Методические указания МУК 4.1.2698-10 "Измерение массовых концентраций 1,3-тиазол-5-илметил N-[(2S,3S,5S)-3-гидрокси-5[[(2R)-3-метил-2[[метил-[(2-пропан-2-ил-1,3-тиа зол-4-ил)метил]карбамоил]амино] бутаноил]амино]-1,6-дифенилгексан-2-ил]карбамата (ритонавир) в воздухе рабочей зоны методом спектрофотометрии" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ и Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 2 августа 2010 г.)

Методические указания МУК 4.1.2698-10
"Измерение массовых концентраций 1,3-тиазол-5-илметил N-[(2S,3S,5S)-3-гидрокси-5[[(2R)-3-метил-2[[метил-[(2-пропан-2-ил-1,3-тиазол-4-ил)метил]карбамоил]амино] бутаноил]амино]-1,6-дифенилгексан-2-ил]карбамата (ритонавир) в воздухе рабочей зоны методом спектрофотометрии"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ и Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 2 августа 2010 г.)

Дата введения: 1 октября 2010 г.

1. Общие положения

Настоящие методические указания устанавливают метод количественного химического анализа воздуха рабочей зоны для определения в нем ритонавира в диапазоне массовых концентраций 0,05-0,4 методом спектрофотометрии. Погрешности измерений соответствуют характеристикам, приведенным в табл. 1.

Методика аттестована в соответствии с требованиями ГОСТ Р 8.563-96 (с изменениями N 1, 2), ГОСТ Р ИСО 5725-2002. Свидетельство о государственной метрологической аттестации выдано ФГУП Всероссийским научно-исследовательским институтом метрологической службы Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии (N 2-10).

2. Характеристика вещества

2.1. Структурная формула

2.2. Эмпирическая формула:

2.3. Молекулярная масса: 720,94

2.4. Регистрационный номер CAS: 155213-67-5

2.5. Физико-химические свойства

Ритонавир - порошок белого или почти белого цвета (от белого до светло-рыжевато-коричневого), имеет горький металлический привкус, с температурой плавления 119-123°С. Ритонавир легко растворим в метаноле, этаноле, хлористом метилене, растворим в изопропаноле, слабо растворим в ацетонитриле, практически нерастворим в воде.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.6. Токсикологическая характеристика

Ритонавир - противовирусный препарат, ингибитор репликации вируса иммунодефицита, малоопасное вещество при введении в желудок, практически не токсичен при введении в брюшную полость, оказывает слабое местное раздражающее действие на кожу, обладает слабой функциональной кумулятивной активностью.

Ритонавир обладает широким спектром побочных и отдаленных эффектов.

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) ритонавира в воздухе рабочей зоны 0,1 .

3. Метрологические характеристики методики выполнения измерений

При соблюдении всех регламентных условий и проведении анализа в точном соответствии с прописью методика обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций ритонавира с метрологическими характеристиками, не превышающими значений, представленных в табл. 1 (при доверительной вероятности Р = 0,95).

Таблица 1

Метрологические характеристики методики выполнения измерений

Диапазон измерений массовой концентрации ритонавира,	Показатель точности (границы относительной погрешности) , % при Р = 0,95	Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), , %	Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), , %	Предел повторяемости, r, %, Р = 0,95, n = 2	Критическая разность для результатов анализа, полученных в двух лабораториях, , % ()
От 0,05 до 0,4 вкл.	25	6	9	17	22

4. Метод измерений

Измерения массовых концентраций ритонавира выполняют методом спектрофотометрии.

Метод определения основан на способности растворов ритонавира в спирте этиловом 96% поглощать УФ-излучение.

Измерение проводят при длине волны 220 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр АФА-ВП-20.

Нижний предел измерения содержания ритонавира в анализируемом объеме пробы - 60 мкг.

Нижний предел измерения массовой концентрации ритонавира в воздухе - 0,05 (при отборе 1200 воздуха).

Метод специфичен в условиях производства капсул ритонавира. Определению не мешают вспомогательные вещества, входящие в состав лекарственной формы: спирт этиловый 99,5%, полиоксил масла касторового, кислота олеиновая, бутилгидрокситолуол.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы.

