Методические указания МУК 4.1.1649-03 "Спектрофотометрическое измерение массовых концентраций 4-O-альфа-D-глюкопиранозил-D-глюкозы моногидрата (Д-мальтоза моногидрат; солодовый сахар) в воздухе рабочей зоны" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29 июня 2003 г.)

4.1. Методы контроля. Химические факторы

Методические указания МУК 4.1.1649-03
"Спектрофотометрическое измерение массовых концентраций 4-O--D-глюкопиранозил-D-глюкозы моногидрата (Д-мальтоза моногидрат; солодовый сахар) в воздухе рабочей зоны"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29 июня 2003 г.)

Дата введения: с момента утверждения

1. Область применения

Настоящие методические указания устанавливают количественный спектрофотометрический анализ воздуха рабочей зоны на содержание Д-мальтозы моногидрата в диапазоне массовых концентраций 5,0-25,0 .

2. Характеристика вещества

2.1. Структурная формула.

2.2. Эмпирическая формула .

2.3. Молекулярная масса 360,32.

2.4. Регистрационный номер CAS 6363-53-7.

2.5. Физико-химические свойства.

Д-мальтоза моногидрат - белый кристаллический порошок сладкого вкуса без запаха с температурой плавления 119-121°С (с разложением). Очень хорошо растворим в воде, слаборастворим в спирте, практически нерастворим в эфире.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.6. Токсикологическая характеристика.

Д-мальтоза моногидрат (солодовый сахар) - олигосахарид, практически нетоксичное и малоопасное вещество. При постоянном контакте вызывает кожные нарушения (экземы), декальцинирует зубную эмаль.

Предельно допустимая концентрация (ПДК) Д-мальтозы моногидрата в воздухе рабочей зоны 10,0 ; класс опасности - четвертый.

3. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций Д-мальтозы моногидрата с погрешностью, не превышающей %, при доверительной вероятности 0,95.

4. Метод измерений

Измерения массовой концентрации Д-мальтозы моногидрата выполняют методом спектрофотометрии.

Определение основано на взаимодействии Д-мальтозы моногидрата с антроном в кислой среде с образованием окрашенного в темно-зеленый цвет продукта реакции.

Измерение проводят при длине волны 630 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения содержания Д-мальтозы моногидрата в анализируемом объеме пробы - 20 мкг.

Нижний предел измерения массовой концентрации Д-мальтозы моногидрата в воздухе - 5 (при отборе 40 воздуха).

Метод специфичен в условиях производства инъекционной лекарственной формы препарата фосфоглив. Определению не мешает глицирризинат натрия, лецитин.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы, растворы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы и растворы.

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Спектрофотометр Specord М-40, Carl Zeiss
Весы лабораторные ВЛА-200	ГОСТ 24104-88Е

ГАРАНТ:

См. ГОСТ Р 53228-2008 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания", утвержденный приказом Ростехрегулирования от 25 декабря 2008 г. N 739-ст

Аспирационное устройство, модель 822	ГОСТ 2.6.01-86
Фильтродержатель	ТУ 95.72.05-77
Фильтры АФА-ВП-10	ТУ 95-743-80
Колбы мерные, вместимостью 25, 100	ГОСТ 1770-74Е
Пипетки, вместимостью 1, 2, 5, 10	ГОСТ 29227-91
Пробирки мерные с пришлифованными пробками, вместимостью 10	ГОСТ 25336-82Е
Стаканы химические, вместимостью 200	ГОСТ 25336-82Е
Фильтры бумажные обеззоленные "белая лента", диаметром 5,5 см	ТУ 6-09-1678-77
Воронки химические, диаметром 30 мм	ГОСТ 25336-82
Палочки стеклянные	ГОСТ 25336-82Е
Бюксы химические с пришлифованными крышками, вместимостью 25	ГОСТ 25336-82Е
Баня водяная	ТУ 64-1-425-72
Цилиндры мерные, вместимостью 10, 250, 1 000	ГОСТ 1770-74Е
Кюветы с толщиной оптического слоя 10 мм
Дистиллятор	ТУ 61-1-721-79

5.2. Реактивы, растворы

Д-мальтоза моногидрат	ТУ 6-09-2108-77
Вода дистиллированная	ГОСТ 6709-72
Серная кислота, хч, плотность 1,84	ГОСТ 4204-77
Антрон, ч, 0,06% раствор	ТУ 6-09-1570-77

Допускается применение иных средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими и метрологическими характеристиками и квалификацией, не хуже приведенных в разделе.

