Методические указания МУК 4.1.1648-03 "Спектрофотометрическое измерение массовых концентраций 2-(10-гидроксидецил)-5,6-диметокси-3-метил-2,5-циклогександиен-1,4-диона (идебенон) в воздухе рабочей зоны" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29 июня 2003 г.)

4.1. Методы контроля. Химические факторы
Методические указания
МУК 4.1.1648-03
"Спектрофотометрическое измерение массовых концентраций 2-(10-гидроксидецил)-5,6-диметокси-3-метил-2,5-циклогександиен-1,4-диона (идебенон) в воздухе рабочей зоны"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29 июня 2003 г.)

Дата введения: с момента утверждения

1. Область применения

Настоящие методические указания устанавливают количественный спектрофотометрический анализ воздуха рабочей зоны на содержание идебенона в диапазоне массовых концентраций .

2. Характеристика вещества

2.2. Эмпирическая формула .

2.3. Молекулярная масса 338,44.

2.4. Регистрационный номер CAS58186-27-9.

2.5. Физико-химические свойства.

Идебенон - порошок от желто-оранжевого до оранжевого цвета, практически без запаха, без посторонних включений, с температурой плавления 50 - 54°С. Умеренно растворим в хлороформе, спирте метиловом, спирте этиловом (1 г в ), практически нерастворим в воде.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль + пары.

2.6. Токсикологическая характеристика.

Идебенон - ноотропное средство, производное бензохинона, структурно-функциональный аналог убихинона (кофермент, чрезвычайно широко распространенный в биосфере, переносчик ионов водорода, компонент дыхательной цепи), обладает выраженным антиоксидантным и антигипоксическим действием, малоопасно при введении внутрь.

Предельно допустимая концентрация (ПДК) идебенона в воздухе рабочей зоны ; класс опасности - второй.

3. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций идебенона с погрешностью, не превышающей , при доверительной вероятности 0,95.

4. Метод измерений

Измерения массовой концентрации идебенона выполняют методом спектрофотометрии.

Метод определения основан на способности растворов идебенона в спирте этиловом поглощать УФ-излучение.

Измерение проводят при длине волны 280 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр и в спирт этиловый 95%-й.

Нижний предел измерения содержания идебенона в анализируемом объеме пробы 5 мкг.

Нижний предел измерения массовой концентрации идебенона в воздухе (при отборе воздуха).

Метод специфичен в условиях производства таблеток идебенона.

Определению не мешают крахмал картофельный, целлюлоза микрокристаллическая, лактоза, магний стеариново-кислый.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы.

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Спектрофотометр Specord M-40, Carl Zeiss
Весы лабораторные BЛA-200	ГОСТ 24104-88Е

ГАРАНТ:

См. ГОСТ Р 53228-2008 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания", утвержденный приказом Ростехрегулирования от 25 декабря 2008 г. N 739-ст

Аспирационное устройство, модель 822	ГОСТ 2.6.01 -86
Фильтродержатели	ТУ 95.72.05-77
Фильтры АФА-ВП-10	ТУ 95-743- 80
Поглотительный прибор Рыхтера 7 П	ТУ 25-11-1081-75
Колбы мерные, вместимостью	ГОСТ 1770-74Е
Палочки стеклянные	ГОСТ 25336-82Е
Пипетки, вместимостью 1, 2, 5,	ГОСТ 29227-91
Фильтры бумажные обеззоленные "белая лента", диаметром 5,5 см	ТУ 6-09-1678 77
Пробирки мерные с пришлифованными пробками, вместимостью	ГОСТ 25336 82Е
Бюксы химические с пришлифованными крышками, вместимостью	ГОСТ 25336- 82Е
Воронки химические, диаметром 30 мм	ГОСТ 25336-82Е
Кюветы с толщиной оптического слоя 10 мм
Дистиллятор	ТУ 61-1-721-79

5.2. Реактивы

Идебенон с содержанием основного вещества не менее 98,0% в пересчете на сухое вещество	ФС 42-8892-98
Спирт этиловый, 95%-й, ректификат	ГОСТ 5963-67

Допускается применение иных средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими, метрологическими характеристиками и квалификацией, не хуже приведенных в данном разделе.

6. Требования безопасности

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91.

6.3. При выполнении измерений с использованием спектрофотометра соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие обучение и имеющие навыки работы на спектрофотометре.

8. Условии измерений

8.1. Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха , атмосферном давлении 84 - 106 кПа и относительной влажности воздуха не более 80%.

8.2. Выполнение измерений на спектрофотометре проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору

9. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовка спектрофотометра, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

9.1. Приготовление растворов

9.1.1. Основной стандартный раствор идебенона с концентрацией готовят растворением 0,0500 г вещества в спирте этиловом в мерной колбе вместимостью . Раствор устойчив в течение месяца при хранении в холодильнике.

9.1.2. Стандартный раствор идебенона N 1 с концентрацией готовят разбавлением 20 основного стандартного раствора спиртом этиловым в мерной колбе вместимостью . Раствор устойчив в течение двух недель при хранении в холодильнике.

9.1.3. Стандартный раствор идебенона N 2 с концентрацией готовят разбавлением 10 стандартного раствора N 1 спиртом этиловым в мерной колбе вместимостью . Раствор устойчив в течение недели при хранении в холодильнике.

9.2. Подготовка прибора

Подготовку спектрофотометра проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.

9.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость оптической плотности раствора от массы идебенона, устанавливают по шести сериям растворов из пяти параллельных определений в каждой серии растворов для градуировки согласно табл. 1.