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Спектрофотометр Specord M-40, Carl Zeiss.	N 9457-84 в Государственном реестре средств измерений
Весы лабораторные ВЛА-200	ГОСТ 24104-2001
Аспирационное устройство, ПУ-3Э/220 ЗАО "ХИМКО"	N 14531-03 в Государственном реестре средств измерений
Фильтродержатели,	ТУ 95.72.05-77
Фильтры АФА-ВП-20	ТУ 95-743-80
Колбы мерные 2-25-2	ГОСТ 1770-74
Пипетки вместимостью 1-1-2-1, 1-1-2-2, 1-1-2-5, 1-1-2-10	ГОСТ 29227-91
Пробирки мерные с пришлифованными пробками, П-2-10-0,1ХС	ГОСТ 1770-74
Бюксы стеклянные СВ 19/19, СВ 24/10	ГОСТ 25336-82
Палочки стеклянные	ГОСТ 25336-82
Воронки химические, В-30-50 ХС	ГОСТ 25336-82
Кюветы кварцевые с толщиной оптического слоя 10 мм
Секундомер	ГОСТ 5072-79
Дистиллятор	ТУ 61-1-721-79

5.2. Реактивы

Ритонавир с содержанием основного вещества не менее 97% в пересчете на сухое вещество, (ЛСР-009810/09-285-009)
Спирт этиловый 96%,	ГОСТ Р 51723-2001

Допускается применение иных средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими и метрологическими характеристиками и квалификацией не хуже приведенных в данном разделе.

6. Требования безопасности

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76, ГОСТ 12.1.005-88.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91. Должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-90. Необходимо провести обучение работающих правилам безопасности труда согласно ГОСТ 12.0.004-90.

6.3. При выполнении измерений с использованием спектрофотометра соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

6.4. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07.

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой спектрофотометрического анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедур погрешности анализа.

8. Условия измерений

8.1. Процессы приготовления растворов и подготовку проб к анализу проводят в стандартных условиях при температуре воздуха ()°С, атмосферном давлении 84-106 кПа и относительной влажности воздуха не более 80%.

8.2. Выполнение измерений на спектрофотометре проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовку спектрофотометра, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

9.1. Приготовление растворов

9.1.1. Основной стандартный раствор ритонавира.

Основной стандартный раствор ритонавира с массовой концентрацией 1000 готовят растворением () г ритонавира в спирте этиловом 96% в мерной колбе, вместимостью 25 .

Раствор устойчив в течение месяца при хранении в холодильнике.

9.2. Подготовка прибора

Подготовку спектрофотометра проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.

9.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость оптической плотности раствора от массы ритонавира, устанавливают по шести сериям растворов из пяти параллельных определений в каждой серии согласно табл. 2.

Таблица 2

Растворы для установления градуировочной характеристики при определении ритонавира

Номер градуировочного раствора	Объем основного стандартного раствора ритонавира с массовой концентрацией 1000 ,	Объем спирта этилового 96%,	Содержание ритонавира в градуировочном растворе, мкг
1	0,0	10,0	0,0
2	0,06	10,0	60,0
3	0,1	10,0	100,0
4	0,15	10,0	150,0
5	0,2	10,0	200,0
6	0,3	10,0	300,0
7	0,48	10,0	480,0

Градуировочные растворы устойчивы в течение суток.

Градуировочные растворы наносят на фильтры. Для этого на фильтры АФА-ВП-20, помещенные в химические бюксы, наносят при помощи пипетки вместимостью 1 основной градуировочный раствор ритонавира с массовой концентрацией 1000 в соответствии с табл. 2. Для добавления спирта этилового используют пипетку вместимостью 10 . Фильтры подсушивают, приливают по 5 спирта этилового 96% и оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтр тщательно отжимают, растворы сливают в пробирку вместимостью 10 . Фильтры повторно обрабатывают 5 спирта этилового 96%, оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой, затем тщательно отжимают и удаляют. Растворы объединяют и доводят спиртом этиловым 96% объем до 10 .

Оптическую плотность полученных градуировочных растворов измеряют в кювете с толщиной поглощающего слоя 10. мм при длине волны 220. нм по отношению к раствору сравнения, не содержащему определяемого вещества (табл. 2, раствор N 1).

Строят градуировочную характеристику: на ось ординат наносят значения оптических плотностей градуировочных растворов, на ось абсцисс - соответствующие им величины содержания ритонавира в мкг.

9.4. Контроль стабильности градуировочной характеристики

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят не реже 1 раза в квартал, а также при смене реактивов и изменении условий анализа (после ремонта и поверки прибора). Один раз в год градуировочную характеристику устанавливают заново.

