Методические указания МУК 4.1.0.499-96 "Измерение концентраций мексамина хлоргидрата и мексамина основания методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в воздухе рабочей зоны" (утв. Государственным комитетом санитарно-эпидемиологического надзора РФ, заместителем Главного государственного санитарного врача РФ 8 июня 1996 г.)

Методические указания МУК 4.1.0.499-96
"Измерение концентраций мексамина хлоргидрата и мексамина основания методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в воздухе рабочей зоны"
(утв. Государственным комитетом санитарно-эпидемиологического надзора РФ, заместителем Главного государственного санитарного врача РФ 8 июня 1996 г.)

Дата введения - с момента утверждения

М. м. 190,24

Мексамин основание (5-метокситриптамин) - кристаллическое вещество светлокоричневого цвета. Хорошо растворим в метиловом и этиловом спиртах, в органических растворителях, в т. ч. хлороформе и ацетонитриле, а также в водных растворах кислот. Слабо растворим в воде. Температура плавления - 120-121°С .

М. м. 226,50

Мексамин хлоргидрат (5-метокситриптамин хлоргидрат) - кристаллическое вещество белого или светлокоричневого цвета. Растворим в метиловом и этиловом спиртах, в органических растворителях, в т. ч. хлороформе и ацетонитриле. Хорошо растворим в воде. Температура плавления - 242-244°С .

В воздухе находятся в виде аэрозолей.

Обладают общетоксическим действием.

ОБУВ в воздухе - 0,1 .

Характеристика метода

Метод основан на использовании высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением УФ-детектора.

Отбор проб проводится с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения мексамина основания в хроматографируемом объеме пробы (10 мкл) - 0,1 мкг, суммы мексамина хлоргидрата и мексамина основания в хроматографируемом объеме пробы (50 мкл) - 0,005.

Нижний предел измерения мексамина основания и мексамина хлоргидрата в воздухе - 0,05 (при отборе 100 л воздуха).

Диапазон измеряемых концентраций мексамина основания и мексамина хлоргидрата в воздухе - от 0,05 до 1 .

Измерению не мешает наличие 5-метокситриптамин-2-карбоновой кислоты.

Суммарная погрешность измерения не превышает %.

Время выполнения анализа, включая отбор пробы, - около 40 мин.

Приборы, аппаратура, посуда

Микроклоночный жидкостной хроматограф "Милихром" или другие модели с УФ-детектором
Хроматографическая колонка N 1 длиной 120 мм, внутренним диаметром 2 мм, заполненная сорбентом "Силасорб SPH " с размером зерен 6,0 мкм (Чехия)
Хроматографическая колонка N 2 длиной 120 мм, внутренним диаметром 2 мм, заполненная сорбентом "Силасорб CN" с размером зерен 7,0 мкм (Чехия)
Электроаспиратор ЭА-1	ОСТ 95.10052-84
Фильтродержатель
Колбы мерные, вместимостью 100 мл	ГОСТ 1770-74
Пипетки вместимостью 1 и 10 мл	ГОСТ 20292-74
Пробирки с пришлифованными пробками, вместимостью 10 мл	ГОСТ 10515-75
Роторный испаритель	ТУ 25-11-97-74
Колбы грушевидные для вакуумной перегонки, вместимостью 25-30 мл	ГОСТ 9737-70

ГАРАНТ:

Межгосударственным Советом по стандартизации, метрологии и сертификации 21 октября 1993 г. взамен ГОСТ 9737-70 с 1 января 1995 г. принят ГОСТ 9737-93

