Методические указания МУК 4.1.2250-07 "Измерение массовых концентраций (+-)-цис-1-Ацетил-4-[4-[[2-(2,4-дихлорфенил)-2-(1Н-имидазол-1-илметил)-1, 3-диоксолан-4-ил]метокси]фенил]пиперазина (КЕТОКОНАЗОЛ) в воздухе рабочей зоны спектрофотометрическим методом" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 17 августа 2007 г.)

4.1. Методы контроля. Химические факторы

Методические указания МУК 4.1.2250-07
"Измерение массовых концентраций ()-цис-1-Ацетил-4-[4-[[2-(2,4-дихлорфенил)-2-(1Н-имидазол-1-илметил)-1,3-диоксолан-4-ил]метокси]фенил]пиперазина (КЕТОКОНАЗОЛ) в воздухе рабочей зоны спектрофотометрическим методом"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 17 августа 2007 г.)

Дата введения: с момента утверждения

1. Область применения

Настоящие методические указания устанавливают методику количественного химического анализа воздуха рабочей зоны для определения в нем кетоконазола спектрофотометрическим методом в диапазоне массовых концентраций от 0,25 до 5,0 .

2. Характеристика вещества

2.1. Структурная формула

2.2. Эмпирическая формула

2.3. Молекулярная масса 531,44

2.4. Регистрационный номер CAS 65277-42-1

2.5. Физико-химические свойства

Кетоконазол - белый или почти белый кристаллический порошок с температурой плавления выше (148-150)°С. Практически нерастворим в воде и диэтиловом эфире, растворим в этиловом спирте 96%, 0,1 н водном растворе соляной кислоты, хорошо растворим в дихлорметане, хлороформе, метаноле.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.6. Токсикологическая характеристика

Кетоконазол - противогрибковый препарат из группы производных имидазола. Действие препарата связано с нарушением биосинтеза эргостерина, триглицеридов и фосфолипидов, необходимых для образования клеточной мембраны грибов. Кетоконазол оказывает раздражающее действие на кожу, не обладает способностью проникать через неповрежденные кожные покровы, проявляет умеренную кумулятивную активность.

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) кетоконазола в воздухе рабочей зоны 0,5 .

3. Метрологические характеристики

При соблюдении всех регламентируемых условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышают значений, приведенных в таблице 1, для соответствующих диапазонов измерений.

Таблица 1

Метрологические характеристики методики

Диапазон определяемых массовых концентраций кетоконазола в воздухе рабочей зоны,	Наименование метрологической характеристики
	Доверительные границы суммарной погрешности (точности) %, Р = 0,95	Доверительные границы неисключенной систематической погрешности (правильности), %	Доверительные границы случайной составляющей погрешности (прецизионности), %	Норматив оперативного контроля погрешности, (повторяемости) К(r), , (Р = 0,90; n = 3)	Норматив оперативного контроля воспроизводимости D(R), , (Р = 0,95; n = 2)
0,25-5,0	17	13,7	8,8	-0,0047 + 0,12 С	-0,033 + 0,37 С

4. Метод измерений

Измерения массовых концентраций кетоконазола выполняют методом спектрофотометрии.

Метод определения основан на способности растворов кетоконазола в 0,1 н водном растворе соляной кислоты поглощать УФ-излучение.

Измерение проводят при длине волны 222 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр АФА-ХП-10.

Нижний предел измерения содержания кетоконазола в анализируемом объеме пробы - 10 мкг.

Нижний предел измерения массовой концентрации кетоконазола в воздухе - 0,25 (при отборе 40 воздуха).

Метод специфичен в условиях производства таблеток кетоконазола. Определению не мешают аэросил, крахмал картофельный, лактоза, поливинилпирролидон низкомолекулярный, магния стеарат.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы.

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Спектрофотометр. Specord М-40, Carl Zeiss
Весы лабораторные ВЛА-200	ГОСТ 24104-2001
Аспирационное устройство, ПУ-4Э ЗАО "ХИМКО", N 14531-03 в Государственном реестре средств измерений
Фильтродержатели	ТУ 95.72.05-77
Фильтры АФА-ХП-10	ТУ 95-743-80
Цилиндры мерные 3-500	ГОСТ 1770-74
Колбы мерные 2-100-2, 2-1000-2	ГОСТ 1770-74
Пипетки 1-1-2-1, 1-1-2-2, 1-1-2-5, 1-1-2-10	ГОСТ 29227-91
Пробирки мерные с пришлифованными пробками, П-2-10-14/23 ХС	ГОСТ 1770-74
Стаканы химические В-1-25	ГОСТ 25336-82
Бюксы стеклянные, СВ 19/9, СВ 24/10	ГОСТ 25336-82
Фильтры бумажные обеззоленные "белая лента", диаметр 5,5 см	ТУ 6-09-1678-77
Палочки стеклянные	ГОСТ 25336-82
Ворон# Воронки химические, В-30-50 ХС	ГОСТ 25336-82
Кюветы кварцевые с толщиной оптического слоя 10 мм
Секундомер	ГОСТ 5072-79
Дистиллятор	ТУ 61-1-721-79

