Методические указания МУК 4.1.1651-03 "Спектрофотометрическое измерение массовых концентраций 3-[[6-O-(6-деокси-альфа-L-маннопиранозил)-бета-D-глюкопиранозил]окси]-2-( 3,4-дигидроксифенил)-5,7-дигидрокси-4Н-1-бензопиран-4-она (рутин, рутозид) в воздухе рабочей зоны" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ, Министерством здравоохранения РФ 29 июня 2003 г.)

4.1. Методы контроля. Химические факторы

Методические указания МУК 4.1.1651-03
"Спектрофотометрическое измерение массовых концентраций 3-[[6-O-(6-деокси--L-маннопиранозил)--D-глюкопиранозил]окси]-2-(3,4-дигидроксифенил)-5,7-дигидрокси-4Н-1-бензопиран-4-она (рутин, рутозид) в воздухе рабочей зоны"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ, Министерством здравоохранения РФ 29 июня 2003 г.)

Дата введения: с момента утверждения

1. Область применения

Настоящие методические указания устанавливают количественный спектрофотометрический анализ воздуха рабочей зоны на содержание рутина в диапазоне массовых концентраций 0,05-1,00 .

2. Характеристика вещества

2.1. Структурная формула.

2.2. Эмпирическая формула .

2.3. Молекулярная масса 610,51.

2.4. Регистрационный номер CAS 153-18-4.

2.5. Физико-химические свойства.

Рутин представляет собой зеленовато-желтый мелкокристаллический порошок без запаха и вкуса, темнеющий под действием света, с температурой плавления выше 135°С. Практически нерастворим в воде, малорастворим в 95%-м спирте, труднорастворим в кипящем спирте, практически нерастворим в растворах кислот, эфире, хлороформе, ацетоне и бензоле, растворим в разбавленных растворах едких щелочей.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.6. Токсикологическая характеристика.

Рутин - соединение полифенольной природы с Р-витаминной активностью, относится к группе биофлавоноидов, малоопасен при введении внутрь, практически нетоксичен при внутрибрюшинном поступлении. Обладает специфическими эффектами (гемостатический, антигистаминный, протекция активности адреналина и аскорбиновой кислоты) и общетоксическим действием.

Предельно допустимая концентрация (ПДК) рутина в воздухе рабочей зоны 0,1 ; класс опасности - второй.

3. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений массовой концентрации рутина с погрешностью, не превышающей %, при доверительной вероятности 0,95.

4. Метод измерений

Измерения массовой концентрации рутина выполняют методом спектрофотометрии.

Метод определения основан на способности растворов рутина в 0,1 н водном растворе натрия гидроокиси поглощать УФ-излучение.

Измерение проводят при длине волны 270 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения содержания рутина в анализируемом объеме пробы - 10,0 мкг.

Нижний предел измерения массовой концентрации рутина в воздухе - 0,05 (при отборе 200 воздуха).

Метод специфичен в условиях производства таблеток аскорутина.

Определению не мешают: кислота аскорбиновая, сахар, крахмал картофельный, кальций стеариново-кислый, тальк.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы, растворы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы, растворы.

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Спектрофотометр, Carl Zeiss	Specord М-40,
Весы лабораторные ВЛА-200	ГОСТ 24104-88Е
Аспирационное устройство, модель 822	ГОСТ 2.6.01-86
Фильтродержатели	ТУ 95.72.05-77
Фильтры АФА-ВП-10	ТУ 95-743-80
Колбы мерные, вместимостью 100, 1 000	ГОСТ 1770-74Е
Пипетки, вместимостью 1, 2, 5, 10	ГОСТ 29227-91
Пробирки мерные с пришлифованными пробками, вместимостью 10	ГОСТ 25336-82Е
Бюксы химические с пришлифованными крышками, вместимостью 25	ГОСТ 25336-82Е
Палочки стеклянные	ГОСТ 25336-82Е
Воронки химические, диаметром 30 мм	ГОСТ 25336-82Е
Фильтры бумажные обеззоленные "белая лента", диаметром 5,5 см	ТУ 6-09-1678-77
Кюветы с толщиной оптического слоя 10 мм
Дистиллятор	ТУ 61-1-721-79

