Методические указания МУК 4.1.1646-03 "Спектрофотометрическое измерение массовых концентраций 3-(2-аминоэтил)-5-(фенилметокси)-1Н-индол-2-карбоновой кислоты (5-бензилокситриптамин-2-карбоновая кислота) в воздухе рабочей зоны" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29 июня 2003 г.)

Методические указания МУК 4.1.1646-03
"Спектрофотометрическое измерение массовых концентраций 3-(2-аминоэтил)-5-(фенилметокси)-1Н-индол-2-карбоновой кислоты (5-бензилокситриптамин-2-карбоновая кислота) в воздухе рабочей зоны"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29 июня 2003 г.)

Дата введения: с момента утверждения

1. Область применения

Настоящие методические указания устанавливают количественный спектрофотометрический анализ воздуха рабочей зоны на содержание 3-(2-аминоэтил)-5-(фенилметокси)-1Н-индол-2-карбоновой кислоты в диапазоне массовых концентраций 0,5-5,0 .

2. Характеристика вещества

2.1. Структурная формула.

2.2. Эмпирическая формула .

2.3. Молекулярная масса 310,32.

2.4. Регистрационный номер CAS 54987-14-3.

2.5. Физико-химические свойства.

3-(2-Аминоэтил)-5-(фенилметокси)-1Н-индол-2-карбоновая кислота - кристаллический порошок песочно-кремового или бежевого цвета с температурой плавления 240-242°С. Нерастворим в воде, хлороформе, ацетоне, этилацетате, плохо растворим (0,9% при 20°С) в этиловом и метиловом спиртах, растворим в смеси этиловый спирт-1 н водный раствор серной кислоты в соотношении (1:1) по объёму.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.6. Токсикологическая характеристика.

3-(2-Аминоэтил)-5-(фенилметокси)-1Н-индол-2-карбоновая кислота - промежуточный продукт синтеза серотонина адипината, малоопасен при введении внутрь, практически нетоксичен при парентеральных путях поступления, оказывает слабое раздражающее действие на кожу, обладает кумулятивным, кожно-резорбтивным и общетоксическим действием.

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) 3-(2-аминоэтил)-5-(фенилметокси)-1Н-индол-2-карбоновой кислоты в воздухе рабочей зоны 1,0 .

3. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций 3-(2-аминоэтил)-5-(фенилметокси)-1Н-индол-2-карбоновой кислоты с погрешностью, не превышающей %, при доверительной вероятности 0,95.

4. Метод измерений

Измерения массовых концентраций 3-(2-аминоэтил)-5-(фенилметокси)-1Н-индол-2-карбоновой кислоты выполняют методом спектрофотометрии.

Метод определения основан на способности растворов 3-(2-аминоэтил)-5-(фенилметокси)-1Н-индол-2-карбоновой кислоты в смеси этиловый спирт-1 н водный раствор серной кислоты в соотношении (1:1) по объёму поглощать УФ-излучение.

Измерение проводят при длине волны 300 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения содержания 3-(2-аминоэтил)-5-(фенилметокси)-1Н-индол-2-карбоновой кислоты в анализируемом объеме пробы - 15,0 мкг.

Нижний предел измерения массовой концентрации 3-(2-аминоэтил)-5-(фенилметокси)-1Н-индол-2-карбоновой кислоты в воздухе - 0,5 (при отборе 30 воздуха).

Метод специфичен в условиях производства субстанции 3-(2-аминоэтил)-5-(фенилметокси)-1Н-индол-2-карбоновой кислоты.

Определению не мешают пары уксусной кислоты, этилового спирта, аэрозоль 3-[[4-(фенилметокси)фенил]гидразон]пиперидин-2,3-диона.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы, растворы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы, растворы.

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Спектрофотометр Specord М-40, Carl Zeiss
Весы лабораторные ВЛА-200	ГОСТ 24104-88Е

ГАРАНТ:

См. ГОСТ Р 53228-2008 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания", утвержденный приказом Ростехрегулирования от 25 декабря 2008 г. N 739-ст

Аспирационное устройство, модель 822	ГОСТ 2.6.01-86
Фильтродержатели	ТУ 95.72.05-77
Фильтры АФА-ХА-10	ТУ 95-743-80
Колбы мерные, вместимостью 25, 100, 500, 1 000	ГОСТ 1770-74Е
Колбы конические термостойкие, вместимостью 1 000	ГОСТ 1770-74 Е
Пипетки, вместимостью 1, 2, 5, 10	ГОСТ 29227-91
Пробирки мерные с пришлифованными пробками, вместимостью 10, 20	ГОСТ 25336-82Е
Палочки стеклянные	ГОСТ 25336-82Е
Баня водяная	ТУ 64-1-425-72
Кюветы с толщиной оптического слоя 10 мм
Цилиндры мерные, вместимостью 50, 500	ГОСТ 1770-74Е
Дистиллятор	ТУ 61-1-721-79

5.2. Реактивы, растворы

3-(2-Аминоэтил)-5-(фенилметокси)-1Н-индол-2-карбоновая кислота с содержанием основного вещества не менее 99,0% в пересчете на сухое вещество	МРТУ-42 N 3851-70
Этиловый спирт, 95%-й, ректификат	ГОСТ 5963-67
Серная кислота, хч, 1 н водный раствор	ГОСТ 4207-77
Дистиллированная вода	ГОСТ 6709-72

Допускается применение иных средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими и метрологическими характеристиками и квалификацией, не хуже приведенных в данном разделе.