5.2. Реактивы

Кетоконазол с содержанием основного вещества не менее 98,00% в пересчете на сухое вещество,
Фармакопея США, том ХХ1У, 2000 г.
Вода дистиллированная	ГОСТ 6709-72
Кислота соляная, 0,1 н водный раствор, фиксанал	ТУ 6-09-2540-87

Допускается применение иных средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими и метрологическими характеристиками и квалификацией не хуже приведенных в данном разделе.

6. Требования безопасности

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и необходимо иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-90.

6.3. При выполнении измерений с использованием спектрофотометра соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой спектрофотометрического анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы оперативного контроля при проведении процедур контроля погрешности анализа.

8. Условия измерений

8.1. Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в стандартных условиях при температуре воздуха ()°С, атмосферном давлении 84-106 кПа и относительной влажности воздуха не более 80%.

8.2. Выполнение измерений на спектрофотометре проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовку спектрофотометра, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

9.1. Приготовление растворов

9.1.1. Основной стандартный раствор кетоконазола с массовой концентрацией 500 готовят растворением 0,0500 г кетоконазола в 0,1 н водном растворе соляной кислоты в мерной колбе, вместимостью 100 . Раствор устойчив в течение месяца при хранении в холодильнике.

9.1.2. Рабочий стандартный раствор кетоконазола N 1 с массовой концентрацией 100 готовят разбавлением 20 основного стандартного раствора 0,1 н водным раствором соляной кислоты в мерной колбе, вместимостью 100 . Раствор устойчив в течение двух недель при хранении в холодильнике.

9.1.3. Рабочий стандартный раствор кетоконазола N 2 с массовой концентрацией 20 готовят разбавлением 20 стандартного раствора N 1 0,1 н водным раствором соляной кислоты в мерной колбе, вместимостью 100 . Раствор устойчив в течение недели при хранении в холодильнике.

9.2. Подготовка прибора

Подготовку спектрофотометра проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.

9.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость оптической плотности раствора от массы кетоконазола, устанавливают по шести сериям растворов из пяти параллельных определений в каждой серии согласно табл. 2.

Таблица 2

Растворы для установления градуировочной характеристики при определении кетоконазола

Номер градуировочного раствора	Объем рабочего стандартного раствора кетоконазола N 1 с массовой концентрацией 100 ,	Объем рабочего стандартного раствора кетоконазола N 2 с массовой концентрацией 20 ,	Объем 0,1 н водного раствора соляной кислоты,	Содержание кетоконазола в градуировочных растворах, мкг
1	0,0	0,0	10,0	0,0
2	0,0	0,5	9,5	10,0
3	0,0	1,0	9,0	20,0
4	0,0	1,5	8,5	30,0
5	0,5	0,0	9,5	50,0
6	1,0	0,0	9,0	100,0
7	2,0	0,0	8,0	200,0

Градуировочные растворы устойчивы в течение суток.

Подготовленные градуировочные растворы перемешивают и через 20 мин измеряют оптические плотности растворов в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 222 нм по отношению к раствору сравнения, не содержащему определяемого вещества (табл. 2, раствор 1). Строят градуировочную характеристику: на ось ординат наносят значения оптических плотностей градуировочных растворов, на ось абсцисс - соответствующие им содержания кетоконазола в мкг.

Проверка градуировочной характеристики проводится 1 раз в квартал или в случае использования новой партии реактивов, оборудования и после ремонта или поверки прибора.

9.4. Отбор проб воздуха

Отбор проб следует проводить с учетом требований ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны" и Руководства Р 2.2.2006-05 (прилож. 9, обязательное) "Общие методические требования к организации и проведению контроля содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны", п.2 контроль соответствия максимальным ПДК.

Воздух с объемным расходом 4,0 аспирируют через фильтр АФА-ХП-10, помещенный в фильтродержатель. Для измерения 1/2 ОБУВ следует отобрать 40 воздуха. Пробы можно хранить в бюксах с пришлифованными крышками в течение трех дней.

10. Выполнение измерения

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический стакан, вместимостью 25 , приливают 5 0,1 н водного раствора соляной кислоты и оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтр тщательно отжимают, раствор сливают в другой стакан. Фильтр повторно обрабатывают 5 того же растворителя, снова тщательно отжимают и удаляют. Оба раствора последовательно фильтруют на химической воронке через бумажный фильтр "белая лента" в мерную пробирку с пришлифованной пробкой, вместимостью 10 . Степень десорбции вещества с фильтра 97%.

