22. Хроматографическое разделение веществ экстракта пробы методом тонкослойной хроматографии в незакрепленном слое оксида алюминия 2-ой степени активности по Брокману

22. Хроматографическое разделение веществ экстракта пробы методом тонкослойной хроматографии в незакрепленном слое оксида алюминия 2-ой степени активности по Брокману

Стеклянную пластинку (9 на 12 см), предварительно обработанную н-гсксаном, устанавливают на специальную подставку, насыпают оксид алюминия фракции с размерами частиц 0,05-0,08 мм. С помощью металлического валика адсорбент равномерно раскатывают по пластинке до получения слоя толщиной 0,5-1,0 мм.

Исходный экстракт пробы в объеме 0,25-0,50 количественно наносится на пластинку в виде узкой стартовой линии на расстоянии 15 мм от края. Чтобы избежать большого расширения стартовой полосы повторные нанесения делают только после полного улетучивания растворителя из предыдущего нанесения. Для выравнивания стартовой линии после полного нанесения экстракта пластину 2-3 раза помещают на несколько секунд в хроматографическую камеру с диэтиловым эфиром или подвижной фазой, дожидаясь каждый раз, пока фронт растворителя продвинется до верхнего края стартовой полосы, после каждого раза пластину подсушивают на воздухе до полного улетучивания растворителя. На расстоянии не менее 15 мм от полосы справа наносят в качестве свидетеля каплю раствора БП с концентрацией 0,05 .

Пластинку помещают под углом в 30 град. в герметически закрытую камеру, в которую заранее заливают подвижную фазу. Пластинку в камере устанавливают так, чтобы жидкость на 5 мм не доходила до линии старта. В качестве подвижной фазы используется: гексан - бензол (10:1).

Подвижная фаза пропускается через пластинку трижды: на 1/3 пластинки, на 2/3 пластинки, на всю пластику. Перед каждым последующим прохождением подвижной фазы пластинку подсушивают в тяге. После окончания фракционирования пластину освещают ультрафиолетовым светом и иглой разделяют на зоны, отличающиеся по цвету флуоресценции. Зона БП определяется по свидетелю. Обычно БП содержится в одной зоне, но следует проверить его содержание и в рядом расположенных зонах.

Оксид алюминия анализируемых зон снимают тонкой металлической лопаточкой в стеклянные колонки с расширенной верхней частью и с тампоном из чистой ваты в нижней части или в воронке с пористым фильтром, вставленные в пробирки. Элюирование БП с сорбента проводят диэтиловым эфиром. Контролем для прекращения элюирования является отсутствие флуоресценции у вытекающего растворителя под действием УФ-света. Пробирки помещают в водяную баню с температурой не выше 50°С и испаряют диэтиловый эфир, добавляя 1 октана, чтобы БП оставался всегда в растворителе. После испарения эфира добавляют еще 1 октана.