5.2. Реактивы, растворы

Рутин с содержанием основного вещества не менее 98,0% в пересчете на сухое вещество
Фармакопея Великобритании (ВР, II, 1980, стр. 35)
Вода дистиллированная	ГОСТ 6709-72
Натрия гидроокись, хч, 0,1 н водный раствор	ГОСТ 4328-77

Допускается применение иных средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими и метрологическими характеристиками и квалификацией, не хуже приведенных в данном разделе.

6. Требования безопасности

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91.

6.3. При выполнении измерений с использованием спектрофотометра соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие обучение и имеющие навыки работы на спектрофотометре.

8. Условия измерений

8.1. Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха ()°С, атмосферном давлении 84-106 кПа и относительной влажности воздуха не более 80%.

8.2. Выполнение измерений на спектрофотометре проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовка спектрофотометра, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

9.1. Приготовление растворов

9.1.1. Основной стандартный раствор рутина с концентрацией 500 готовят растворением 0,0500 г рутина в 0,1 н водном растворе натрия гидроокиси в мерной колбе вместимостью 100 . Раствор используют свежеприготовленным.

9.1.2. Стандартный раствор рутина N 1 с концентрацией 100 готовят разбавлением 20 основного стандартного раствора 0,1 н водным раствором натрия гидроокиси в мерной колбе вместимостью 100 . Раствор используют свежеприготовленным.

9.1.3. Стандартный раствор рутина N 2 с концентрацией 20 готовят разбавлением 20 стандартного раствора N 1 0,1 н водным раствором натрия гидроокиси в мерной колбе вместимостью 100 . Раствор используют свежеприготовленным.

9.1.4. Приготовление 0,1 н водного раствора натрия гидроокиси 4,0 г натрия гидроокиси растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 1 000 . Раствор хранят в течение 2 недель.

9.2. Подготовка прибора

Подготовку спектрофотометра проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.

9.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость оптической плотности раствора от массы рутина, устанавливают по шести сериям растворов из пяти параллельных определений для каждой серии согласно табл. 1.

Таблица 1

Растворы для установления градуировочной характеристики при определении рутина

Номер стандарта	Стандартный раствор рутина N 1,	Стандартный раствор рутина N 2,	0,1 н водный раствор натрия гидроокиси,	Содержание рутина в градуировочном растворе, мкг
1	0,0	0,0	10,0	0,0
2	0,0	0,5	9,5	10,0
3	0,0	1,0	9,0	20,0
4	0,0	1,5	8,5	30,0
5	0,5	0,0	9,5	50,0
6	1,0	0,0	9,0	100,0
7	2,0	0,0	8,0	200,0

Градуировочные растворы используют свежеприготовленными.

Подготовленные градуировочные растворы перемешивают и через 10 мин измеряют оптические плотности растворов в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 270 нм по отношению к раствору сравнения, не содержащему определяемого вещества.

Строят градуировочный график: на ось ординат наносят значения оптических плотностей градуировочных растворов, на ось абсцисс - соответствующие им содержания рутина (мкг).

Проверка градуировочного графика проводится 1 раз в квартал или в случае использования новой партии реактивов, оборудования и после ремонта прибора.

9.4. Отбор проб воздуха

Воздух с объёмным расходом 20 аспирируют через фильтр АФА-ВП-10, помещенный в фильтродержатель. Для измерения 1/2 ОБУВ следует отобрать 200 воздуха. Пробы можно хранить в химических бюксах с пришлифованными крышками в защищенном от света месте при комнатной температуре не более трех суток.