6. Требования безопасности

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91.

6.3. При выполнении измерений с использованием спектрофотометра соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие обучение и имеющие навыки работы на спектрофотометре.

8. Условия измерений

8.1. Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха ()°С, атмосферном давлении 84-106 кПа и относительной влажности воздуха не более 80%.

8.2. Выполнение измерений на спектрофотометре проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовка спектрофотометра, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

9.1. Приготовление растворов

9.1.1. Основной стандартный раствор Д-мальтозы моногидрата с концентрацией 500 готовят растворением 0,0500 г вещества в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 100 . Раствор устойчив в течение недели при хранении в холодильнике.

9.1.2. Стандартный раствор Д-мальтозы моногидрата N 1 с концентрацией 100  готовят разбавлением 5 основного стандартного раствора дистиллированной водой в мерной колбе вместимостью 25 . Раствор применяют свежеприготовленным.

9.1.3. Стандартный раствор Д-мальтозы моногидрата N 2 с концентрацией 40  готовят разбавлением 10 стандартного раствора N 1 дистиллированной водой в мерной колбе вместимостью 25 . Раствор применяют свежеприготовленным.

9.1.4. Приготовление 0,06%-го раствора антрона: 0,06 г антрона растворяют в серной кислоте (90 концентрированной серной кислоты осторожно приливают к 10 дистиллированной воды, находящейся в термостойком химическом мерном стакане). Раствор применяют свежеприготовленным.

9.2. Подготовка прибора

Подготовку спектрофотометра проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.

9.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость оптической плотности раствора от массы Д-мальтозы моногидрата, устанавливают по шести сериям растворов из пяти параллельных определений для каждой серии растворов для градуировки согласно табл. 1.

Таблица 1

Растворы для установления градуировочной характеристики при определении Д-мальтозы моногидрата

Номер стандарта	Стандартный раствор Д-мальтозы моногидрата N 1,	Стандартный раствор Д-мальтозы моногидрата N 2,	Дистиллированная вода,	Содержание Д-мальтозы моногидрата в градуировочном растворе,
1	0,0	0,0	1,0	0,0
2	0,0	0,5	0,5	20,0
3	0,0	1,0	0,0	40,0
4	0,5	0,0	0,5	50,0
5	0,6	0,0	0,4	60,0
6	0,8	0,0	0,2	80,0
7	1,0	0,0	0,0	100,0

Градуировочные растворы устойчивы в течение часа.

Подготовленные градуировочные растворы перемешивают, добавляют 4 0,06%-го раствора антрона в серной кислоте и нагревают на кипящей водяной бане в течение 5 мин. Затем растворы охлаждают, перемешивают и через 10 мин измеряют оптические плотности растворов в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 630 нм по отношению к раствору сравнения, не содержащему определяемого вещества. Строят градуировочный график: на ось ординат наносят значения оптических плотностей градуировочных растворов, на ось абсцисс - соответствующие им содержания Д-мальтозы моногидрата (мкг).

Проверка градуировочного графика проводится 1 раз в квартал или в случае использования новой партии реактивов и после ремонта прибора.

9.4. Отбор проб воздуха

Воздух с объёмным расходом 10 аспирируют через фильтр АФА-ВП-10, помещенный в фильтродержатель. Для измерения 1/2 ПДК следует отобрать 40 воздуха. Пробы хранят в сухом месте 30 суток.

10. Выполнение измерения

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический бюкс с пришлифованной крышкой вместимостью 25 , приливают 10 дистиллированной воды и оставляют на 15 мин, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтр тщательно отжимают стеклянной палочкой и удаляют. Раствор фильтруют на химической воронке через бумажный фильтр "белая лента" в мерную пробирку вместимостью 10 и доводят дистиллированной водой до 10 . Степень десорбции вещества с фильтра 98%.

