Методические указания МУК 4.1.1679-03 "Спектрофотометрическое измерение массовых концентраций 33-[(3-амино-3,6-дидеокси-бэта-D-маннопиранозил)окси]-1,3,4,7,9,11,17,37- октагидрокси-15,16,18-триметил-13-оксо-14,39-диоксабицикло-[33,3,1]нонатр иаконта-19,21,25,27,29,31-гексаен-36-карбоновой кислоты (нистатин) в воздухе рабочей зоны" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ, Министерством здравоохранения РФ 29 июня 2003 г.)

4.1. Методы контроля. Химические факторы

Методические указания МУК 4.1.1679-03
"Спектрофотометрическое измерение массовых концентраций 33-[(3-амино-3,6-дидеокси--D-маннопиранозил)окси]-1,3,4,7,9,11,17,37-октагидрокси-15,16,18-триметил-13-оксо-14,39-диоксабицикло-[33,3,1]нонатриаконта-19,21,25,27,29,31-гексаен-36-карбоновой кислоты (нистатин) в воздухе рабочей зоны"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ, Министерством здравоохранения РФ 29 июня 2003 г.)

Дата введения: с момента утверждения

1. Область применения

Настоящие методические указания устанавливают количественный спектрофотометрический анализ воздуха рабочей зоны на содержание нистатина в диапазоне массовых концентраций 0,5-20,0 .

2. Характеристика вещества

2.1. Структурная формула (нистатин )

2.2. Эмпирическая формула

2.3. Молекулярная масса 926,1.

2.4. Регистрационный номер CAS 1400-61-9.

2.5. Физико-химические свойства.

Нистатин является смесью стереоизомеров: нистатин , нистатин и др. Нистатин - светло-желтый кристаллический порошок со слабым специфическим запахом и горьким вкусом. Практически не растворим в воде, эфире, хлороформе, очень мало растворим в 95%-м этиловом спирте, мало растворим в метаноле, бутаноле, хорошо растворим в диметилформамиде, ледяной уксусной кислоте, пиридине. Чувствителен к действию света, высоких температур и кислороду воздуха. Легко разрушается в кислой и щелочной среде и при действии окислителей. Гигроскопичен.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.6. Токсикологическая характеристика.

Нистатин - антибиотик полиеновой группы, оказывает противогрибковое действие, малотоксичен при поступлении внутрь, обладает слабым раздражающим действием при нанесении на кожу, оказывает общетоксическое действие.

Предельно допустимая концентрация (ПДК) в воздухе рабочей зоны 1,0 ; 2 класс опасности.

3. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций нистатина с погрешностью, не превышающей %, при доверительной вероятности 0,95.

4. Метод измерений

Измерения массовых концентраций нистатина выполняют методом спектрофотометрии.

Метод определения основан на способности растворов нистатина в смеси этилового спирта с 1н водным раствором ледяной уксусной кислоты в соотношении (1:1) по объему поглощать УФ-излучение.

Измерение проводят при длине волны 305 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения содержания нистатина в анализируемом объеме пробы - 5 мкг.

Нижний предел измерения массовой концентрации нистатина в воздухе рабочей зоны - 0,5 (при отборе 10 воздуха).

Субстанция поступает в производство готовой. Метод специфичен в условиях производства таблеток нистатина. Определению не мешают крахмал, лактоза, стеариновая кислота, тальк, желатин.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы, растворы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы и растворы.

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Спектрофотометр Specord М-40, Carl Zeiss
Весы лабораторные ВЛА-200	ГОСТ 24104-88Е

ГАРАНТ:

См. ГОСТ Р 53228-2008 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания", утвержденный приказом Ростехрегулирования от 25 декабря 2008 г. N 739-ст

Аспирационное устройство, модель 822	ГОСТ 2.6.01-86
Фильтродержатели	ТУ 95.72.05-77
Фильтры АФА-ХП-10	ТУ 95-743-80
Колбы мерные, вместимостью 100 , 500	ГОСТ 1770-74Е
Пипетки, вместимостью 1, 2, 5, 10	ГОСТ 29227-91
Пробирки мерные с пришлифованными пробками, вместимостью 10	ГОСТ 25336-82Е
Бюксы химические с пришлифованными крышками, вместимостью 25	ГОСТ 25336-82Е
Палочки стеклянные	ГОСТ 25336-82Е
Фильтры бумажные обеззоленные "белая лента" диаметр 5,5 см	ТУ 6-09-1678-77
Цилиндры, вместимостью 250	ГОСТ 1770-74Е
Воронки химические, диаметр 30 мм	ГОСТ 25336-82Е
Кюветы с толщиной оптического слоя 10 мм
Дистиллятор	ТУ 61-1-721-79

