Методические указания МУК 4.1.268-96 "Хроматографическое измерение концентраций В-экзотоксина (турингина-1) в воздухе рабочей зоны" (утв. Государственным комитетом санитарно-эпидемиологического надзора РФ, заместителем Главного государственного санитарного врача РФ 8 июня 1996 г.)

Методические указания МУК 4.1.268-96
"Хроматографическое измерение концентраций В-экзотоксина (турингина-1) в воздухе рабочей зоны"
(утв. Государственным комитетом санитарно-эпидемиологического надзора РФ, заместителем Главного государственного санитарного врача РФ 8 июня 1996 г.)

Дата введения - с момента утверждения

В-экзотоксин - (турингин-1) - биологический препарат применяется в сельском и лесном хозяйстве против колорадского жука, паутинного клеща, хлопковых совок и др. вредителей растений.

Представляет собой порошок от коричневого до светло-бежевого цвета, растворим в воде и не растворим в органических растворителях. Действующим началом турингина является В-экзотоксин, содержание которого в препарате в среднем - %. В воздухе находится в виде аэрозоля.

ПДК в воздухе - 1 .

Характеристика метода

Определение основано на хроматографическом разделении препарата, в тонком слое силикагеля (силуфол-UV 254) с последующим спектрометрическим измерением концентраций.

Отбор проб производится с концентрированием на фильтр АФА-ВП-20.

Нижний предел измерения в анализируемой пробе - 3 мкг.

Нижний предел измерения в воздухе - 0,06 (при отборе 45 л воздуха).

Диапазон измеряемых концентраций в воздухе - от 0,06 до 2 .

Граница суммарной погрешности измерения %.

Определению не мешает присутствие полупродуктов производства экзотоксина.

Реактивы, растворы, материалы

Экзотоксин, x. ч.
Пропанол, х. ч.	ГОСТ ТУ 6-09-783-76
Ацетон, ч.	ГОСТ 2603-79
Дистиллированная вода

Основной стандартный раствор N 1 готовят растворением 100 мг экзотоксина в 100 мл дистиллированной воды, получают раствор, содержащий 1 мг/мл экзотоксина.

Стандартный раствор N 2 готовят путем разбавления основного стандартного раствора N 1 или растворением 10 мг экзотоксина в 10 мл дистиллированной воды получают раствор, содержащий 0,1 мг/мл или 100 мг/мл экзотоксина.

Срок хранения растворов - 5 суток.

Приготовление рабочих растворов с содержанием экзотоксина 15,05; 50, 100, 300, 500 мкг/мл - (см. табл.).

Приборы, аппаратура, посуда

Аспирационное устройство с реометром	ТУ 64-1-862-77
Фильтры АФА-ВП-20
Фильтродержатели
Фарфоровые чашки диаметром 4-5 см
Баня водяная
Колбы мерные, вместимостью 50 и 100 мл	ГОСТ 1770-74
Микропипетки, вместимостью 0,1-0,2 мл	ГОСТ-20292-74
Микрошприц вместимостью 1 мл
Пластинка для тонкослойной хроматографии размером 150х150 мм (ЧСФР) "Силуфол"-254
Хроматографическая пластинка "Силуфол"
Химические стаканы, вместимостью 50 мл
Хроматографическая камера размером 150x200 или 105x165 мм	ГОСТ 1056-63
Хроматоскоп
Лампа УФ-света ( = 254 мм)
Центрифужные пробирки
Центрифуга на 3000 об/мин, МЛР-1
Пипетки, вместимостью 1, 5, 10 мл	ГОСТ 20-292-74
Спектрофотометр СФ-26 М

Отбор пробы воздуха

Воздух со скоростью 15 л/мин аспирируют через фильтр АФА-ВП-20, закрепленный в фильтродержателе.

Для определения 1/2 ПДК достаточно отобрать 6 л воздуха. После отбора пробы фильтры складывают загрязненной стороной внутрь, помещают в пакеты и доставляют в лабораторию.

Срок хранения отобранных проб - 5 суток.