Оптическую плотность получаемых анализируемых растворов измеряют в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 222 нм по отношению к раствору сравнения, используя фильтр АФА-ХП-10. Раствор сравнения необходимо предварительно профильтровать через фильтр "белая лента".

Количественное определение содержания кетоконазола проводят по предварительно построенной градуировочной характеристике.

Примечание: фильтрование растворов анализируемых проб проводится для удаления нерастворимых в воде вспомогательных веществ, входящих в состав таблеток кетоконазола.

11. Вычисление результатов измерений

Массовую концентрацию кетоконазола (С, ) в воздухе рабочей зоны вычисляют по формуле:

, где

а - количество вещества, найденное в анализируемом объеме раствора по градуировочной характеристике, мкг;

- объём воздуха, отобранный для анализа () и приведенный к стандартным условиям (прилож. 1);

K - степень десорбции вещества с фильтра, К = 0,97.

В случае, если полученный результат анализа ниже нижней границы диапазона измерения, то результат следует указать: массовая концентрация кетоконазола менее 0,25 .

12. Оформление результатов анализа

Результат количественного анализа представляют в виде:

, , (Р = 0,95), где:

- характеристика погрешности (точности) по табл. 1, %.

В случае, если кетоконазол в воздухе рабочей зоны ниже нижней (выше верхней) границы диапазона измерений, то производят следующую запись в журнале: "массовая концентрация кетоконазола в воздухе рабочей зоны менее 0,25 (более 5,0 ).

13. Контроль результатов измерений

13.1. Контроль правильности

При проведении контроля правильности следует использовать концентрации стандартных растворов, которые входят в серию растворов, используемых при построении градуировочной характеристики.

Образцом для контроля правильности является фильтр АФА-ХП-10, на который наносят 0,1-0,5 стандартного раствора кетоконазола N 1 в 0,1 н водном растворе соляной кислоты. Принятое опорное значение содержания кетоконазола в образце для контроля, аттестованное по процедуре приготовления (, мкг) составляет 10-50 мкг.

Проводят анализ образца в соответствии с разделом 10 данной методики. Результат контрольной процедуры признают удовлетворительным при выполнении условия:

, где:

- значение результата контрольного измерения, мкг;

LCL - нижний предел контроля правильности ( мкг);

UCL - верхний предел контроля правильности ( мкг);

- принятое опорное значение содержания кетоконазола в образце для контроля, мкг.

При отрицательном результате контроля правильности выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.

13.2. Контроль повторяемости

Оперативный контроль погрешности выполняют в одной серии с КХА рабочих проб. Образцами для контроля являются реальные пробы воздуха рабочей зоны. Объем отобранной для контроля пробы должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике. После отбора пробы экстракт с фильтра делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы - . Вторую часть разбавляют соответствующим растворителем в два раза и снова делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза - . Во вторую часть делают добавку анализируемого компонента (X) до массовой концентрации исходной рабочей пробы () (общая концентрация не должна превышать верхней границы диапазона измерения) и анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой - . Результаты анализа исходной рабочей пробы - , рабочей пробы, разбавленной в два раза - , и рабочей пробы, разбавленной в два раза с добавкой - , получают по возможности в одинаковых условиях, т.е. их получает один аналитик с использованием одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.

Решение об удовлетворительной погрешности принимают при выполнении условия:

, где:

- результат анализа рабочей пробы,

- результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза,

- результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой анализируемого компонента,

Х - величина добавки анализируемого компонента,

K(r), - норматив оперативного контроля погрешности.

K(r) = -0,019 + 0,12 С,

K(r) = -0,0047 + 0,12 С, .

13.3. Контроль промежуточной прецизионности

Образцом для контроля прецизионности служит экстракт реальной пробы воздуха рабочей зоны, полученный при обработке фильтра.

Выполняют два измерения в условиях промежуточной прецизионности с участием одной лаборатории. Пробы анализируют в точном соответствии с прописью методики, максимально варьируя условия проведения анализа (время между измерениями, оборудование и его калибровка, партии реактивы, оператор и др.) при соблюдении вышеуказанных условий.

, где:

- результат анализа рабочей пробы,

- результат анализа этой же пробы, полученный в другой лаборатории или в этой же, но другим аналитиком с использованием другого набора мерной посуды и других партий реактивов,

D(R), - допустимые расхождения между результатами анализа одной и той же пробы. D(R), = -0,13 + 0,37 С,

D(R), = -0,033 + 0,37 С,

При превышении норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива D, выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля и устраняют их.

14. Нормы затрат времени на анализ

Для проведения серии анализов из 6 проб требуется 1 ч 40 мин.