10. Выполнение измерения

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический бюкс с пришлифованной крышкой вместимостью 25 , приливают 5 0,1 н водного раствора натрия гидроокиси и оставляют на 15 мин, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтр тщательно отжимают, помещают в другой химический бюкс и повторно обрабатывают 5 того же растворителя. Фильтр снова тщательно отжимают и удаляют. Оба раствора последовательно фильтруют на химической воронке через бумажный фильтр "белая лента" в мерную пробирку вместимостью 10 , и доводят 0,1 н водным раствором натрия гидроокиси до метки. Степень десорбции вещества с фильтра 97%.

Оптическую плотность получаемых анализируемых растворов измеряют в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 270 нм по отношению к раствору сравнения, который готовят одновременно и аналогично пробам, используя чистый фильтр.

Количественное определение содержания рутина проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

Примечание. Фильтрование растворов анализируемых проб проводится для удаления нерастворимых в 0,1 н водном растворе натрия гидроокиси вспомогательных веществ, входящих в состав таблеток аскорутина.

11. Вычисление результатов измерений

Массовую концентрацию рутина (С, ) в воздухе рабочей зоны вычисляют по формуле:

, где

а - количество вещества, найденное в анализируемом объеме раствора по градуировочному графику, мкг;

V - объём воздуха, отобранного для анализа () и приведенного к стандартным условиям (прилож. 1)

12. Оформление результатов анализа

Результат количественного анализа представляют в виде: , , Р = 0,95. Значение , , где - характеристика погрешности.

13. Контроль погрешности методики КХА

Значения характеристики погрешности, норматива оперативного контроля погрешности и норматива оперативного контроля воспроизводимости приведены в табл. 2.

Таблица 2

Диапазон определяемых массовых концентраций рутина,	Наименование метрологической характеристики
	характеристика погрешности, , , P = 0,95	норматив оперативного контроля погрешности, К, , (Р = 0,90, m = 3)	норматив оперативного контроля воспроизводимости, D, , (P = 0,95, m = 2)
0,05-1,0	0,00026 + 0,15С	0,00098 + 0,19С	0,001 + 0,27С

Метрологические характеристики приведены в виде зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе - С.

13.1. Оперативный контроль погрешности

Оперативный контроль погрешности выполняют в одной серии с КХА рабочих проб.

Образцами для контроля являются реальные пробы воздуха рабочей зоны. Объем отобранной для контроля пробы должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике. После отбора пробы экстракт с фильтра делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы - . Вторую часть разбавляют соответствующим растворителем в два раза и снова делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, - . Во вторую часть делают добавку анализируемого компонента (X) до массовой концентрации исходной рабочей пробы () - общая концентрация не должна превышать верхнюю границу диапазона измерения - и анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой - . Результаты анализа исходной рабочей пробы - , рабочей пробы, разбавленной в два раза, - и рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой - получают по возможности в одинаковых условиях, т.е. их получает один аналитик с использованием одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.

Решение об удовлетворительной погрешности принимают при выполнении условия:

, где

- результат анализа рабочей пробы;

- результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза;

- результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой анализируемого компонента;

X - величина добавки анализируемого компонента;

К - норматив оперативного контроля погрешности

К = 0,00098 + 0,19С ().

13.2. Оперативный контроль воспроизводимости

Образцами для контроля являются реальные пробы воздуха рабочей зоны. Объем отобранной для контроля пробы должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике. После отбора пробы экстракт с фильтра делят на две равные части и анализируют в точном соответствии с прописью методики, максимально варьируя условия проведения анализа, т.е. получают два результата анализа в разных лабораториях или в одной, используя при этом разные наборы мерной посуды, разные партии реактивов. Два результата анализа не должны отличаться друг от друга на величину допускаемых расхождений между результатами анализа:

, где

- результат анализа рабочей пробы;

- результат анализа этой же пробы, полученный в другой лаборатории или в этой же, но другим аналитиком с использованием другого набора мерной посуды и других партий реактивов;

D - допустимые расхождения между результатами анализа одной и той же пробы

D = 0,001 + 0,27С ().

При превышении норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива D выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.

14. Нормы затрат времени на анализ

Для проведения серии анализов из 6 проб требуется 2 ч 30 мин.

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации, Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации

Г.Г. Онищенко