Условия анализа

Фильтры с отобранной пробой помещают в химический стакан, затем промывают дважды 2-3 мл дистиллированной воды тщательно отжимают фильтр стеклянной палочкой и сливают в фарфоровую чашку, которую устанавливают на водяную баню. Выпаривают содержимое до сухого остатка и растворяют в 0,2-0,3 мл воды и всю пробу количественно с помощью микропипетки наносят на стартовую линию хроматографической пластинки в одну точку с помощью микропипетки или микрошприца так, чтобы диаметр пятна не превышал 0,5 см. Остаток в чашке еще 2 раза тщательно смывают по 0,1 мл дистиллированной водой и наносят в центр того же пятна. На стартовую линию той же пластинки в различные точки, расположенные друг от друга на расстоянии 2 см, наносят по 0,2 мл рабочих растворов, содержащих 15, 50, 100, 300 и 500 мкг/мл экзотоксина, что соответствует 3; 10; 20; 60; 100 мкг препарата. Пластинку с нанесенными растворами помещают в хроматографическую камеру, которую за 30 мин до хроматографирования заливают смесью: пропанол, ацетон, вода в соотношении 15:5:1. После поднятия фронта подвижного растворителя на 10 см, пластинку вынимают и оставляют на несколько мин до его испарения. Затем под хроматоскопом обнаруживают зоны локализации препаратов, проявляющиеся в виде сине-фиолетовых пятен на голубом фоне с величиной Rf = 0,78 при использовании пластинок "Силуфол''-UV 254. Под УФ-светом ( = 254 нм) зоны локализации препарата проявляется в виде желтоватых пятен на светлом фоне с величиной Rf = 0,68.

Расчет концентраций

Количественное определение проводят путем сравнения площадей пятен стандартных растворов и проб. Между количеством препарата и площадью его пятен на пластинке существует прямая пропорциональная зависимость.

При большом содержании препарата в пробе следует использовать для анализа меньшую часть анализируемого экстракта.

Содержание экзотоксина (С) в воздухе () вычисляют по формуле:

, где

а - количество экзотоксина, найденное в анализируемом объеме пробы, мкг;

в - общий объем пробы, мл;

б - объем пробы, взятой для анализа, мл;

V - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, л (см. приложение 1).

Количественная оценка результатов анализа методом УФ-спектрофотометрирования

Полученные на хроматограмме пятна пробы и стандарта снимают осторожно скальпелем и высыпают слой сорбента в центрифужные пробирки. Затем в пробирки добавляют по 4 мл дистиллированной воды и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5-10 мин.

Недостаточный прозрачный раствор осторожно пипеткой отсасывают в прямоугольные кварцевые кюветы с L = 10 мм и измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 240 нм.

Количественное определение экзотоксина в пробе проводят по калибровочному графику.

Для построения калибровочного графика готовят шкалу стандартов в соответствии с таблицей.

Таблица

Шкала стандартов

N стандарта	Стандартный р-р N 1, 1 мл - 100 мкг	Стандартный р-р N 2, 1 мл - 1000 мкг	Дистиллированная вода, мл	Рабочие р-ры, мкг/мл	Содержание экзотоксина в анализируемой пробе (0,2 мл), мкг
1	0	-	0	0	0
2	1,5	-	8,5	15	3
3	5,0	-	5,0	50	10
4	-	1	9,0	100	20
5	-	3	7,0	300	60
6	-	5	5,0	500	100

Стандартные растворы наносят на чистую хроматографическую пластинку и обрабатывают аналогично пробам.

Измеряют величину оптической плотности стандартных растворов на спектрофотометре при длине волны 240 мм и по полученным средним данным из пяти определений строят калибровочный график "количество препарата (мкг) - оптическая плотность".

Концентрацию экзотоксина () воздуха (X) вычисляют по формуле:

, где

А - количество экзотоксина, найденное в анализируемом объеме пробы по калибровочному графику, мкг;

V - анализируемый объем воздуха, приведенного к нормальным условиям, л.

И.о. Председателя Госкомсанэпиднадзора России - заместитель Главного государственного санитарного врача Российской Федерации

Г.Г. Онищенко