Реактивы, растворы и материалы

Мексамин хлоргидрат, фармакопейный
Мексамин основание, фармакопейный
Кислота ортофосфорная, х. ч., 2%-ный раствор	ГОСТ 6552-58
Кислота уксусная ледяная, х. ч., 1%-ный раствор	ГОСТ 61-75
Калий фосфорно-кислый однозамещенный	ТУ 4198-75
Ацетонитрил очищенный, ч.	ТУ 6-09-3534-82
Ацетонитрил очищенный получают из технического ацетонитрила чистого путем ректификации с предварительной химической обработкой, которая заключается в кипячении растворителя с обратным холодильником в присутствии перманганата калия из расчета 1 г перманганата калия на 1 л растворителя. Кипячение проводится до полного перехода перманганата калия в двуокись марганца. Перед ректификацией осадок двуокиси марганца отделяют путем фильтрации через фильтр Шотта N 4 Ректификационная колонна длиной 550 мм и внутренним диаметром 20 мм, флегмовое число 5. Насадка - спиральки Левина из нержавеющей стали (2х2х0,2 мм) Основную фракцию отбирают при температуре 81,6°С (атмосферное давление) в пределах колебаний °С
Гексан очищенный
Гексан очищенный получают из гексана, х. ч. путем ректификации. Ректификационная колонна длиной 550 мм и внутренним диаметром 20 мм, флегмовое число 5. Насадка - спиральки Левина из нержавеющей стали (2 х 2 х 0,2 мм). Основную фракцию отбирают при температуре 69°С (атмосферное давление) в пределах колебаний °С	ТУ 6-09-3375-78
Этанол (спирт этиловый) очищенный
Этанол очищенный получают из спирта этилового ректификованного путем ректификации. Ректификационная колонна длиной 550 мм и внутренним диаметром 20 мм, флегмовое число 5. Насадка - спиральки Левина из нержавеющей стали (2х2х0,2 мм). Основную фракцию отбирают при температуре 78,3°С (атмосферное давление) в пределах колебаний °С 0,1 М фосфатный буфер (рН 2,5) готовят в мерной колбе, вместимостью 100 мл 1,36 г калия фосфорно-кислого однозамещенного помещают в колбу, добавляют 10-20 мл дистиллированной воды, затем 0,1 мл 2% ортофосфорной кислоты, доводят раствор до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают	ТУ 18300-72
Элюент 1: ацетонитрил - 0,1 М фосфатный буфер (рН 2,5), (1:9)
Элюент 2: гексан-этанол, 2:1
Растворитель 1:1% раствор уксусной кислоты
Растворитель 2: этанол

Стандартный раствор N 1 с концентрацией мексамина хлоргидрата 100 мкг/мл готовят растворением 0,01 г мексамина хлоргидрата в 1%-ном растворе уксусной кислоты в мерной колбе, вместимостью 100 мл.

Стандартный раствор N 2 с концентрацией мексамина хлоргидрата 5 мкг/мл готовят соответствующим разбавлением стандартного раствора N 1 раствором уксусной кислоты.

Стандартный раствор N 3 с концентрацией мексамина основания 200 мкг/мл готовят растворением 0,02 г мексамина основания в этаноле в мерной колбе, вместимостью 100 мл.

Растворы устойчивы при хранении в холодильнике в течение недели.

Фильтры АФА-ВП-10

ТУ 85-743-80

Отбор пробы воздуха

Воздух с объемным расходом 10 л/мин аспирируют раздельно через 2 независимых фильтра типа АФА-ВП-10 (фильтр N 1 и фильтр N 2). Для определения 1/2 ОБУВ достаточно аспирировать по 100 л воздуха через каждый фильтр. Пробы можно хранить в закрытых сосудах в холодильнике в течение месяца.

Подготовка к измерению

Хроматографические колонки промышленного изготовления.

Инжектируют в хроматограф, в хроматографическую колонку N 1 от 0,005 до 0,1 мкг мексамина хлоргидрата из стандартного раствора N 2.

Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

Температура термостата колонки	20°С
Скорость подачи элюента (ацетонитрил-0, М фосфатный буфер (рН 2,5) - 1:9	100 мкл/мин
Длина волны УФ-детектора	224 нм
Скорость движения диаграммной ленты	3 мм/мин
Чувствительность детектора	0, 1
Диапазон измерения самописца	100 мВ
Максимальный объем вводимой пробы	50 мкл
Время удерживания мексамина хлоргидрата и мексамина основания в фосфатном буфере	13 мин 45 с
Элюирующий объем	1375 мкл
Эффективность колонки по мексамина хлоргидрату и мексамина основанию в фосфатном буфере	2200 тт

Строят градуировочный график N 1, для чего на полученных хроматограммах измеряют площади пиков и вычерчивают градуировочную кривую, выражающую зависимость площади пиков () от совместного содержания мексамина хлоргидрата и мексамина основания в хроматографируемом объеме пробы (мкг).

Инжектируют в хроматограф в хроматографическую колонку N 2 от 0,1 до 2 мкг мексамина основания из стандартного раствора N 3.

Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

Температура термостата колонки	20°С
Скорость подачи элюента: гексан-этанол, 2:1	200 мкл/мин
Длина волны УФ-детектора	210 нм
Скорость движения диаграммной ленты	1,5 мм/мин
Чувствительность детектора	0,8
Диапазон измерения самописца	100 мВ
Максимальный объем вводимой пробы	10 мкл
Время удерживания мексамина основания	8 мин 45 с
Элюирующий объем	1750 мкл
Эффективность колонки по мексамина основанию	420 тт

Строят градуировочный график N 2, для чего на полученных хроматограммах измеряют площади пиков и вычерчивают градуировочную кривую, выражающую зависимость площади пиков () от содержания мексамина основания в хроматографируемом объеме пробы (мкг).

Построение градуировочных графиков необходимо проводить не менее чем по 6 точкам, выполняя по 5 параллельных измерений для каждого инжектируемого объема. Проверку градуировочного графика следует проводить при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в месяц.

Проведение измерения

Фильтр N 1 с отобранной пробой помещают в пробирку с пришлифованной пробкой, добавляют 5 мл 1%-ного раствора уксусной кислоты и оставляют на 15 мин при комнатной температуре и периодическом перемешивании. Степень десорбции с фильтра суммарного количества мексамина основания и мексамина хлоргидрата - 98,5%.

Хроматографирование полученного раствора N 1 проводят в тех же условиях по отношению к тому же элюенту, что и при построении градуировочного графика N 1.

Количественное определение суммарного содержания мексамина основания и мексамина хлоргидрата в хроматографируемых объемах проводят по предварительно построенному градуировочному графику N 1.

Фильтр N 2 с отобранной пробой помещают в пробирку с пришлифованной пробкой, добавляют 5 мл этанола и оставляют на 15 мин при комнатной температуре и периодическом перемешивании. Степень десорбции с фильтра суммарного количества мексамина основания - 97%.

Раствор переносят количественно в грушевидную колбу для перегонки под вакуумом и упаривают на роторном испарителе под вакуумом при температуре 35-40°С до постоянного веса. Сухой остаток растворяют в 0,5 мл элюента N 2.

Хроматографирование полученного раствора N 2 проводят в тех же условиях по отношению к тому же элюенту, что и при построении градуировочного графика N 2.

Количественное определение индивидуального содержания мексамина основания в хроматографируемых объемах проводят по предварительно построенному градуировочному графику N 2.

Расчет концентрация

Суммарную концентрацию мексамина основания и мексамина хлоргидрата С в воздухе (в ) вычисляют по формуле:

, где

а - суммарное содержание мексамина основания и мексамина хлоргидрата в хроматографируемом объеме пробы, найденное по соответствующему градуировочному графику, мкг;

б - объем пробы, взятой на хроматографирование, мл;

в - общий объем анализируемого раствора, мл;

V - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, л (см. приложение 1).

Концентрацию мексамина основания С в воздухе (в ) вычисляют по формуле:

, где

а - содержание мексамина основания в хроматографируемом объеме пробы, найденное по соответствующему градуировочному графику, мкг;

б - объем пробы, взятой на хроматографирование, мл;

в - общий объем анализируемого раствора, мл;

V - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, л (см. приложение 1).

И. о. Председателя Госкомсанэпиднадзора России, заместитель Главного государственного санитарного врача Российской Федерации

Е.Н. Беляев