4,81	4,82	4,84	4,87	4,90	4,92	4,95	4,97
50	5,00	5,03	5,05	5,08	5,10	5,13	5,15	5,18	5,20	5,23
60	5,25	5,28	5,30	5,33	5,36	5,38	5,41	5,44	5,47	5,50
70	5,52	5,55	5,58	5,61	5,64	5,67	5,71	5,74	5,77	5,81
80	5,84	5,88	5,92	5,95	5,99	6,04	6,08	6,13	6,18	6,23
90	6,28	6,34	6,41	6,48	6,55	6,64	6,75	6,88	7,05	7,32

"Рис. B.1. Графический расчет "

Например, для нахождения для популяции брахионуса проводят эксперимент по исследованию нескольких концентраций меди (II) сернокислой: 0,005; 0,010; 0,015; 0,030 мг/л. По результатам опыта составляют таблицу В.2.

Таблица В.2 - Результаты эксперимента по определению популяции Brachionus calyciflorus

Концентрация эталонного токсиканта		Гибель
мг/л	lgC	%	Пробиты
0,005	-2,3	10	3,72
0,010	-2,0	30	4,48
0,015	-1,8	45	4,87
0,030	-1,5	60	5,25

По значениям таблицы В.2 строят график (рисунок В.1). Точка пересечения опущенного из точки А перпендикуляра и оси абсцисс определяет значение . В данном случае значение составляет - 1,7lgC, что соответствует 0,020 мг/л концентрации меди (II) сернокислой. Полученная по графику концентрация меди (II) сернокислой () укладывается в границы указанного выше диапазона концентраций (от 0,009 до 0,029 мг/л). Следовательно, эта популяция брахионуса пригодна для проведения токсикологического анализа.

В.2 Метрологическая характеристика методов биотестирования с использованием микрозоопланктона

В.2.1 В результате исследований отклика тест-объектов на эталонный токсикант по показателю гибели установлены следующие значения метрологических характеристик биотестов:

- с использованием коловраток: при воздействии калия двухромовокислого за 24 ч экспозиции диапазон концентраций для Brachionus calyciflorus составляет от 0,025 до 1,0 мг/л, внутрилабораторная прецизионность - 25%;

- с использованием инфузорий: при воздействии калия двухромовокислого за 24 ч экспозиции диапазон концентраций для Paramecium caudatum составляет от 0,075 до 2,50 мг/л, внутрилабораторная прецизионность составляет 25%.

В.2.2 В результате исследований отклика тест-объектов на эталонный токсикант по показателю размножения установлены следующие значения метрологических характеристик биотестов:

- с использованием коловраток: при воздействии калия двухромовокислого за 24 ч экспозиции диапазон концентраций для Brachionus calyciflorus составляет от менее 0,001 до 0,001 мг/л, внутрилабораторная прецизионность - 25%;

- с использованием инфузорий: при воздействии калия двухромовокислого за 24 ч экспозиции диапазон концентраций для Paramecium caudatum составляет от 0,001 до 1,0 мг/л, внутрилабораторная прецизионность - 25%.