5.2. Реактивы, растворы

Нистатин с активностью не менее 4 500 ЕД/мг в пересчете на сухое вещество. Содержание компонента не менее 85%, компонентов не более 15%. Суммарное содержание компонентов 100% в пересчете на сухое вещество	ФС 42-1140-86
Уксусная кислота ледяная, хч, плотность 1,05 , 1н водный раствор	ГОСТ 61-75
Этиловый спирт, 95%	ГОСТ 5963-67
Вода дистиллированная	ГОСТ 6709-72

Допускается применение иных средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими, метрологическими характеристиками и квалификацией не хуже приведенных в данном разделе.

6. Требования безопасности

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91.

6.3. При выполнении измерений с использованием спектрофотометра соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших обучение и имеющих навыки работы на спектрофотометре.

8. Условия измерений

8.1. Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха ()°С, атмосферном давлении 84-106 кПа и относительной влажности воздуха не более 80%.

8.2. Выполнение измерений на спектрофотометре проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовку спектрофотометра, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

9.1. Приготовление растворов

9.1.1. Основной стандартный раствор нистатина с концентрацией 500 готовят растворением 0,0500 г вещества в смеси этилового спирта с 1н водным раствором ледяной уксусной кислоты в соотношении (1:1) по объему в мерной колбе, вместимостью 100 . Раствор используют свежеприготовленным.

9.1.2. Стандартный раствор нистатина N 1 с концентрацией 100 готовят разбавлением 20 основного стандартного раствора смесью этилового спирта с 1н водным раствором ледяной уксусной кислоты в соотношении (1:1) по объему в мерной колбе вместимостью 100 . Раствор используют свежеприготовленным.

9.1.3. Стандартный раствор нистатина N 2 с массовой концентрацией 10 готовят разбавлением 10 стандартного раствора N 1 смесью этилового спирта с 1н водным раствором ледяной уксусной кислоты в соотношении (1:1) по объему в мерной колбе вместимостью 100 . Раствор используют свежеприготовленным.

9.1.4. Приготовление 1н водного раствора ледяной уксусной кислоты. В мерную колбу вместимостью 1 000 , приливают 800 дистиллированной воды, добавляют 58 концентрированной кислоты ледяной уксусной (плотность 1,05), доводят объем раствора дистиллированной водой до метки и перемешивают. Раствор устойчив в течение 30 сут.

9.1.5. Смесь: 250 1н водного раствора ледяной уксусной кислоты наливают в мерную колбу вместимостью 500 , и доводят до метки спиртом этиловым. Смесь тщательно перемешивают и оставляют на 10-15 мин. Затем снова добавляют до метки спирт этиловый и перемешивают содержимое колбы. Полученную смесь используют для приготовления стандартных градуировочных растворов нистатина и растворения отобранных проб.

9.2. Подготовка прибора

Подготовку спектрофотометра проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.

9.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость оптической плотности раствора от массы нистатина, устанавливают по шести сериям растворов из пяти параллельных определений в каждой серии согласно табл. 1.

Таблица 1

Растворы для установления градуировочной характеристики при определении нистатина

Номер стандарта	Стандартный раствор нистатина N 1,	Стандартный раствор нистатина N 2,	Смесь,	Содержание нистатина в градуировочном растворе, мкг
1	0,0	0,0	10,0	0,0
2	0,0	0,5	9,5	5,0
3	0,0	1,0	9,0	10,0
4	0,0	2,0	8,0	20,0
5	0,5	0,0	9,5	50,0
6	1,0	0,0	9,0	100,0
7	2,0	0,0	8,0	200,0

Градуировочные растворы используют свежеприготовленными.

Подготовленные градуировочные растворы перемешивают и через 10 мин измеряют оптические плотности растворов в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 305 нм по отношению к раствору сравнения, не содержащему определяемого вещества.

Строят градуировочный график: на ось ординат наносят значения оптических плотностей градуировочных растворов, на ось абсцисс - соответствующие им содержания нистатина в мкг.

Проверка градуировочного графика проводится 1 раз в квартал или в случае использования новой партии реактивов, оборудования, прибора, в других случаях изменения условий измерения.

