Методические указания МУК 4.1.0.336-96 "Измерение концентрации холестерина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в воздухе рабочей зоны" (утв. Государственным комитетом санитарно-эпидемиологического надзора РФ, заместителем Главного государственного санитарного врача РФ 8 июня 1996 г.)

Методические указания МУК 4.1.0.336-96
"Измерение концентрации холестерина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в воздухе рабочей зоны"
(утв. Государственным комитетом санитарно-эпидемиологического надзора РФ, заместителем Главного государственного санитарного врача РФ 8 июня 1996 г.)

Дата введения: с момента утверждения

M. м. 386,64

Холестерин (10--(холест-5-ен--ол) - кристаллическое вещество белого цвета. Хорошо растворим в диоксане и гексане. Растворим в изопропиловом спирте. Не растворим в воде, метиловом и этиловом спиртах. 149°С.

В воздухе находится в виде аэрозоля.

Обладает общетоксическим действием.

ОБУВ в воздухе - 1 .

Характеристика метода

Метод основан на использовании высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением УФ-детектора.

Отбор проб производится с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения холестерина в хроматографируемом объеме пробы (50 мкл) - 0,2 мкг.

Нижний предел измерения холестерина в воздухе (при отборе 40 л воздуха) - 0,5 .

Диапазон измеряемых концентраций холестерина в воздухе от 0,5 до 10 .

Определению не мешает динитробензонат эргокальциферола.

Суммарная погрешность измерения не превышает %.

Время выполнения измерения, включая отбор пробы, - около 40 мин.

Приборы, аппаратура, посуда

Микроколоночный жидкостный хроматограф "Милихром" или другие модели с УФ-детектором
Хроматографическая колонка длиной 120 мм внутренним диаметром 2 мм, заполненная сорбентом "Силасорб 600" с размером зерен 7,0 мкм (ЧСФР)
Электроаспиратор ЭА-1	ОСТ 95.10052-84
Фильтродержатель
Колбы мерные, вместимостью 100 мл	ГОСТ 1770-74
Пипетки, вместимостью 1, 10 мл	ГОСТ 20292-74
Пробирки с пришлифованными пробками, вместимостью 10 мл	ГОСТ 10515-75

ГАРАНТ:

Взамен ГОСТ 10515-75 постановлением Госстандарта СССР от 15 июля 1982 г. N 2670 с 1 января 1984 г. введен в действие ГОСТ 25336-82

Реактивы, растворы, материалы

Холестерин, фармакопейный
Гексан, х. ч.	ТУ 6-09-3375-78

Гексан очищенный получают из гексана путем ректификации. Ректификационная колонка длиной 550 мм и внутренним диаметром 20 мм, флегмовое число 5. Насадка - спиральки Левина из нержавеющей стали (2 х 2 х 0,2 мм). Основную фракцию отбирают при температуре 69°С (атмосферное давление) в пределах колебаний °С.

Изопропанол, х. ч.

ТУ 9805-76

Изопропанол очищенный получают из изопропанола путем ректификации. Ректификационная колонка длиной 550 мм и внутренним диаметром 20 мм, флегмовое число 5. Насадка - спиральки Левина из нержавеющей стали (2 х 2 х 0,2 мм). Основную фракцию отбирают при температуре 82,4°С (атмосферное давление) в пределах колебаний °С.

Элюент: гексан-изопропанол (50:1).

Основной стандартный раствор с концентрацией холестерина 200 мкг/мл готовят растворением 0,02 г вещества в элюенте в мерной колбе вместимостью 100 мл.

Раствор устойчив при хранении в холодильнике в течение недели.

Фильтры аналитические стекловолокнистые ТУ 8-ЮП-1-77

Отбор пробы воздуха

Воздух с объемным расходом 10 л/мин аспирируют через аналитический стекловолокнистый фильтр. Для определения 0,5 ОБУВ достаточно отобрать 40 л воздуха.

Пробы можно хранить в закрытых сосудах в холодильнике в течение месяца.

Подготовка к измерению

Хромотографическая колонка промышленного изготовления.

Инжектируют в хроматограф от 0,2 до 4 мкг из основного стандартного раствора.

Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

температура термостата колонки	+20°С;
скорость подачи элюента гексан: изопропанол (50:1)	200 мкл/мин;
длина волны УФ-дефектора	212 нм;
скорость движения диаграммной ленты	6 мм/мин;
чувствительность детектора	0,2-0,8;
диапазон измерения самописца	100 мВ;
максимальный объем вводимой пробы	50 мкл;
время удерживания холестерина	5 мин 15 с;
элюирующий объем	1050 мкл;
эффективность колонки по холестерину	4600 тт.

На полученной хроматограмме измеряют площади пиков и строят градуировочную кривую, выражающую зависимость площади пиков () от содержания холестерина в хроматографируемом объеме пробы (мкг).

Построение градуировочного графика необходимо проводить не менее чем по 6 точкам, выполняя по 5 параллельных измерений для каждого инжектируемого объема. Проверку градуировочного графика следует проводить при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в месяц.

Проведение измерения

Фильтр с отобранной пробой помещают в пробирку с пришлифованной пробкой, добавляют 5 мл элюента и оставляют на 15 мин при комнатной температуре, периодически перемешивая. Степень десорбции с фильтра 96,5%.

Хроматографирование анализируемого раствора проводят в тех же условиях по отношению к тому же элюенту, что и при построении градуировочного графика.

Количественное определение содержания холестерина в хроматографируемом объеме проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

Расчет концентрации

Концентрацию холестерина "С" в воздухе () вычисляют по формуле:

, где

а - содержание холестерина в хроматографируемом объеме, найденное по градуировочному графику, мкг;

б - объем раствора пробы, взятой для анализа, мл;

в - общий объем анализируемого раствора, мл;

V - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, л (см. приложение 1).

И. о. Председателя Госкомсанэпиднадзора России - заместитель Главного государственного санитарного врача Российской Федерации

Г.Г. Онищенко