Переносят в пробирки 1 анализируемого раствора, обрабатывают аналогично градуировочным растворам и измеряют оптические плотности получаемых анализируемых растворов в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 630 нм по отношению к раствору сравнения, который готовят одновременно и аналогично пробам, используя чистый фильтр.

Количественное определение содержания Д-мальтозы моногидрата проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

Примечание. Фильтрование растворов анализируемых проб проводится для удаления нерастворимых в дистиллированной воде вспомогательных веществ, входящих в состав инъекционной лекарственной формы препарата фосфоглив.

11. Вычисление результатов измерений

Массовую концентрацию Д-мальтозы моногидрата (С, ) в воздухе вычисляют по формуле:

, где

а - количество вещества, найденное в анализируемом объеме раствора по градуировочному графику, мкг;

б - объем раствора пробы, взятой для анализа, ;

в - общий объём раствора анализируемой пробы, ;

V - объём воздуха, отобранного для анализа () и приведенного к стандартным условиям (прилож. 1).

12. Оформление результатов анализа

Результат количественного анализа представляют в виде: , , Р = 0,95. Значение , , где - характеристика погрешности.

13. Контроль погрешности методики КХА

Значения характеристики погрешности, норматива оперативного контроля погрешности и норматива оперативного контроля воспроизводимости приведены в табл. 2.

Таблица 2

Диапазон определяемых концентраций Д-мальтозы моногидрата,	Наименование метрологической характеристики
	характеристики погрешности, , , P = 0,95	норматив оперативного контроля погрешности, К, , (Р = 0,90, m = 3)	норматив оперативного контроля воспроизводимости, D, , (Р = 0,95, m = 2)
5,0-25,0	0,23 + 0,18С	0,32 + 0,20С	0,89 + 0,29С

Метрологические характеристики приведены в виде зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе - С.

13.1. Оперативный контроль погрешности

Оперативный контроль погрешности выполняют в одной серии с КХА рабочих проб.

Образцами для контроля являются реальные пробы воздуха рабочей зоны. Объем отобранной для контроля пробы должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике. После отбора пробы экстракт с фильтра делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы - . Вторую часть разбавляют соответствующим растворителем в два раза и снова делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, - . Во вторую часть делают добавку анализируемого компонента (X) до концентрации исходной рабочей пробы () - общая концентрация не должна превышать верхнюю границу диапазона измерения - и анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой - . Результаты анализа исходной рабочей пробы - , рабочей пробы, разбавленной в два раза, - и рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой - получают по возможности в одинаковых условиях, т.е. их получает один аналитик с использованием одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.

Решение об удовлетворительной погрешности принимают при выполнении условия:

, где

- результат анализа рабочей пробы;

- результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза;

- результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой анализируемого компонента;

Х - величина добавки анализируемого компонента;

К - норматив оперативного контроля погрешности

К = 0,32 + 0,20С ().

13.2. Оперативный контроль воспроизводимости

Образцами для контроля являются реальные пробы воздуха рабочей зоны. Объем отобранной для контроля пробы должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике. После отбора пробы экстракт с фильтра делят на две равные части и анализируют в точном соответствии с прописью методики, максимально варьируя условия проведения анализа, т.е. получают два результата анализа в разных лабораториях или в одной, используя при этом разные наборы мерной посуды, разные партии реактивов. Два результата анализа не должны отличаться друг от друга на величину допускаемых расхождений между результатами анализа:

, где

- результат анализа рабочей пробы;

- результат анализа этой же пробы, полученный в другой лаборатории или в этой же, но другим аналитиком с использованием другого набора мерной посуды и других партий реактивов;

D - допустимые расхождения между результатами анализа одной и той же пробы

D = 0,89 + 0,29С ().

При превышении норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива D выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.

14. Нормы затрат времени на анализ

Для проведения серии анализов из 6 проб требуется 2 ч 30 мин.

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации, Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации

Г.Г. Онищенко