9.4. Отбор проб воздуха

Воздух с объемным расходом 1 аспирируют через фильтр АФА-ХП-10, помещенный в фильтродержатель. Для измерения 1/2 ПДК следует отобрать 10 воздуха. Пробы хранят в бюксах с пришлифованными крышками в холодильнике в течение 3 сут.

10. Выполнение измерения

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический бюкс с пришлифованной крышкой, вместимостью 25 , приливают 5 смеси этилового спирта с 1н водным раствором ледяной уксусной кислоты в соотношении (1:1) по объему и оставляют на 15 мин, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтр тщательно отжимают и повторно обрабатывают 5 смеси этилового спирта с 1н водным раствором ледяной уксусной кислоты в соотношении (1:1) по объему. Фильтр снова тщательно отжимают и удаляют. Оба раствора последовательно фильтруют на химической воронке через бумажный фильтр "белая лента" в мерную пробирку с пришлифованной пробкой, вместимостью 10 , и доводят смесью до метки. Степень десорбции вещества с фильтра 97%.

Оптическую плотность получаемых анализируемых растворов измеряют в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 305 нм по отношению к раствору сравнения, который готовят одновременно и аналогично пробам, используя чистый фильтр.

Количественное определение содержания нистатина проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

Примечание: фильтрование растворов анализируемых проб проводится для удаления нерастворимых в смеси этилового спирта с 1н водным раствором ледяной уксусной кислоты в соотношении (1:1) по объему вспомогательных веществ, входящих в состав таблеток нистатина.

11. Вычисление результатов измерений

Массовую концентрацию нистатина (С, ) в воздухе рабочей зоны вычисляют по формуле:

, где

а - количество вещества, найденное в анализируемом объеме раствора по градуировочному графику, мкг;

V - объем воздуха, отобранного для анализа () и приведенного к стандартным условиям (прилож. 1).

12. Оформление результатов анализа

Результат количественного анализа представляют в виде:

, Р = 0,95

Значение = 0,0059 + 0,16 С, , где

- характеристика погрешности.

13. Контроль погрешности методики КХА

Таблица 2

Значения характеристики погрешности, норматива оперативного контроля погрешности и норматива оперативного контроля воспроизводимости

Диапазон определяемых массовых концентраций нистатина,	Наименование метрологической характеристики
Диапазон определяемых массовых концентраций нистатина,	характеристика погрешности, , , (Р = 0,95)	норматив оперативного контроля погрешности, К, , (Р = 0,90, m = 3)	норматив оперативного контроля воспроизводимости, D, , (Р = 0,95, m = 2)
0,5-20,0	0,0059 + 0,16 С	0,0058 + 0,18 С	0,049 + 0,21 С

Метрологические характеристики приведены в виде зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе - С.

13.1. Оперативный контроль погрешности

Оперативный контроль погрешности выполняют в одной серии с КХА рабочих проб.

Образцами для контроля являются реальные пробы воздуха рабочей зоны. Объем отобранной для контроля пробы должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике. После отбора пробы экстракт с фильтра делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы - . Вторую часть разбавляют соответствующим растворителем в два раза и снова делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза - . Во вторую часть делают добавку анализируемого компонента (X) до концентрации исходной рабочей пробы () (общая концентрация не должна превышать верхнюю границу диапазона измерения) и анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой - . Результаты анализа исходной рабочей пробы - , рабочей пробы, разбавленной в два раза - , и рабочей пробы, разбавленной в два раза с добавкой - , получают по возможности в одинаковых условиях, т.е. их получает один аналитик с использованием одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.

Решение об удовлетворительной погрешности принимают при выполнении условия:

, где

- результат анализа рабочей пробы;

- результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза;

- результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой анализируемого компонента;

Х - величина добавки анализируемого компонента;

К - норматив оперативного контроля погрешности.

К = 0,0058 + 0,18 С ()

13.2. Оперативный контроль воспроизводимости

, где

- результат анализа рабочей пробы;

- результат анализа этой же пробы, полученной в другой лаборатории или в этой же, но с другим аналитиком и с использованием другого набора мерной посуды и других партий реактивов;

D - допустимые расхождения между результатами анализа одной и той же пробы.

D = 0,049 + 0,21 С ()

При превышении норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива D, выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля и устраняют их.

14. Нормы затрат времени на анализ

Для проведения серии анализов из 6 проб требуется 2 ч 30 мин.

Главный государственный
санитарный врач Российской Федерации,
Первый заместитель Министра
здравоохранения Российской Федерации

Г.Г. Онищенко

Откройте актуальную версию документа прямо сейчас

Получить бесплатный доступ

Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.