Для контроля стабильности готовят три градуировочных раствора по п. 9.3 (в начале, в середине и в конце диапазона измерений) и анализируют в точном соответствии с прописью методики.

Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие:

, где

, - значение оптической плотности ритонавира в образце для контроля измеренное и найденное по градуировочной характеристике соответственно;

- норматив контроля, , где

- границы относительной погрешности, %, (табл. 1).

Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то выполняют повторное измерение этого образца с целью исключения результата, содержащего грубую ошибку.

Если градуировочная характеристика не стабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для установления градуировочной характеристики, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики её устанавливают заново.

9.5. Отбор проб воздуха

Отбор проб проводят с учетом требований ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны" и Руководства Р 2.2.2006-05 (прилож. 9) "Общие методические требования к организации и проведению контроля содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны", раздел 2 - контроль соответствия максимальным ПДК.

Воздух с объемным расходом 80 аспирируют через два параллельных канала аспирационного устройства, через фильтр АФА-ВП-20, помещенный в фильтродержатель, снабженный металлической сеткой.

Для измерений 1/2 ОБУВ ритонавира отбирают через каждый канал 1200 воздуха. Отобранные пробы могут храниться в бюксах в течение недели.

10. Выполнение измерения

Фильтр с отобранной пробой с помощью пинцета переносят в бюкс и заливают 5,0 спирта этилового 96%. Оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтр отжимают, раствор сливают в пробирку вместимостью 10 , фильтр повторно заливают 5,0 спирта этилового 96%, оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтр отжимают, раствор сливают в ту же пробирку и объем доводят спиртом этиловым 96% до 10 . Оптическую плотность раствора измеряют аналогично градуировочным растворам по отношению к раствору сравнения, который готовят одновременно с анализируемой пробой, используя чистый фильтр.

Количественное определение содержания ритонавира (в мкг) в анализируемом объеме раствора пробы проводят по предварительно построенной градуировочной характеристике.

11. Вычисление результатов измерений

Массовую концентрацию ритонавира в воздухе рабочей зоны С, , вычисляют по формуле:

, где

а - содержание ритонавира в анализируемом объеме раствора пробы, найденное по градуировочной характеристике, мкг;

- объем воздуха, отобранный для анализа приведенный к стандартным условиям (прилож. 1).

За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости:

, где

, - результаты параллельных определений массовой концентрации ритонавира в воздухе, ;

r - значение предела повторяемости, % (табл. 1).

Если условие не выполняется, выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями МВИ.

12. Оформление результатов измерения

Результат количественного химического анализа представляют в виде:

, при Р = 0,95, где

- среднее арифметическое значение результатов n определений, признанных приемлемыми, .

- границы относительной погрешности измерений, % (табл. 1).

Если полученный результат измерений ниже нижней (выше верхней) границы диапазона измерений, то производят следующую запись в журнале: "массовая концентрация ритонавира менее 0,05 (более 0,4 )".

13. Контроль результатов измерений

13.1. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости

Проверку приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости проводят:

а) при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями;

б) при проверке совместимости результатов измерений, полученных при сличительных испытаниях (при проведении аккредитации лабораторий и инспекционного контроля).

Для проведения проверки приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует пробы, оставленные на хранение.

Приемлемость результатов измерений, полученных в двух лабораториях оценивают сравнением разности этих результатов с критической разностью по формуле:

, где

, - средние значения массовой концентрации, полученные в первой и второй лабораториях, .

- значение критической разности, % (табл. 1).

Если критическая разность не превышена, то приемлемы оба результата измерений, проводимых двумя лабораториями, и в качестве окончательного результата используют их среднеарифметическое значение. Если критическая разность превышена, то выполняют процедуры, изложенные в ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 (5.3.3).

При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 (5.3.4).

13.2. Контроль качества результатов измерений при реализации методики в лаборатории

Контроль качества результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002, используя контроль стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения повторяемости по 6.2.2 ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 и показателя правильности по 6.2.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002. Проверку стабильности осуществляют с применением контрольных карт Шухарта.

Периодичность контроля стабильности результатов выполнения измерений регламентируют в Руководстве по качеству лаборатории.

Рекомендуется устанавливать контролируемый период так, чтобы количество результатов контрольных измерений было от 20 до 30.

При неудовлетворительных результатах контроля, например, при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.

14. Нормы затрат времени на анализ

Для проведения серии анализов из 6 проб требуется 2 ч 30 мин (без учёта времени отбора пробы).

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко