Методические указания "Метод микробиологического измерения концентрации препарата ЭМ-1 "Байкал" по одному из ведущих компонентов (Lactobacillus casei-21) в воздухе рабочей зоны" МУК 4.2.1071-01 (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 20 сентября 2001 г.)

Методические указания
"Метод микробиологического измерения концентрации препарата ЭМ-1 "Байкал" по одному из ведущих компонентов
(Lactobacillus casei-21)
в воздухе рабочей зоны"
МУК 4.2.1071-01
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 20 сентября 2001 г.)

Дата введения: с момента утверждения

Введены впервые

1. Общие положения и область применения

Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентраций клеток штамма Lactobacillus casei-21, являющегося ведущим компонентом консорциума микроорганизмов (препарат ЭМ-1 "Байкал") в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентрации от 100 до 50000 клеток в 1 воздуха.

Методические указания разработаны с целью обеспечения микробиологического контроля концентрации препарата "Байкал ЭМ-1" по одному из ведущих компонентов Lactobacillus casei-21 в воздухе рабочей зоны и производственных помещений и оценки соответствия уровня его содержания гигиеническим нормативам на основе учета требований ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования", ГОСТ 8.563-96 "ГСИ. Методики выполнения измерений".

Методические указания предназначены для центров Госсанэпиднадзора, санитарных лабораторий биотехнологических предприятий, микробиологических лабораторий, научно-исследовательских институтов, работающих в области гигиены окружающей среды и аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований.

2. Характеристика штамма Lactobacillus casei-21

	Семейство:	Lactobaciliaceae
	Род:	Lactobacillus
	Вид:	casei
	Штамм:	21

На поверхности плотных питательных сред образует мелкие круглые колонии. Глубинные колонии - вогнутые, иногда с выростами. Форма клеток - палочки разной длины, образуют короткие и длинные цепочки, неподвижные, неспорообразующие, грамположительные. Отмечена также тенденция к образованию заметно искривленных (изогнутых) клеток.

3. Пределы измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток Lactobacillus casei-21 в воздушной среде в диапазоне концентраций от 100 до 50000 клеток в 1 воздуха при доверительной вероятности 0,95. 2000 .

4. Метод измерений

Метод основан на аспирации из воздуха клеток Lactobacillus casei-21 на поверхность плотной питательной среды и подсчете выросших колоний по типичным морфологическим признакам.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Прибор для бактериологического анализа воздуха, модель 818 (щелевой прибор Кротова)	ТУ 64-12791-77
Термостаты электрические суховоздушные или водяные
Автоклав электрический	ГОСТ 9586-75
Бокс, оборудованный бактерицидными лампами
Холодильник бытовой
Весы лабораторные, аналитические типа ВЛА-200
Микроскоп биологический с иммерсионной системой типа "Биолам" Л-211
Лупа с увеличением х10	ГОСТ 25706-83
Чашки Петри бактериологические плоскодонные, диаметром 100 мм
Пробирки биологические, вместимостью 20 и 35 мл	ГОСТ 10515-75
Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл	ГОСТ 10515-75
Колбы конические, вместимостью 250 и 500 мл	ГОСТ 1770-74
Секундомер	ГОСТ 9586-75
Барометр	ГОСТ 24696-79
Марля медицинская	ГОСТ 9412-77
Вата медицинская гигроскопическая	ГОСТ 25556-81

5.2. Реактивы, растворы

Агар микробиологический	ГОСТ 17206-96
Селективная среда для молочно-кислых палочек Lactobacillus casei-21
Среда Рогозы (состав питательной среды %):
дрожжевой экстракт - 0,5;
триптический гидролизат казеина - 1,0;
твин-80 - 0,1;
глюкоза - 2,0;
натрий уксуснокислый - 2,5;
лимоннокислый аммоний - 0,2;
ледяная уксусная кислота - 0,132;
соль Б - (магний сернокислый - 11,5 г; марганец сернокислый - 2,86 г; железо сернокислое - 0,58 г; вода 100 мл) - 0,5;
калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,6, рН среды 0,6;
вода водопроводная - 100 мл;
агар-агар - 1,5.

Стерилизация при 3/4 атмосферы, 20 мин. После остывания раствора добавляют 9 мл этилового спирта для подавления посторонней микрофлоры и разливают данный раствор асептично по 20 мл в чашки Петри.

6. Требования безопасности

При выполнении измерений концентрации клеток Lactobacillus casei-21 в воздушной среде соблюдают:

- правила техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.005-88;

- правила электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцию по эксплуатации прибора;

- требования, изложенные в руководстве "Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности (1980)";

- положения "Инструкций по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности" (1977).

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие соответствующую подготовку и имеющие навыки работы в области микробиологических исследований.

8. Условия измерений

Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях в соответствии с ГОСТ 15150-69 при температуре воздуха (20 _ 5) °С, атмосферном давлении 630-800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80%.

9. Проведение измерений

9.1. Условия отбора проб воздуха

Для определения микроорганизма воздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин на поверхность плотной питательной среды. Время аспирации воздуха 20 мин. Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора; наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижный диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.

9.2. Выполнение анализа

Метод предполагает учет количества типичных по морфологическим признакам колоний, выросших на 3-4 сутки после посева воздуха. Прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний.

Селективную среду тщательно перемешивают и разливают по 20 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности. Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при температуре 37°С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха.

После отбора проб воздуха чашки Петри инкубируют в термостате при 36°С, через 72 ч производят подсчет выросших типичных колоний. При необходимости культуру подвергают микроскопированию.

10. Вычисление результатов измерений

Расчет концентрации клеток в 1 воздуха производят по формуле:

, где

Х - концентрация клеток в воздухе;

N - количество колоний, выросших на чашке;

1000 - коэффициент перерасчета на 1 воздуха;

V - объем воздуха, л (произведение скорости на время аспирации).

Препарат "Байкал ЭМ-1" представляет собой консорциум микроорганизмов, в котором Lactobacillus casei-21 составляют 30% от общего числа микроорганизмов, Streptococcus lactis - 30%, бактерии фотосинтеза Phodopseudomonas palistris - 30%, сахаромицеты - Saccaromyces cerevisial - 10%. Концентрацию препарата "Байкал ЭМ-1" рассчитывают исходя из процентного отношения микроорганизмов, входящих в его состав, по формуле:

, где

А - концентрация консорциума ();

N - концентрация контрольного микроорганизма ();

d - содержание контрольного микроорганизма в консорциуме (%).

Контрольным микроорганизмом для данной методики является Lactobacillus casei-21.

11. Оформление результатов измерений

Результаты измерений оформляют протоколом по форме.

Протокол N 
количественного микробиологического анализа препарата
ЭМ-1 "Байкал" в воздухе рабочей зоны

Дата проведения анализа _____________________________________

Место отбора пробы _________________________________________

Название лаборатории _______________________________________

Юридический адрес организации _______________________________

Результаты микробиологического анализа

Шифр или N пробы	Определяемый микроорганизм	Концентрация,

Ответственный исполнитель

Научный руководитель

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации

Г.Г. Онищенко