6. Требования безопасности

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91.

6.3. При выполнении измерений с использованием спектрофотометра соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие обучение и имеющие навыки работы на спектрофотометре.

8. Условия измерений

8.1. Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха ()°С, атмосферном давлении 84-106 кПа и относительной влажности воздуха не более 80%.

8.2. Выполнение измерений на спектрофотометре проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовку спектрофотометра, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

9.1. Приготовление растворов

9.1.1. Основной стандартный раствор 3-(2-аминоэтил)-5-(фенил- метокси)-1Н-индол-2-карбоновой кислоты с концентрацией 200 готовят растворением 0,0200 г вещества в смеси этиловый спирт-1 н водный раствор серной кислоты в соотношении (1:1) по объёму при нагревании на водяной бане при температуре 40-45°С в течение 15 мин в мерной колбе вместимостью 100 . Раствор устойчив в течение недели при хранении в холодильнике.

9.1.2. Стандартный раствор N 1 с концентрацией 50 готовят разбавлением 25 основного стандартного раствора смесью этиловый спирт-1 н водный раствор серной кислоты в соотношении (1:1) по объёму в мерной колбе вместимостью 100 . Раствор устойчив в течение недели при хранении в холодильнике.

9.1.3. Стандартный раствор N 2 с концентрацией 30 готовят разбавлением 15 стандартного раствора N 1 смесью этиловый спирт-1 н водный раствор серной кислоты в соотношении (1:1) по объёму в мерной колбе вместимостью 25 . Раствор используют свежеприготовленным.

9.1.4. Раствор серной кислоты 1 н водный. В коническую термостойкую колбу вместимостью 1 000 , помещают 500 дистиллированной воды. Затем медленно и осторожно, при постоянном перемешивании, приливают 28 концентрированной серной кислоты (плотность 1,84). Раствор охлаждают, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 1 000 и доводят дистиллированной водой до 1 000 . Раствор устойчив в течение 30 суток.

ГАРАНТ:

Нумерация пунктов приводится в соответствии с источником

9.1.4. Смесь этиловый спирт-1 н водный раствор серной кислоты в соотношении (1:1) по объёму. Непосредственно перед употреблением в мерную колбу вместимостью 500 помещают 250 этилового спирта, прибавляют 1 н водный раствор серной кислоты до 500 и перемешивают.

9.2. Подготовка прибора

Подготовку спектрофотометра проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.

9.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость оптической плотности раствора от массы 3-(2-аминоэтил)-5-(фенилметокси)-1Н-индол-2-карбоновой кислоты, устанавливают по шести сериям растворов из пяти параллельных определений в каждой серии растворов для градуировки согласно табл. 1.

Таблица 1

Растворы для установления градуировочной характеристики при определении 3-(2-аминоэтил)-5-(фенилметокси)-1Н-индол-2-карбоновой кислоты

Номер стандарта	Стандартный раствор 3-(2-аминоэтил)-5-(фенилметокси)-1Н-индол-2-карбоновой кислоты N 1,	Стандартный раствор 3-(2-аминоэтил)-5-(фенилметокси)-1Н-индол-2-карбоновой кислоты N 2,	Смесь этиловый спирт-1 н водный раствор серной кислоты в соотношении (1:1) по объёму,	Содержание 3-(2-аминоэтил)-5-(фенил метокси)-1Н-индол-2-карбоновой кислоты в градуировочном растворе, мкг
1	0,0	0,0	10,0	0,0
2	0,0	1,0	9,0	15,0
3	0,0	2,0	8,0	30,0
4	1,0	0,0	9,0	50,0
5	1,5	0,0	8,5	75,0
6	2,0	0,0	8,0	100,0
7	3,0	0,0	7,0	150,0

Градуировочные растворы устойчивы в течение часа.

Подготовленные градуировочные растворы перемешивают и через 20 мин измеряют оптические плотности растворов в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 300 нм по отношению к раствору сравнения, не содержащему определяемого вещества. Строят градуировочный график: на ось ординат наносят значения оптических плотностей градуировочных растворов, на ось абсцисс - соответствующие им содержания 3-(2-аминоэтил)-5-(фенилметокси)-1Н-индол-2-карбоновой кислоты в мкг.

Проверка градуировочного графика проводится 1 раз в квартал или в случае использования новой партии реактивов, оборудования и после ремонта прибора.

9.4. Отбор проб воздуха

Воздух с объёмным расходом 10 аспирируют через фильтр АФА-ХА-10, помещенный в фильтродержатель. Для измерения 1/2 ОБУВ 3-(2-аминоэтил)-5-(фенилметокси)-1Н-индол-2-карбоновой кислоты следует отобрать 30 воздуха. Пробы хранят в бюксе химическом в сухом, защищенном от света месте при температуре не выше 20°С не более трех суток.