Таблица 1

Растворы для установления градуировочной характеристики при определении идебенона

Номер стандарта	Стандартный раствор идебенона, N 1,	Стандартный раствор идебенона, N 2,	Спирт этиловый, 95%-й,	Содержание идебенона в градуировочном растворе, мкг
1	0,0	0,0	10,0	0,0
2	0,0	0,5	9,5	5,0
3	0,0	1,0	9,0	10,0
4	0,0	2,0	8,0	20,0
5	0,5	0,0	9,5	50,0
6	1,0	0,0	9,0	100,0
7	2,0	0,0	8,0	200,0

Градуировочные растворы используют свежеприготовленными.

Подготовленные грдуировочные растворы перемешивают и через 10 мин измеряют оптические плотности растворов в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 280 нм по отношению к раствору сравнения, не содержащему определяемого вещества. Строят градуировочный график: на ось ординат наносят значения оптических плотностей градуировочных растворов, на ось абсцисс соответствующие им содержания идебенона (мкг).

Проверка градуировочного графика проводится 1 раз в квартал, а также в случае использования новой партии реактивов, оборудования и после ремонта прибора.

9.4. Отбор проб воздуха

Воздух с объёмным расходом аспирируют через фильтр АФА-ВП-10, помещенный в фильтродержатель, и один поглотительный прибор, содержащий спирта этилового 95%-го, при охлаждении (лед с солью). Для измерения ПДК следует отобрать воздуха. Пробы можно хранить в бюксах с пришлифованными крышками в холодильнике в течение двух недель.

10. Выполнение измерении

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический бюкс с пришлифованной крышкой вместимостью , приливают раствора из поглотительного прибора и оставляют на 15 мин, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтр тщательно отжимают, помещают в другой химический бюкс и повторно обрабатывают раствора из поглотительного прибора.

Оба раствора последовательно фильтруют на химической воронке через бумажный фильтр "белая лента" в мерную пробирку с пришлифованной пробкой вместимостью и доводят спиртом этиловым 95%-м до метки. Степень десорбции вещества с фильтра 97%. Оптическую плотность измеряют в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 280 нм по отношению к раствору сравнения, используя чистый фильтр.

Количественное определение содержания идебенона проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

Примечание. Фильтрование растворов анализируемых проб проводится для удаления нерастворимых в спирте этиловом 95%-м сопутствующих веществ, входящих в состав таблеток идебенона.

11. Вычисление результатов измерений

Массовую концентрацию идебенона (С, ) в воздухе рабочей зоны вычисляют по формуле:

, где

a - количество вещества, найденное в анализируемом объеме раствора по градуировочному графику, мкг;

V - объём воздуха, отобранного для анализа () и приведенного к стандартным условиям (прилож. 1).

12. Оформление результатов анализа

Результат количественного анализа представляют в виде: , , Р=0,95. Значение , , где - характеристика погрешности.

13. Контроль погрешности методики КХА

Значения характеристики погрешности, норматива оперативного контроля погрешности и норматива оперативного контроля воспроизводимости приведены в табл. 2.

Таблица 2

Диапазон определяемых массовых концентраций идебенона,	Наименование метрологической характеристики
	характеристика погрешности, , , Р=0,95	норматив оперативного контроля погрешности, К, , (Р=0,90, m=3)	норматив оперативного контроля воспроизводимости, D, , (Р=0,95,m=2)
0,15-6,0	0,0034+0,16С	0,0038+ 0,20С	0,0093+0,22С

Метрологические характеристики приведены в виде зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе - С.

13.1. Оперативный контроль погрешности

Оперативный контроль погрешности выполняют в одной серии с КХА рабочих проб.

Образцами для контроля являются реальные пробы воздуха рабочей зоны. Объем отобранной для контроля пробы должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике. После отбора пробы экстракт с фильтра делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы - . Вторую часть разбавляют соответствующим растворителем в два раза и снова делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, - . Во вторую часть делают добавку анализируемого компонента (X) до массовой концентрации исходной рабочей пробы () - общая концентрация не должна превышать верхнюю границу диапазона измерения и анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой - . Результаты анализа исходной рабочей пробы - . рабочей пробы, разбавленной в два раза, - и рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой - получают по возможности в одинаковых условиях, т.е. их получает один аналитик с использованием одного набора мерной посулы, одной партии реактивов и т.д.

Решение об удовлетворительной погрешности принимают при выполнении условия:

, где

- результат анализа рабочей пробы;

- результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза;

- результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой анализируемого компонента;

Х - величина добавки анализируемого компонента;

K - норматив оперативного контроля погрешности

К=0,0038+0,20С ().

13.2. Оперативный контроль воспроизводимости

Образцами для контроля являются реальные пробы воздуха рабочей зоны. Объем отобранной для контроля пробы должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике. После отбора пробы экстракт с фильтра делят на две равные части и анализируют в точном соответствии с прописью методики, максимально варьируя условия проведения анализа, т.е. получают два результата анализа в разных лабораториях или в одной, используя при этом разные наборы мерной посуды, разные партии реактивов. Два результата анализа не должны отличаться друг от друга на величину допускаемых расхождений между результатами анализа:

, где

- результат анализа рабочей пробы;

- результат анализа этой же пробы, полученный в другой лаборатории или в этой же, но другим аналитиком с использованием другого набора мерной посуды и других партий реактивов;

D - допустимые расхождения между результатами анализа одной и той же пробы

D=0,0093+0,22С ().

При превышении норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива D выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.

14. Нормы затрат времени на анализ

Для проведения серии анализов из 6 проб требуется 1 час 30 мин.

Методические указания разработаны Государственным унитарным предприятием "Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ" (В.П. Жестков, А.П. Крымов, В.Ф. Алещенко, Л.И. Крымова).

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации, Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации

Г.Г. Онищенко