Методические указания МУК 4.1.0.510-96 "Измерение концентраций 4-нитробензамидина хлоргидрата методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в воздухе рабочей зоны" (утв. Государственным комитетом санитарно-эпидемиологического надзора РФ, заместителем Главного государственного санитарного врача РФ 8 июня 1996 г.)

Методические указания МУК 4.1.0.510-96
"Измерение концентраций 4-нитробензамидина хлоргидрата методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в воздухе рабочей зоны"
(утв. Государственным комитетом санитарно-эпидемиологического надзора РФ, заместителем Главного государственного санитарного врача РФ 8 июня 1996 г.)

Дата введения - с момента утверждения

М. м. 201,62

4-Нитробензамидина хлоргидрата - белое кристаллическое вещество с кремовым цветом. Не растворим в воде. Растворим в ацетонитриле, метиловом, этиловом и изопропиловом спиртах.

В воздухе находится в виде аэрозоли.

Обладает общетоксическим и раздражающим действием.

ОБУВ в воздухе - 1 .

Характеристика метода

Метод основан на использовании высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением УФ-детектора.

Отбор проб проводится с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения 4-нитробензамидина хлоргидрата в хроматографируемом объеме пробы (60 мкл) - 0,06 мкг.

Нижний предел измерения концентрации 4-нитробензамидина хлоргидрата в воздухе - 0,5 (при отборе 10 л воздуха).

Диапазон измеряемых концентраций 4-нитробензамидина хлоргидрата в воздухе - от 0,5 до 10 .

Определению не мешает присутствие никотиновой кислоты, а также п- и м-нитробензойных кислот.

Суммарная погрешность измерения не превышает %.

Время выполнения анализа, включая отбор пробы, - около 50 мин.

Приборы, аппаратура, посуда

Микроколоночный жидкостной хроматограф "Милихром" или другие модели с УФ-детектором
Хроматографическая колонка длиной 120 мм, внутренним диаметром 2 мм, заполненная сорбентом "Сепарон SGX " с размером зерен 8,0 мкм (Чехия)
Весы аналитические ВЛР-200 или другие такого же класса	ГОСТ 19491-74
Микроскоп отсчетный типа МПБ-2	ТУ 3-3.824-78
Электроаспиратор ЭА-1	ОСТ 95.10052-84
Фильтродержатель	ТУ 95:7205-77
Колбы мерные, вместимостью 100 мл	ГОСТ 1770-74
Пипетки, вместимостью 2 мл	ГОСТ 20292-74
Градуированные пробирки с пришлифованными пробками, вместимостью 10 мл	ГОСТ 10515-75

ГАРАНТ:

Взамен ГОСТ 10515-75 постановлением Госстандарта СССР от 15 июля 1982 г. N 2670 с 1 января 1984 г. введен в действие ГОСТ 25336-82

Реактивы, растворы и материалы

4-Нитробензамидина хлоргидрат, содержание основного вещества не менее 92%	ПР 64-0105-18-88
Натрий фосфорно-кислый двузамещенный 12-водный, (динатрийфосфат)	ТУ 4172-76
Калий фосфорно-кислый однозамещенный (калий дифосфат)	ТУ 4198-75
0,067 М раствора динатрийфосфата готовят растворением 23,877 натрия фосфорно-кислого двузамещенного 12-водного в воде в мерной колбе, вместимостью 1 л
0,067 М раствора калийфосфата готовят растворением 9,078 калия фосфорно-кислого однозамещенного в воде в мерной колбе, вместимостью 1 л
0,067 М фосфатный буфер (рН 7,4) готовят смешивая 808 мл 0,067 М раствора динатрийфосфата и 192 мл 0,067 М раствор калийфосфата
Фосфатный буфер устойчив при хранении в холодильнике в течение месяца
Метанол (спирт метиловый), очищенный
Метанол очищенный получают из метанола путем ректификации. Ректификационная колонна длиной 550 мм и внутренним диаметром 20 мм, флегмовое число 5	ТУ 2222-78Е
Насадка - спиральки Левина из нержавеющей стали (2х2х0,2 мм)
Основную фракцию отбирают при температуре 64,5°С (атмосферное давление) в пределах колебаний °С
Элюент: 0,02 М фосфатный буфер (рН 7,4) - метанол, (1:4). Элюент используют свежеприготовленным

