Методические указания МУК 4.1.0.492-96 "Измерение концентраций изопропанольного сольвата сульфоксида бензилпенициллина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в воздухе рабочей зоны" (утв. Государственным комитетом санитарно-эпидемиологического надзора РФ, заместителем Главного государственного санитарного врача РФ 8 июня 1996 г.)

Методические указания МУК 4.1.0.492-96
"Измерение концентраций изопропанольного сольвата сульфоксида бензилпенициллина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в воздухе рабочей зоны"
(утв. Государственным комитетом санитарно-эпидемиологического надзора РФ, заместителем Главного государственного санитарного врача РФ 8 июня 1996 г.)

Дата введения - с момента утверждения

М. м. 410,49

Изопропанольный сольват сульфоксида бензилпенициллина - кристаллическое вещество бежевого цвета с запахом, характерным для производных пенициллина. Плохо растворим в воде, метиловом и этиловом спиртах. Хорошо растворим в водных растворах кислот и щелочей. Разглагается при нагревании свыше 80°С.

В воздухе находится в виде аэрозоля.

Обладает общетоксическим и раздражающим действием.

ОБУВ в воздухе 0,5 .

Характеристика метода

Метод основан на использовании высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением УФ-детектора.

Отбор проб проводится с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения изопропанольного сольвата сульфоксида бензилпенициллина в хроматографируемом объеме пробы 0,025 мкг.

Нижний предел измерения изопропанольного сольвата сульфоксида бензилпенициллина в воздухе 0,25 (при отборе 12 л воздуха).

Диапазон измеряемых концентраций изопропанольного сольвата сульфоксида бензилпенициллина в воздухе от 0,25 до 5 .

Определению не мешает присутствие карбенициллина.

Суммарная погрешность измерения не превышает %.

Время выполнения измерения, включая отбор пробы, около 40 минут.

Приборы, аппаратура, посуда

Жидкостный хроматограф
Хроматографическая колонка длиной 120 мм, внутренним диаметром 2 мм, заполненная сорбентом "Сепарон SSX " с размером зерен 6,0 мкм (Чехия)
Электроаспиратор ЭА-1	ОСТ 95.10052-84
Фильтродержатель
Колбы мерные, вместимостью 100 мл	ГОСТ 1770-74
Пипетки, вместимостью 1, 10 мл	ГОСТ 20292-74
Пробирки с пришлифованными пробками, вместимостью 10 мл	ГОСТ 10515-75

Реактивы, растворы, материалы

Изопропанольный сольват сульфоксида бензилпенициллина, согласно паспорту
Метанол очищенный
Метанол очищенный получают из метанола технического, путем ректификации	ТУ 2222-78 Е
Ректификационная колонна длиной 550 мм и внутренним диаметром 20 мм, флегмовое число 5
Насадка - спиральки Левина из нержавеющей стали (2х2х0,2 мм). Основную фракцию отбирают при температуре 64,5°С
Натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный, (динатрийфосфат)	ТУ 4172-76
Калий фосфорнокислый однозамещенный, (калий дифосфат)	ТУ 4198-75
0,05 М раствор динатрийфосфата готовят растворением 17,90 г натрия фосфорно-кислого двузамещенного 12-водного в воде в мерной колбе вместимостью 1 л
0,05 М раствор калий дифосфата готовят растворением 6,77 г калия фосфорно-кислого однозамещенного в воде в мерной колбе вместимостью 1 л
0,05 М фосфатный буфер (рН 7,0) готовят смешивая 610 мл 0,05 М раствора динатрийфосфата и 390 мл 0,05 М раствор калийдифосфата
Фосфатный буфер устойчив при хранении в холодильнике в течение месяца
Элюент: метанол - 0,05 М фосфатный буфер (рН 7,0), 1:2

Стандартный раствор N 1 с концентрацией изопропанольного сольвата сульфоксида бензилпенициллина 100 мкг/мл готовят растворением 0,01 г вещества в элюенте в мерной колбе вместимостью 100 мл.

Стандартный раствор N 2 с концентрацией изопропанольного сольвата сульфоксида бензилпенициллина 25 мкг/мл готовят соответствующим разбавлением стандартного раствора N 1 элюентом.

Растворы устойчивы при хранении в холодильнике в течение недели.

Фильтры АФА-ВП-10 ТУ 85-743-80

Отбор пробы воздуха

Воздух с объемным расходом 2 л/мин аспирируют через фильтр АФА-ВП-10. Для определения 0,5 ОБУВ достаточно отобрать 12 л воздуха. Пробы можно хранить в закрытых сосудах в холодильнике в течение месяца.

Подготовка к измерению

Хроматографическая колонка промышленного изготовления.

Градуировочные растворы с концентрацией изопропанольного сольвата сульфоксида бензилпенициллина от 0,5 до 10 мкг/мл готовят соответствующим разбавлением стандартного раствора N 2. Растворы устойчивы в течение 3 суток.

Из каждого градуировочного раствора отбирают по 50 мкл и вводят в испаритель хроматографа через самоуплотняющуюся мембрану.

На полученной хроматограмме измеряют площади пиков и строят градуировочный график, выражающий зависимость площади пиков () от содержания изопропанольного сольвата сульфоксида бензилпенициллина в хроматографируемом объеме пробы (мкг).

Построение градуировочного графика необходимо проводить не менее, чем по 6 точкам, выполняя по 5 параллельных измерений для каждого инжектируемого объема. Проверку градуировочного графика следует проводить при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в месяц.

Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

Температура термостата колонки	20°С
Скорость подачи элюента: метанол - 0,05 М фосфатный буфер (рН 7,0), 1:2	100 мкл/мин
Длина волны УФ-детектора	200 нм
Скорость движения диаграммной ленты	3 мм/мин
Чувствительность детектора	0,4
Диапазон измерения самописца	100 мВ
Объем вводимой пробы	50 мкл
Время удерживания изопропанольного сольвата сульфоксида бензилпенициллина	7 мин 38 с
Элюирующий объем	750 мкл
Эффективность колонки по изопропанольному сольвату сульфоксиду бензилпенициллину	1100 тт

Проведение измерения

Фильтр с отобранной пробой помещают в пробирку с пришлифованной пробкой, добавляют 6 мл элюента и оставляют на 15 минут при комнатной температуре и периодическом перемешивании. Степень десорбции с фильтра 98,5%.

50 мкл полученного раствора вводят в хроматограф. Хроматографирование анализируемого раствора проводят в тех же условиях по отношению к тому же элюенту, что и при построении градуировочного графика.

Количественное определение содержания изопропанольного сольвата сульфоксида бензилпенициллина в хроматографируемом объеме проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

Расчет концентрации

Концентрацию изопропанольного сольвата сульфоксида бензилпенициллина (С) в воздухе (в ) вычисляют по формуле:

, где

а - содержание изопропанольного сольвата сульфоксида бензилпенициллина в хроматографируемом объеме пробы, найденное по градуировочному графику, мкг;

в - общий объем анализируемого раствора, мл;

б - объем пробы, взятой для хроматографирования, мл;

V - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, л (см. приложение 1).

И. о. Председателя Госкомсанэпиднадзора России, заместитель Главного государственного санитарного врача Российской Федерации

Е.Н. Беляев