Методические указания МУК 4.1.1645-03 "Спектрофотометрическое измерение массовых концентраций 3-(2-аминоэтил)-1Н-индол-5-ола гександиоата (1:1) (серотонина адипинат - 5-окситриптамина адипинат) в воздухе рабочей зоны" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29 июня 2003 г.)

4.1. Методы контроля. Химические факторы

Методические указания МУК 4.1.1645-03
"Спектрофотометрическое измерение массовых концентраций 3-(2-аминоэтил)-1Н-индол-5-ола гександиоата (1:1) (серотонина адипинат - 5-окситриптамина адипинат) в воздухе рабочей зоны"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ РФ 29 июня 2003 г.)

Дата введения: с момента утверждения

1. Область применения

Настоящие методические указания устанавливают количественный спектрофотометрический анализ воздуха рабочей зоны на содержание серотонина адипината в диапазоне массовых концентраций 0,01-0,10 .

2. Характеристика веществ

2.1. Структурная формула.

2.2. Эмпирическая формула .

2.3. Молекулярная масса 322,37.

2.4. Регистрационный номер CAS 16031-83-7.

2.5. Физико-химические свойства.

Серотонина адипинат - белый кристаллический порошок с кремоватым оттенком, температурой плавления 178-179°С. Хорошо растворим в воде, плохо растворим в этиловом и метиловом спиртах.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.6. Токсикологическая характеристика.

Серотонина адипинат (5-окситриптамина адипинат) - производное индолилалкиламинов, биогенный амин, регулирует процессы жизнедеятельности организма путем взаимодействия со специфическими серотониновыми рецепторами, применяется для лечения геморрагического синдрома, оказывает слабое раздражающее действие при контакте со слизистыми оболочками, обладает общетоксическим действием.

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) серотонина адипината в воздухе рабочей зоны 0,02 с пометкой "+" .

3. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций серотонина адипината с погрешностью, не превышающей %, при доверительной вероятности 0,95.

4. Метод измерений

Измерения массовых концентраций серотонина адипината выполняют методом спектрофотометрии.

Метод определения основан на способности растворов серотонина адипината в дистиллированной воде поглощать свет в ультрафиолетовой области спектра.

Измерение проводят при длине волны 220 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения содержания серотонина адипината в анализируемом объеме пробы - 30 мкг.

Нижний предел измерения массовой концентрации серотонина адипината в воздухе - 0,01 (при отборе 3 000 воздуха).

Метод специфичен в условиях производства субстанции серотонина адипината.

Определению не мешают пары этилового спирта, аэрозоль 5-(фенилметокси)-1Н-индол-3-этанамина и адипиновой кислоты.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы.

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Спектрофотометр Specord М-40, Carl Zeiss
Весы лабораторные ВЛА-200	ГОСТ 24104-88 Е

ГАРАНТ:

См. ГОСТ Р 53228-2008 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания", утвержденный приказом Ростехрегулирования от 25 декабря 2008 г. N 739-ст

Аспирационное устройство, ПУ-3Э/220 НПФ "НОРД-ЭКОЛОГИЯ ХИМАВТОМАТИКА"	ТУ ЕВКН 4.471.000
Фильтры АФА-ВП-20 с фильтродержателем	ТУ 52-01-367-80
Колбы мерные, вместимостью 25, 100	ГОСТ 1770-74 Е
Пипетки, вместимостью 1, 2, 5, 10	ГОСТ 29227-91
Пробирки мерные с пришлифованными пробками, вместимостью 10	ГОСТ 25336-82 Е
Бюксы химические с пришлифованными крышками, вместимостью 25	ГОСТ 25336-82 Е
Фильтры бумажные обеззоленные "белая лента" диаметром 5,5 см	ТУ 6-09-1678-77
Палочки стеклянные	ГОСТ 25336-82 Е
Воронки химические, диаметром 30 мм	ГОСТ 25336-82 Е
Кюветы с толщиной оптического слоя 10 мм
Дистиллятор	ТУ 61-1-721-79

5.2. Реактивы

Серотонина адипинат, с содержанием основного вещества не менее 99,0% в пересчете на сухое вещество	МРТУ-42 N 3851-70
Вода дистиллированная	ГОСТ 6709-72

Допускается применение иных средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими и метрологическими характеристиками и квалификацией, не хуже приведенных в разделе.

6. Требования безопасности

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.2. При работе с горючими и вредными веществами должны соблюдаться меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91.

6.3. При выполнении измерений с использованием спектрофотометра соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие обучение и имеющие навыки работы на спектрофотометре.

8. Условия измерений

8.1. Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха ()°С, атмосферном давлении 84-106 кПа и относительной влажности воздуха не более 80%.

8.2. Выполнение измерений на спектрофотометре проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовку спектрофотометра, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

9.1. Приготовление растворов

9.1.1. Основной стандартный раствор серотонина адипината с концентрацией 500  готовят растворением 0,0500 г вещества в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 100 . Раствор устойчив в течение недели при хранении в холодильнике.

9.1.2. Стандартный раствор серотонина адипината N 1 с концентрацией 100 готовят разбавлением 5 основного стандартного раствора дистиллированной водой в мерной колбе вместимостью 25 . Раствор используют свежеприготовленным.

9.1.3. Стандартный раствор серотонина адипината N 2 с концентрацией 60 готовят разбавлением 15 стандартного раствора N 1 дистиллированной водой в мерной колбе вместимостью 25 . Раствор используют свежеприготовленным.

9.2. Подготовка прибора

Подготовку спектрофотометра проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.

9.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость оптической плотности растворов от массы серотонина адипината, устанавливают по шести сериям растворов из пяти параллельных определений для каждой серии согласно табл. 1.

Таблица 1

Растворы для установления градуировочной характеристики при определении серотонина адипината

Номер стандарта	Стандартный раствор серотонина адипината N 1,	Стандартный раствор серотонина адипината N 2,	Дистиллированная вода,	Содержание серотонина адипината в градуировочном растворе, мкг
1	0,0	0,0	10,0	0,0
2	0,0	0,5	9,5	30,0
3	0,0	1,0	9,0	60,0
4	1,0	0,0	9,0	100,0
5	1,5	0,0	8,5	150,0
6	2,0	0,0	8,0	200,0
7	3,0	0,0	7,0	300,0

Градуировочные растворы устойчивы в течение часа.

Подготовленные градуировочные растворы перемешивают и через 20 мин измеряют оптическую плотность растворов в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 220 нм по отношению к раствору сравнения, не содержащему определяемого вещества.

Строят градуировочный график: на ось ординат наносят значения оптических плотностей градуировочных растворов, на ось абсцисс - соответствующие им содержания серотонина адипината в градуировочном растворе (мкг).

Проверку градуировочного графика проводят не реже одного раза в квартал, а также в случае использования новой партии реактивов, оборудования или после ремонта прибора.

9.4. Отбор проб воздуха

Воздух с объёмным расходом 200 аспирируют через фильтр АФА-ВП-20, помещенный в фильтродержатель. Для определения 1/2 ОБУВ серотонина адипината следует отобрать 3 000 воздуха. Отобранные пробы могут храниться в течение трех суток в пробирках с пришлифованными пробками.

10. Выполнение измерения

Фильтр с отобранной пробой переносят в бюкс химический с пришлифованной крышкой вместимостью 25 , приливают 5 дистиллированной воды и оставляют на 15 мин, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения серотонина адипината. Затем фильтр отжимают и повторно обрабатывают 5 дистиллированной воды. Фильтр снова тщательно отжимают стеклянной палочкой и удаляют. Оба раствора последовательно фильтруют на химической воронке через бумажный фильтр "белая лента" в мерную пробирку, вместимостью 10 , и доводят дистиллированной водой до 10 . Степень десорбции серотонина адипината с фильтра 98%.

Оптическую плотность анализируемых растворов измеряют в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 220 нм по отношению к раствору сравнения, который готовят одновременно и аналогично пробам, используя чистый фильтр.

Количественное определение содержания серотонина адипината проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

Примечание. Фильтрование растворов анализируемых проб проводится для удаления нерастворимых в дистиллированной воде веществ, которые участвуют в синтезе серотонина адипината.

11. Вычисление результатов измерения

Массовую концентрацию серотонина адипината (С, ) в воздухе вычисляют по формуле:

, где

а - содержание серотонина адипината в анализируемом объеме раствора пробы, найденное по градуировочному графику, мкг;

V- объём воздуха, отобранного для анализа () и приведенного к стандартным условиям (прилож. 1).

12. Оформление результатов анализа

Результат количественного анализа представляют в виде: , , Р = 0,95. Значение , , где: - характеристика погрешности.

13. Контроль погрешности методики КХА

Значения характеристики погрешности, норматива оперативного контроля погрешности и норматива оперативного контроля воспроизводимости приведены в табл. 2.

Таблица 2

Диапазон определяемых массовых концентраций серотонина адипината,	Наименование метрологической характеристики
	характеристика погрешности, , , Р = 0,95	норматив оперативного контроля погрешности, К, , (P = 0,90, m = 3)	норматив оперативного контроля воспроизводимости, D, , (P = 0,95, m = 2)
0,01-0,10	0,00031 + 0,19С	0,00044 + 0,20С	0,0012 + 0,29С

Метрологические характеристики приведены в виде зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе - С.

13.1. Оперативный контроль погрешности

Оперативный контроль погрешности выполняют в одной серии с КХА рабочих проб.

Образцами для контроля являются реальные пробы воздуха рабочей зоны. Объем отобранной для контроля пробы должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике. После отбора пробы экстракт с фильтра делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы - . Вторую часть разбавляют соответствующим растворителем в два раза и снова делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, - . Во вторую часть делают добавку анализируемого компонента (X) до массовой концентрации исходной рабочей пробы () - общая концентрация не должна превышать верхнюю границу диапазона измерения - и анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой - . Результаты анализа исходной рабочей пробы - , рабочей пробы, разбавленной в два раза, - и рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой - получают по возможности в одинаковых условиях, т.е. их получает один аналитик с использованием одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.

Решение об удовлетворительной погрешности принимают при выполнении условия:

, где

- результат анализа рабочей пробы;

- результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза;

- результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой анализируемого компонента;

Х - величина добавки анализируемого компонента;

К - норматив оперативного контроля погрешности

К = 0,00044 + 0,20С ().

13.2. Оперативный контроль воспроизводимости

Образцами для контроля являются реальные пробы воздуха рабочей зоны.

Объем отобранной для контроля пробы должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике. После отбора пробы экстракт с фильтра делят на две равные части и анализируют в точном соответствии с прописью методики, максимально варьируя условия проведения анализа, т.е. получают два результата анализа в разных лабораториях или в одной, используя при этом разные наборы мерной посуды, разные партии реактивов. Два результата анализа не должны отличаться друг от друга на величину допускаемых расхождений между результатами анализа:

, где

- результат анализа рабочей пробы;

- результат анализа этой же пробы, полученной в другой лаборатории или в этой же, но другим аналитиком с использованием другого набора мерной посуды и других партий реактивов;

D - допустимые расхождения между результатами анализа одной и той же пробы

D = 0,0012 + 0,29С ().

При превышении норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива D выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.

14. Нормы затрат времени на анализ

Для проведения серии анализов из 6 проб требуется 4 ч 30 мин.

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации, Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации

Г.Г. Онищенко