Стандартный раствор N 1 с концентрацией 4-нитробензамидина хлоргидрата 500 мкг/мл готовят растворением 0,05 г вещества в воде в мерной колбе вместимостью 100 мл.

Стандартный раствор N 2 с концентрацией 4-нитробензамидина хлоргидрата 20 мкг/мл готовят соответствующим разбавлением стандартного раствора N 1 водой.

Раствор устойчив при хранении в холодильнике в течение суток.

Фильтры АФА-ВП-10

ТУ 85-743-80

Отбор пробы воздуха

Воздух с объемным расходом 10 л/мин аспирируют через фильтр АФА-ВП-10. Для определения 1/2 ОБУВ достаточно отобрать 10 л воздуха. Пробы можно хранить в закрытых сосудах в холодильнике в течение месяца.

Подготовка к измерению

Хроматографические колонки промышленного изготовления.

Количественный анализ проводят методом абсолютной калибровки с использованием градуировочных растворов, которые готовят с концентрацией от 0,001 до 0,02 мкг/мкл путем соответствующего разбавления стандартного раствора N 2 водой.

Растворы используют в день приготовления.

Последовательно набирают в капилляр микродозатора по 60 мкл каждого из градуировочных растворов и инжектируют в хроматограф от 0,06 до 1,2 мкг 4-нитробензамидина.

Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

Скорость подачи элюента (0,02 М фосфатный буфер рН 7,4-метанол, 1:4)	100 мкл/мин
Длина волны УФ-детектора	254 нм
Скорость движения диаграммной ленты	0,6 мм/мин
Диапазон измерения детектора	0,4
Диапазон измерения самопишущего потенциометра	100 мВ
Максимальный объем вводимой пробы	60 мкл
Время удерживания 4-нитробензамидина хлоргидрата	16 мин
Элюирующий объем	1500 мкл
Эффективность колонки по 4-нитробензамидина хлоргидрату	600 тт

На полученной хроматограмме измеряют площади пиков, относящихся к 4-нитробензамидин хлоргидрату и строят градуировочную кривую, выражающую зависимость площади пиков () от содержания 4-нитробензамидина хлоргидрат в хроматографируемом объеме пробы (мкг).

Построение градуировочных графиков необходимо проводить не менее чем по 6 точкам, выполняя по 5 параллельных измерений для каждого инжектируемого объема. Проверку градуировочного графика следует проводить при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в месяц.

Проведение измерения

Фильтр с отобранной пробой помещают в пробирку с пришлифованной пробкой, добавляют 5 мл воды и оставляют на 15 мин при комнатной температуре и периодическом перемешивании. Степень десорбции с фильтра - 97,5%.

Инжектируют в хроматограф 60 мкл полученного раствора.

Хроматографирование анализируемого раствора проводят в тех же условиях по отношению к тому же элюенту, что и при построении градуировочного графика.

Количественное определение содержания 4-нитробензамидина хлоргидрата в хроматографируемом объеме проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

Расчет концентрации

Концентрацию п-нитрозобензамидина хлоргидрата С в воздухе (в ) вычисляют по формуле:

, где

а - содержание 4-нитробензамидина хлоргидрата в хроматографируемом объеме пробы, найденное по соответствующему градуировочному графику, мкг;

б - объем пробы, взятой на хроматографирование, мл;

в - общий объем анализируемого раствора, мл;

V - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, л (см. приложение 1).

И. о. Председателя Госкомсанэпиднадзора России, заместитель Главного государственного санитарного врача Российской Федерации

Е.Н. Беляев