10. Выполнение измерения

Фильтр с отобранной пробой переносят в мерную пробирку с пришлифованной пробкой вместимостью 20 , приливают 5 смеси этиловый спирт-1 н водный раствор серной кислоты в соотношении (1:1) по объёму, помещают на водяную баню при температуре 40-50°С на 15 мин, периодически перемешивая для лучшего растворения 3-(2-аминоэтил)-5-(фенилметокси)-1Н-индол-2-карбоновой кислоты. Затем фильтр тщательно отжимают, повторно обрабатывают 5 смеси этиловый спирт-1 н водный раствор серной кислоты в соотношении (1:1) по объёму и помещают на водяную баню при температуре 40-50°С на 15 мин, периодически перемешивая. Фильтр снова тщательно отжимают стеклянной палочкой и удаляют. Оба раствора сливают в мерную пробирку вместимостью 10 и доводят смесью этиловый спирт-1 н водный раствор серной кислоты в соотношении (1:1) по объёму до 10 . Степень десорбции 3-(2-аминоэтил)-5-(фенилметокси)-1Н-индол-2-карбоновой кислоты с фильтра 97%.

Оптическую плотность анализируемых растворов измеряют в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 300 нм по отношению к раствору сравнения, который готовят одновременно и аналогично пробам, используя чистый фильтр.

Количественное определение содержания 3-(2-аминоэтил)-5-(фенилметокси)-1Н-индол-2-карбоновой кислоты проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

11. Вычисление результатов измерений

Массовую концентрацию 3-(2-аминоэтил)-5-(фенилметокси)-1Н-индол-2-карбоновой кислоты (С, ) в воздухе рабочей зоны вычисляют по формуле:

, где

а - содержание 3-(2-аминоэтил)-5-(фенилметокси)-1Н-индол-2-карбоновой кислоты в анализируемом объеме раствора пробы, найденное по градуировочному графику, мкг;

V - объём воздуха, отобранного для анализа () и приведенного к стандартным условиям (прилож. 1).

12. Оформление результатов анализа

Результат количественного анализа представляют в виде: , , Р = 0,95. Значение , , где - характеристика погрешности.

13. Контроль погрешности методики КХА

Значения характеристики погрешности, норматива оперативного контроля погрешности и норматива оперативного контроля воспроизводимости приведены в табл. 2.

Таблица 2

Диапазон определяемых массовых концентраций 3-(2-аминоэтил)-5-(фенилметокси)-1Н-индол-2-карбоновой кислоты,	Наименование метрологической характеристики
	характеристика погрешности, , , P = 0,95	норматив оперативного контроля погрешности, К, , (Р = 0,90, m = 3)	норматив оперативного контроля воспроизводимости, D, , (Р = 0,95, m = 2)
0,5-5,0	0,015 + 0,19С	0,022 + 0,20С	0,060 + 0,32С

Метрологические характеристики приведены в виде зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе - С.

13.1. Оперативный контроль погрешности

Оперативный контроль погрешности выполняют в одной серии с КХА рабочих проб.

Образцами для контроля являются реальные пробы воздуха рабочей зоны. Объем отобранной для контроля пробы должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике. После отбора пробы экстракт с фильтра делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы - . Вторую часть разбавляют соответствующим растворителем в два раза и снова делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, - . Во вторую часть делают добавку анализируемого компонента (X) до массовой концентрации исходной рабочей пробы () - общая концентрация не должна превышать верхней границы диапазона измерения - и анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой - . Результаты анализа исходной рабочей пробы - , рабочей пробы, разбавленной в два раза, - и рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой - получают по возможности в одинаковых условиях, т.е. их получает один аналитик с использованием одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.

Решение об удовлетворительной погрешности принимают при выполнении условия:

, где

- результат анализа рабочей пробы;

- результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза;

- результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой анализируемого компонента;

X - величина добавки анализируемого компонента;

К - норматив оперативного контроля погрешности

К = 0,022 + 0,20С ().

13.2. Оперативный контроль воспроизводимости

Образцами для контроля являются реальные пробы воздуха рабочей зоны. Объем отобранной для контроля пробы должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике. После отбора пробы экстракт с фильтра делят на две равные части и анализируют в точном соответствии с прописью методики, максимально варьируя условия проведения анализа, т.е. получают два результата анализа в разных лабораториях или в одной, используя при этом разные наборы мерной посуды, разные партии реактивов. Два результата анализа не должны отличаться друг от друга на величину допускаемых расхождений между результатами анализа:

, где

- результат анализа рабочей пробы;

- результат анализа этой же пробы, полученный в другой лаборатории или в этой же, но другим аналитиком с использованием другого набора мерной посуды и других партий реактивов;

D - допустимые расхождения между результатами анализа одной и той же пробы

D = 0,060 + 0,32С ().

При превышении норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива D, выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.

14. Нормы затрат времени на анализ

Для проведения серии анализов из 6 проб требуется 1 ч 30 мин.

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации, Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации

Г.Г. Онищенко